• 생명과학회지
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• 제8권5호
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• pp.614-621
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• 1998

열안정성 inulinase를 분비하는 Penicillium sp.를 돼지 감자 서식지의 토양으로부터 분리하여 이 균주의 inulinase를 50%-80% 염석, DEAE-Sephacel column chromatography, Toyopearl HW 65 F column chromatography에 의해 정제하여 inulinase 활성을 가진 단일 band를 얻었다. 이 band의 단백질을 polya-cryamide gel electrophoresis 후 추출하여 inulinase 활성을 가지는 것으로 확인되었다. 이 단백질의 분자량은 SDS-PAGE에 의해 약 77,000 dalton으로 추정되었고, 최종 정제도는 53.3배이었다. 정제된 효소의 효소학적 성질을 조사한 결과, 최적온도는 약 6$0^{\circ}C$이었고, 열 안정성은 30-5$0^{\circ}C$에서 비교적 안정하였다. pH 4에서 가장 높은 활성을 나타냈으며, pH 4-5에서는 비교적 안정했고 염기성에서는 아주 낮은 활성을 나타내었다. 금속이온과 다른 화학물질의 영향을 조사한 결과 1mM의 $MnCl_2$와 $CaCl_2$에 의해 활성이 증가했으며 특히, $MnCl_2$는 1.7배까지 활성을 증가시켰다. 그러나, 1mM의 $CuCl_2$,$HgCl_2$와 1mM EDTA 시에는 활성이 저해되었다. TLC분석결과 모든 산물이 monosaccharide였으므로 이 효소는 exo-acting inu-linase로 추정되었고, inulin에 대한 이 효소의 $K_M$치는 $2.2\times10^{-3}$이었다. 이 효소의 결정된 N-terminal 아미노산 배열은 $NH_2$-X-Glu-Tyr-Thr-Glu-Lys/Leu-Tyr-Arg-Pro이다.

• 한국식품과학회지
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• 제15권4호
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• pp.333-341
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• 1983

도토리 부패물로부터 분리한 Aspergillus sp, AN-11 균주가 분비하는 tannase를 일련의 ammonium S-ulfate에 의한 침전, DEAE-Cellulose Column Chromatography 및 Sephadex G-200 gel filtration 방법에 의하여 정제하여 물리화학적 성질을 규명하였다. 정제된 tannase 는 비활성(比活性)이 조(粗)tannase에 비하여 37 배정도 증가되었으며, 효소활성이 회수(回收)는 약 49%이었다. 정제된 tannase 는 polyacrylamide gel 전기영동에 의한 균일성을 나타내었고, SDS-polyacrylamide gel 전기영동에서는 단일 밴드를 형성하는 두개의 동일한 subunits로 분리되었으며, 본 도토리 tannin 분해효소의 분자량은 200,000 정도로 계산되었다. 정제된 tannase는 전형적인 단백질 UV흡수 스펙트럼을 나타내었으며, 한편 최적 pH 몇 온도는 5.5 와 $30{\sim}40^{\circ}C$이었고 pH $5.0{\sim}6.5$와 온도 $30^{\circ}C$ 이하의 범위 내에서 비교적 안정성을 보였으며, $CuCl_2$ 및 $ZnCl_2금속염에 의해서는 효소활성이 크게 저해되었다. 또한 정제된 tannase의 Km 값은 $7.58{\times}10^{-4}M$이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권5호
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• pp.551-558
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• 1992

Streptomyces sp. S56으로부터 endoinulase를 생산하고 정제하여 물화학적으로 성질을 조사하였다. 조효소는 DEAE-cellulose column chromatography 및 Sephadex G-200 gel filtration에 의하여 정제하였으며, 정제된 효소는 polyacrylamide gel 전기영동결과 단일 band로 나타나서 전기영동상 순수하게 분리되었다. 정제효소의 최적 pH는 5.5-6.0, 최적온도는 $50^{\circ}C$였으며, 최적 온도에서의 열안정성은 1시간 처리후 42%의 잔류활성을 보였다. 정제효소는 금속이온 중 $Mn^{2+}$에 의해서는 활성이 증가되었으나, $Ag^{+}$, $Hg^{+}$, $Cu^{2+}$, $Zn^{2+}$, $Fe^{3+}$, $Mo^{6+}$ 에 의해서는 활성이 50% 이상 감소하였다. EH한 EDTA, 8-hydroxyquinoline에 의하여 활성이 저해되는 것으로 보아 metalloenzyme인 것으로 추정되었다. 본 효소는 inulin 내부의 $\beta$-2,1 결합을 가수분해하여 fructose oligomer를 생산하는 inulase 활성만을 가지고 있었으며 invertase 및 $\alpha$-glucosidase 활성은 나타내지 않았다. Inulin에 대한 Km값은 0.287mM, $V_{max}$ $0.109{\mu}mol/min$이었다. 효소의 촉매작용에 관하여는 amino acid residue는 tryptophan로 추정되었으며 그 외에 arginine, tyrosine, lysine, methionine, histidine, cysteine 및 cystine의 chemical modification 실험결과 효소활성저해가 나타나지 않아 이들 amino acid residue는 효소작용에 직접적으로 관여하지 않는 것으로 추정되며 carboxyl기도 효소활성에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.

• 한국식품과학회지
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• 제15권3호
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• pp.245-251
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• 1983

쌀막걸리 담금중의 핵산분해효소들의 소장과 이효소들을 DEAE-cellulose column chromatography에 의해 분리정제하고 일반적인 성질을 검토함은 물론 핵산관련물질의 변화를 조사한 결과는 다음과 같았다. 1. 담금일수가 경과함에 따라 RNase는 담금 3 일까지 다소 증가하였다가 그후 점차 감소하였으며 PDase 및 PMase는 초기부터 활성이 감소하였다. 2. RNase의 최적pH는 5.0부근이었고, PDase, PMase는 6.0부근이었으며 pH안정성은 대체로 $pH6.0{\sim}7.0$부근이었다. 3. RNase 및 PDase의 최적온도는 $55{\sim}60^{\circ}C$이고, PMase는 50부근이었으며 열안정성은 RNase는 $100^{\circ}C$ PDase는 $80^{\circ}C$에서 10분간반응으로 각각 80%, 90%실활되었으며 PMase는 $70^{\circ}C$에서 10분간 반응으로 거의 샐활되었다. 4. RNase는 $CU^{++},\;Zn{++}$, PMase는 $10^{-3}M\;Na_{2}HPO_{4}$처리로서 약 30%의 효소활성이 저해되었다. 5. 술덧담금 4일째까지 IMP는 증가하였으며 UMP, GMP, AMP는 감소하는 경향을 보였다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제15권3호
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• pp.276-285
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• 1986

능이 [Sarcodon aspratus (Berk.) S. Ito]로부터 단백질가수분해(蛋白質加水分解) 효소(酵素)를 분리 정제하여 그 특성을 조사하였다. 본 효소는 Tri-acryl CM-cellulose, Ultrogel AcA 54, Hydroxy apatite column chromatography와 preparative isoelectric focusing 방법으로 순차 정제되었고, 정제된 효소는 PAGE상에서 단일 band를 나타내었으며 활성(活性)은 62.5O.D/mg.protein으로 조효소(粗酵素)보다 8.01배 증가하였다. 작용최적(作用最適) pH는 10.1로 alkaline protease였으며 작용최적(作用最適) 온도(溫度)는 $57^{\circ}C$부근이었다. $50^{\circ}C$ 이하의 온도(溫度)와 pH $4.0{\sim}10.8$ 범위에서 안정(安定)하였으나, $60^{\circ}C$에서 30분후 26%, $65^{\circ}C$에서는 65%가 실활(失活)되었다. $Mn^{++}$은 효소의 활성(活性)을 증가시켰으나 $Hg^{++}$와 $Cu^{++}$는 현저히 저해시켰다. SDS-PAGE에 의해 분자량(分子量)은 30,100으로 측정되었고, monomer임이 확인되었다. 등전점(等電点)은 9.80이었다.

• 대한예방한의학회지
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• 제17권3호
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• pp.165-176
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• 2013

Objective : The purpose of this study was to establish the simultaneous analysis for six compounds in Gumiganghwal-tang (GMGHT, Jiuweiqianghuo-tang) and to investigate the anti-atherosclerotic effects of GMGHT in vitro. Methods : The column for separation of six compounds was used Luna $C_{18}$ column and maintained at $40^{\circ}C$. The mobile phase for gradient elution consisted of two solvent systems, 1.0% acetic acid in water and 1.0% acetic acid in acetonitrile. The analysis was carried out at a flow rate of 1.0 mL/min with pothodiode array (PDA) detection at 254, 280, and 320 nm. The injection volume was 10 ${\mu}L$. The antioxidant activities of GMGHT were evaluated by measuring free radical scavenging activities on 2,2'-Azinobis-3-ethyl-benzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) and 1-1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH). The inhibitory effects on low-density lipoprotein (LDL) oxidation were evaluated by the formation of thiobarbituric acid relative substances (TBARS), relative electrophoretic mobility (REM), and fragmentation of apolipoprotein B (ApoB)-100. Results : Calibration curves were acquired with $r^2{\geq}0.9998$. The contents of liquiritin, ferulic acid, baicalin, baicalein, glycyrrhizin, and wogonin in GMGHT were 1.784, 1.693, 37.899, 0.258, 1.869, and 0.034 mg/g, respectively. The GMGHT showed the radical scavenging activity in a dose-dependent manner. The concentration required for 50% reduction ($RC_{50}$) against ABTS and DPPH radicals were 72.51 ${\mu}g/mL$ and 128.49 ${\mu}g/mL$. Furthermore, GMGHT reduced the oxidation properties of LDL induced by $CuSO_4$. Conclusion : HPLC-PDA is considered as an available and convenient method for quality control and standardization of GMGH and GMGHT has potentials on anti-atherosclerosis by anti-oxidative effect and suppressive effect on LDL oxidation.

• 한국신재생에너지학회:학술대회논문집
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• 한국신재생에너지학회 2010년도 춘계학술대회 초록집
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• pp.110.1-110.1
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• 2010

A bench scale slurry bubble column reactor (SBCR) with active-Fe based catalyst was developed for the Fischer-Tropsch synthesis (FTS) reaction. Considering the highly exothermic reaction heat generated in the bench scale SBCR, an effective cooling system was devised consisting of a U-type dip tube submerged in the reactor. Also, the physical and chemical properties of the catalyst were controlled so as to achieve high activity for the CO conversion and liquid oil ($C_{5+}$) production. Firstly, the FTS performance of the FeCuK/$SiO_2$ catalyst in the SBCR under reaction conditions of $265^{\circ}C$, 2.5 MPa, and $H_2/CO=1$ was investigated. The CO conversion and liquid oil ($C_{5+}$) productivity in the reaction were 88.6% and 0.226 $g/g_{cat}-h$, respectively, corresponding to a liquid oil ($C_{5+}$) production rate of 0.03 bbl/day. To investigate the FTS reaction behavior in the bench scale SBCR, the effects of the space velocity and superficial velocity of the synthesis gas and reaction temperature were also studied. The liquid oil production rate increased upto 0.057 bbl/day with increasing space velocity from 2.61 to 3.92 $SL/h-g_{Fe}$ and it was confirmed that the SBCR bench system developed in this research precisely simulated the FTS reaction behavior reported in the small scale slurry reactor.

• 한국지하수토양환경학회지:지하수토양환경
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• 제19권5호
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• pp.1-8
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• 2014

The metals contamination of farmland soil nearby abandoned metal mine was serious problem in Korea. Stabilization of contaminated soil was reported using various stabilizers. Application of limestone and steel refining slag was reported as effective stabilizers in the stabilization of metals. The batch studies confirmed that the mixture of limestone and steel refining slag was suitable for stabilization of metals in contaminated soil. The limestone and steel refining slag mixture (2 : 1 and 3 : 2) were used in column studies and it was confirmed that the stabilizers effectively stabilized heavy metals in contaminated soil. The pH of the soil was increased with the addition of stabilizers. Total leached concentration of metals from the column study was reduced 44, 17, and 93% in comparison to the control at arsenic, cadmium and copper, respectively. The sequential extraction studies showed that the exchangeable fraction was changed into carbonate bound fraction (Cd and Cu) and Fe-Mn oxide bound fraction (As). Based on the results we confirmed that 2:1 ratio of limestone and steel refining slag effectively stabilizes the heavy metals. The mixed treatment of lime stone with steel refining slag would be an effective and feasible method for controlling metals leaching in contaminated soil.

• BMB Reports
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• 제33권2호
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• pp.172-178
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• 2000

The lipoxygenase was purified 35 fold to homogeneity from the Korean red potato by an ammonium sulfate precipitation and DEAE-cellulose column chromatography. The simple purification method is useful for the preparation of pure lipoxygenase. The molecular weight of the enzyme was estimated to be 38,000 by SDS-polyacrylamide gel electrophoreses and Sepharose 6B column chromatography. The purified enzyme with 2 M $(NH_4)_2SO_4$ in a potassium phosphate buffer, pH 7.0, was very stable for 5 months at $-20^{\circ}C$. Because the purified lipoxygenase is very stable, it could be useful for the screening of a lipoxygenase inhibitor. The optimal pH and temperature for lipoxygenase purified from the red potato were found to be pH 9.0. and $30^{\circ}C$, respectively. The Km and Vmax values for linoleic acid of the lipoxygenase purified from the red potato were $48\;{\mu}M$ and $0.03\;{\mu}M$ per minute per milligram of protein, respectively. The enzyme was insensitive to the metal chelating agents tested (2 mM KCN, 1 and 10mM EDTA, and 1 mM $NaN_3$), but was inhibited by several divalent cations, such as $Cu^{++}$, $Co^{++}$ and $Ni^{++}$. The essential amino acids that were involved in the catalytic mechanism of the 5-lipoxygenase from the Korean red potato were determined by chemical modification studies. The catalytic activity of lipoxygenase from the red potato was seriously reduced after treatment with a diethylpyrocarbonate (DEPC) modifying histidine residue and Woodward's reagent (WRK) modifying aspartic/glutamic acid. The inactivation reaction of DEPC (WRK) processed in the form of pseudo-first-order kinetics. The double-logarithmic plot of the observed pseudo-first-order rate constant against the modifier concentration yielded a reaction order 2, indicating that two histidine residues (carboxylic acids) were essential for the lipoxygenase activity from the red potato. The linoleic acid protected the enzyme against inactivation by DEPC(WRK), revealing that histidine and carboxylic amino acids residues were present at the substrate binding site of the enzyme molecules.

• 미생물학회지
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• 제31권3호
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• pp.230-236
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• 1993

Micrococcus luteus 가 생산하는 isocitrate lyase 의 효소단백질을 ammonium sulfate precipitation, DEAE-cellulose, DEAE-sephacel, 1차 Sephadex G-200, 2 차 Sephadex G-200 column chromatography 과정을 통하여 분리 정제하였으며 정제된 효소의 분자량과 효소학적 특성을 조사하였다. 정제된 isocitrate lyase 는 상기 정제 과정을 통하여 10.2%의 회수율과 38.8 의 정제도를 나타내었으며, 전기영동시 단일밴드를 얻을 수 있었고, SDS-PAGE 에 의해 측정된 분자량을 약 60,000이며 1개의 subunit 로 나타났다. 본 효소의 최적 pH 는 7.5이었으며, 최적 온도는 $40^{\circ}C$ 부근이었고 $45^{\circ}C$까지는 안정하였다. 2가 금속염의 첨가시$ Mg^{2+}$ 를 제외한 다른 금속이온들은 효소활성을 저해하는 것으로 나타났으며 $Mg^{2+}$의 농도는 5 mM 에서 최대활성을 나타내었다. 또한 기질인 DL-isocitrate 의 $K_{m}$ 치는 0.95 mM 로 나타났으며, thiol 화합물의 첨가시 cysteine 은 1mM, glutathione과 $\beta$-mercaptoethanol 은 5 mM 의 농도에서 효소활성이 최대에 달하였다.