Isolation and identification of alga-lytic bacteria were carried out. Fifteen isolates of alga-lytic bacteria were screened by the double layer method using A. cylindrica NIES-19 as a sole nutrient and four isolates among them were compared with their alga-lytic activity. The isolate AK-05 exhibiting the highest alga-lytic activity was identified as Acidovorax temperans base on its 16S rDNA sequence. The culture supernatant of the isolate AK-05 was reliable for the alga-lytic. Alga-lytic activity assays of culture supernatant revealed that the major substances for alga-lytic activity were non-proteins and heat stable. The highest alga-Iytic activity was practical under alkaline conditions and at 25${\sim}$$30^{\circ}C$. It is indicating an advantage for the application of water blooms by cyanobacteria in eutrophic lakes where the pH is generally in alkaline region.
Environmental DNA (eDNA) can exist in both intracellular and extracellular forms in natural ecosystems. When targeting harmful cyanobacteria, extracellular eDNA indicates the presence of traces of cyanobacteria, while intracellular eDNA indicates the potential for cyanobacteria to occur. However, identifying the "actual" potential for harmful cyanobacteria to occur is difficult using the existing sediment eDNA analysis method, which uses silica beads and cannot distinguish between these two forms of eDNA. This study analyzes the applicability of a density gradient centrifugation method (Ludox method) that can selectively analyze intracellular eDNA in sediment to overcome the limitations of conventional sediment eDNA analysis. PCR was used to amplify the extracted eDNA based on the two different methods, and the relative amount of gene amplification was compared using electrophoresis and Image J application. While the conventional bead beating method uses sediment as it is to extract eDNA, it is unknown whether the mic gene amplified from eDNA exists in the cyanobacterial cell or only outside of the cell. However, since the Ludox method concentrates the intracellular eDNA of the sediment through filtration and density gradient, only the mic gene present in the cyanobacteria cells could be amplified. Furthermore, the bead beating method can analyze up to 1 g of sediment at a time, whereas the Ludox method can analyze 5 g to 30 g at a time. This gram of sediments makes it possible to search for even a small amount of mic gene that cannot be searched by conventional bead beating method. In this study, the Ludox method secured sufficient intracellular gene concentration and clearly distinguished intracellular and extracellular eDNA, enabling more accurate and detailed potential analysis. By using the Ludox method for environmental RNA expression and next-generation sequencing (NGS) of harmful cyanobacteria in the sediment, it will be possible to analyze the potential more realistically.
Unusual bloom of toxic cyanobacteria in water bodies have drawn attention of environmentalists world over. Major bloom of Anabaena, Microcystis in water storage reservoir, rivers and lake leading to adverse health effects have been reported from Australia, England and many part of the world. These cyanobacterial cells can release intercellular matter like toxin in water and these intercellular matter can increase the concentration of organic matter. Cellysis can occur when algal cells meet the disinfectants like chlorine in water treatment plant and the resultant rising up of DOC(Dissolved Organic Carbon) or TOC(Total Organic Carbon) can increase the formation of disinfection by products. Disinfectants that kill microorganisms react with the organic or inorganic matter in raw water. In general disinfectants oxidize the matter in raw water and the resultant products can be harmful to human. There are always conflict about which is more important, disinfection or minimizing disinfection by products. The best treatment process for raw water is the process of the lowest disinfection by products and also the the lowest microorganism. In this study the cultured cells, Microcytis Aeruginosa(MA), Anabaena Flos-aquae(AF), Anabaena Cylindrica(AC), and the cells obtained in Daechung Dam(DC) whose dominant species was Anabaena Cylindrica were subjected to chlorination. Chlorination oxidizes inorganic and organic compounds and destruct live cells in raw water. Chloroform was analyzed for the cultured cells which were treated with $20mg/\ell$ dose of chlorine. In general chloroform is easily formed when dissolved organic matter react with chlorine. The cultured cells contributes the concentration of dissolved organic carbon and also that of total organic carbon which might be potent precusors of chloroform formed. The correlations of the concentration of chloroform, DOC and TOC were investigate in this study.
Park, Hae-Kyung;Shin, Ra-Young;Lee, Haejin;Lee, Kyung-Lak;Cheon, Se-Uk
Journal of Korean Society on Water Environment
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v.31
no.3
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pp.286-294
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2015
Temporal and spatial characteristics of cyanobacterial communities at the monitoring stations for Harmful Algal Bloom Alert System (HABAS) in Nakdong River and Lake Dukdong were investigated for two years (2013 to 2014). A total of 30 cyanobacterial species from 14 genera were found at the survey stations. Microcystis sp. showed maximum cell density in the total cyanobacterial community in August, 2014 at ND-2 and in September, 2013 at ND-3 station. Lynbya limnetica and Geitlerinema sp., non-target species for alert criteria showed maximum cell density at ND-1 (August, 2013) and Dam station of Lake Dukdong (September, 2014), respectively. Total cyanobacterial cell density and the relative abundance of four target genera (Microcystis, Anabaena, Aphanizomenon and Oscillatoria spp.) for alert criteria was relatively lower in the mesotrophic Lake Dukdong than at the eutrophic riverine stations of Nakdong River, indicating cyanobacterial density and the RA of target genera is affected by the trophic state of the monitoring stations. Simulating the alert system using phycocyanin concentration as an alert criterion resulted in the longer period of alert issued compared to the period of alert issued using the current criterion of harmful cyanobacterial cell density due to the influence of phycocyanin concentration from non-target cyanobacterial species.
Park, Myung-Hwan;Suh, Mi-Yeon;Hwang, Soon-Jin;Kim, Yong-Jae;Han, Myung-Soo;Kim, Baik-Ho
Korean Journal of Ecology and Environment
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v.41
no.1
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pp.54-65
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2008
The seasonal dynamics of phytoplankton and water quality were evaluated bimonthly at 7 park ponds in the capital region from October 2004 to August 2005. With out the change of water temperature $(0.4\sim26.0^{\circ}C)$, cyanobacteria dominated in park ponds such as Gyungbokgung Gyunghyaeru and Seokchon reservoir. The standing crops of phytoplankton was significant related with cell densities of cyanobacteria (r=0.993), while they did not significant correlation with environmental factors. Almost of all park ponds in the capital region were classified as eutrophic state with high TP concentrations and TN/TP ratios less than 10. Major dominant cyanobacteria were as followed; Anabaena sp., Aphanocapsa elachista, Lyngbya contorta, Merismopedia elegans, Microcystis aeruginosa, M. wesenbergii, Microcystis sp., Oscillatoria sp., Phormidium tenue, and Plectonema sp. To date, although the concentration of chlorophyll-${\alpha}$ and cyanobacterial densities in the capital region was below the 'danger' level of WHO guidelines value, the monitoring of cyanobacterial densities and its toxin (microcystin) in recreational/bath water should be continued.
We demonstrated the quantitative detection of a toxin-producing Microcystis aeruginosa (M. aeruginosa) strain with the laboratory protocol of the NanoGene assay. The NanoGene assay was selected because its laboratory protocol is in the process of being transplanted into a portable system. The mcyD gene of M. aeruginosa was targeted and, as expected, its corresponding fluorescence signal was linearly proportional to the mcyD gene copy number. The sensitivity of the NanoGene assay for this purpose was validated using both dsDNA mcyD gene amplicons and genomic DNAs (gDNA). The limit of detection was determined to be 38 mcyD gene copies per reaction and 9 algal cells/ml water. The specificity of the assay was also demonstrated by the addition of gDNA extracted from environmental algae into the hybridization reaction. Detection of M. aeruginosa was performed in the environmental samples with environmentally relevant sensitivity (${\sim}10^5$ algal cells/ml) and specificity. As expected, M. aeruginosa were not detected in nonspecific environmental algal gDNA over the range of $2{\times}10^0$ to $2{\times}10^7$ algal cells/ml.
Although flotation techniques are often used for the removal of algal particles, the practicality of algae-harvesting technologies is limited owing to the complex and expensive facilities and equipment required for chemical coagulation. Here, we examined the feasibility of an approach to separating algal particles from water bodies without the need for chemical coagulants, depending on the condition of the algae, and to determine the optimal conditions. Using Anabaena sp., a cyanobacterium causes algal blooms in lakes, we stimulated auto-flocculation in algal particles without coagulants and conducted solid-liquid separation experiments of algal particles under various conditions. The six cultivation columns included in our analysis comprised four factors: Water temperature, light intensity, nutrients, and carbon source; auto-flocculation was induced under all treatments, with the exception of the treatment involving no limits to all factors, and algal particles were well-settled under all conditions for which auto-flocculation occurred. Meanwhile, flotation removal of auto-flocculated algal particles was attained only when nutrients were blocked after algae were grown in an optimal medium. However, no significant differences were detected between the functional groups of the extracellular polymeric substances (EPSs) of floated and settled algal particles in the FT-IR peak, which can cause attachment by collision with micro-bubbles.
Algae bloom occurred in reservoir in summer can cause taste and odor in water and disturb the flocculation and sedimentation processes in water treatment plant and cause sand filter plugging. It was also reported that microcystins, anatoxin and saxitoxin released from cyanobacteria had acute toxic effects on liver and nervous system. For these reasons, many advanced countries inclusive of WHO set the guideline for these toxins and cyanotoxins have been managed with regular monitoring in Korea as well. However, complex sample preparation steps such as a solid phase extraction (SPE) and derivatization are required with an existing analysis method with HPLC. We needed to improve an analysis method for low extraction efficiency and long sample preparation time. In this study, we have established a new LC/MS/MS method which can simultaneously determine 6 cyanotoxins (Microcystins-LR, Microcystins-RR, Microcystins-YR, Anatoxin-a, Saxitoxin, Neosaxitoxin) with only simple filtration step. When $75{\mu}L$ filterated sample was injected onto the LC-MS/MS, the recovery ranged from 86% to 112% and the MDL was $0.025{\sim}0.581{\mu}g/L$. We can make the MDL be lower than the guideline ($1{\sim}3{\mu}g/L$) of advanced countries with simple preparation.
Park, Jungsu;Kim, Yongje;Kim, Minjae;Lee, Woo Hyoung
Environmental Engineering Research
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v.24
no.3
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pp.397-403
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2019
Microcystis sp. is one of the most common harmful cyanobacteria that release toxic substances. Counting algal cells is often used for effective control of harmful algal blooms. However, Microcystis sp. is commonly observed as a colony, so counting individual cells is challenging, as it requires significant time and labor. It is urgent to develop an accurate, simple, and rapid method for counting algal cells for regulatory purposes, estimating the status of blooms, and practicing proper management of water resources. The flow cytometer and microscope (FlowCAM), which is a dynamic imaging particle analyzer, can provide a promising alternative for rapid and simple cell counting. However, there is no accurate method for counting individual cells within a Microcystis colony. Furthermore, cell counting based on two-dimensional images may yield inaccurate results and underestimate the number of algal cells in a colony. In this study, a three-dimensional cell counting approach using a novel model algorithm was developed for counting individual cells in a Microcystis colony using a FlowCAM. The developed model algorithm showed satisfactory performance for Microcystis sp. cell counting in water samples collected from two rivers, and can be used for algal management in fresh water systems.
Ha, Rim;Nam, Gibeom;Park, Sanghyun;Kang, Taegu;Shin, Hyunjoo;Kim, Kyunghyun;Rhew, Doughee;Lee, Hyuk
Korean Journal of Remote Sensing
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v.33
no.2
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pp.111-123
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2017
The phycocyanin pigment (PC) is a marker for cyanobacterial presence in eutrophic inland water. Accurate estimation of low PC concentration in turbid inland water is challenging due to the optical complexity and criticalforissuing an early warning of potentialrisks of cyanobacterial bloom to the public. To monitor cyanobacterial bloom in eutrophic inland waters, an approach is proposed to partition non-water absorption coefficient from measured reflectance and to retrieve absorption coefficient of PC with the aim of improving the accuracy in remotely estimated PC, in particular for low concentrations. The proposed inversion model retrieves absorption spectra of PC ($a_{pc}({\lambda})$) with $R^2{\geq}0.8$ for $a_{pc}(620)$. The algorithm achieved more accurate Chl-a and PC estimation with $0.71{\leq}R^2{\leq}0.85$, relative root mean square error (rRMSE) ${\leq}39.4%$ and mean relative error(RE) ${\leq}78.0%$ than the widely used semi-empirical algorithm for the same dataset. In particular, low PC ($PC{\leq}50mg/m^3$) and low PC: Chl-a ratio values of for all datasets used in this study were well predicted by the proposed algorithm.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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