$\beta$-fluoroethylacetate를 흰쥐의 복강에 투여하여 krebs cycle이 blocking된 것을 확인하고 이보 인해 각 조직 에서 생성되는 superoxide radical과 SOD의 할성도 변화를 관찰하였다. $\beta$-fluoroethylacetate을 투여한지 1- 3 시간 사이에 모든 장기에서 citrate의 축적농도가 가장 높았으며, 특히 heart외 spleen에서 12배 빛 20배로 가장 높았고, aconltase의 환성도는 한시간 후에 30-35%까지 억제되었고 시간의 경과에 따라 큰 변화는 없었다. 그리고 혈중 glucose의 함량은 계속증가되어 5 시간 후에 612mg/dl로 정상에 비해 1.6배 증가되었다. $\beta$-fluoroe thylacetate을 투여하고 1-2시간 후에 모든 장기에서 superoxide radical이 생성되었고 heart에서는 O. 26$\mu$mole/g호 가장 높았고, SOD의 총활성도는 1-3시간후에 활성이 가장 높았으며, heart에 있는 이 효소가 한 시간후 에 약 4 배로 가장 많이 증가되었다. Mn-SOD는 한시간 후에 모든 조직 에서 증가되였고 Kidney 가 가장 높은 활성도의 변화를 보였다. 이상의 결과로 흰쥐에서 Krebs cycle 이 차단되면 거의 모든 장기에서 superoxide radioal이 생성되며 Cu, Zn 및 Mn- SOD의 활성도가 모두 증가되고 특히 heart에시 가장 큰 변화를 보임을 알 수 있었다.
경남 김해에서 수확되는 부추의 가공에 기초자료로 활용하기 위하여 초벌 2벌, 3벌, 4벌, 5벌에 재배되는 부추의 성분들을 분석하였다. 부추의 엽록소 함량은 2벌 762.54, 3벌 775.09, 4벌 763.71, 5벌 798.47mg%로 5벌에서 가장 많이 함유되어 있었다. 무기질 함량은 초벌 부추에서 철, 칼륨, 구리의 함량은 각 10.61, 627.13, 0.14mg%로써 가장 높았으며 수확횟수가 증가함에 따라 감소하였고 칼슘, 망간, 인, 아연, 나트륨의 함량은 각 117.34, 1.27, 92.61, 0.73, 21.52 mg%로 5벌에서 가장 높은 간을 나타내었다. 중금속오염을 나타내는 납은 검출되지 않았다. SOD 유사활성은 2벌 1600, 3벌 1357.32, 4벌 1317.65, 5벌 1291.71unit/g으로 2벌에서 가장 높은 값을 나타내었으며 수확이 거듭될수록 활성이 낮아지는 경향을 보였다.
Flavonoids are class of polyphenolic compounds widely distributed in the plant kingdom, which display a variety of biological activities, including antiviral, antithrombotic, antiinflammatory, antihistaminic, antioxidant and free-radica 1 scavenging abilities. The antioxidant enzyme (AOE) system plays an important role in the defense against oxidative stress insults. To determine whether flavonoid, myricetin can exert antioxidative effects not only directly by modulating the AOE system but also scavenging free radical, we investigated the influence of the flavonoid myricetin on cell viability, different antioxidant enzyme activities, ROS level and the expression of different antioxidant emzyme in B16F10 murine melanoma cells. Myricetin in a concentration range from 6.25 to $50\;{\mu}M$ decreased superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx) enzyme activities, but catalase (CAT) activity was increased. In the myricetin-treated group, ROS levels were decreased dose-dependently. Antioxidant enzyme expression was measured by RT-PCR. Myricetin treatment of B16F10 cells increased catalase expression. Expression levels of copper zinc superoxide dismutase (CuZn SOD) were not affected by exposure of myricetin. Manganese superoxide dismutase (Mn SOD) and GPx expression levels decreased slightly after myricetin treatment. In conclusion, the antioxidant capacity of myricetin was due to CAT and free-radical scavenging.
Photobacterium leiognathi CuZuSOD(PSOD)의 부세포성 분포에 따른 방어효과가 paraquat, 열 쇼크, 과산화수소 그리고 $CuSO_4$의 처리시 각각 조사되었다. 서로 달리 periplasm내에 분포하는 PSOD와 세포질에 분포하는 PSOD 사이의 생리적 특성은 본 연구에서는 조건에 따란 차이를 보였다. Paraquat나 $H_2O_2$ 처리시에는 periplasm에 SOD를 발현하는 세포에서 세포질내에 SOD를 분포하는 경우보다 약간 방호효과가 나았으며 SOD 발현 정도는 이와 일관되게 아주 중요한 변화를 보였다. 그러나 열 쇼크와 $CuSO_4$의 처리시는 각각 이런 현상이 역으로 나타났다.
The present study was attempted to investigate the mechanism of oxidative cellular injuries which occur in diabetic rats by determining changes of antioxidant enzymes activity in the lung of alloxan-induced diabetic rats, the contents of glutathione in the lung, liver, blood samples, and ${\gamma}$-glutamylcysteine synthetase activities in the liver. Superoxide dismutase activities (SOD), including Cu, Zn-SOD and Mn-SOD, decreased in the lung of diabetic rats compared with those of normal control rats. However, activities of catalase and glutathione peroxidase(GPX) activities were not affected in the lung of diabetic rats. In diabetic rats, glutathione contents in the lung, liver, and blood samples, as well as the activities of ${\gamma}$-glutamylcysteine synthetase in the livers which is known to be the key enzyme of glutatione biosynthesis, decreased significantly. From these experimental results, it is thought that the decrease in SOD activities in the lung, glutathione contents and ${\gamma}$-glutamylcysteine synthetase activities in some tissues in alloxan-induced diabetic rats may be the crucial cause of vullnerability to oxidative cellular injuries.
생체는 산소를 소비하는 대사 과정 중에 초산화물(superoxide, $O_{2}$), 과산화수소($H_2O_2$), 수산 라디칼(OH)과 같은 다양한 활성산소(reactive oxygen)들을 생성하게 되며, 그 중에서도 hydrogen peroxide ($H_2O_2$)는 biological membrane을 자유롭게 통과하며, 세포내에서 hydroxyl radical 등의 반응성이 큰 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)을 발생시키는 작용을 하는 강력한 산화제이다. 세포를 계대 배양 (5, 15, 25, 35 passage)하여 $H_2O_2$를 농도별(100 ${\mu}M$, 500 ${\mu}M$, 1 mM, 5 mM)로 처리하고, 또한 $H_2O_2$의 처리 시간(30 분, 1 시간)을 변화시킴으로써, Hepatoma 세포주에서 $H_2O_2$ 처리에 의한 Cu/Zn SOD의 발현을 Northern blot을 통하여 다음과 같이 분석하였다. 1)Hepatoma 세포주에서 시간별, 농도별로 산화제를 처리 했을 때 각각의 경우에서 발현양의 차이는 적었지만, 오랜 시간동안 고농도의 산화제에 노출시켰을 때 항산화 능력이 증가한다는 것을 확인할 수 있었다. 2)계대배양을 증가시키는 것은 노화가 진행된다는 것을 의미하므로, 산화제를 처리했을 때 25 passage에서 35 passage 단계에서 항산화 효소의 발현 정도가 급격히 감소되는 것으로 미루어 보아 이 단계에서 노화가 진행되었음을 추측할 수 있었다. 3)동일한 시간과 농도로 처리했을 때 각각의 passage의 발현 level에서 보이는 양상과는 다르게 35 passage에서는 500${\mu}M$이상의 농도를 1 시간동안 노출시켰을 경우에 Cu/Zn SOD가 거의 발현되지 않았으며, 30 분 동안 노출시켰을 때에는 500 ${\mu}M$의 농도까지 방어할 수 있는 능력을 가진 것으로 보인다.
Reactive oxygen species are produced under diabetic conditions and possibly cause various forms of tissue damage in patients with diabetes mellitus. The aim of this study was to examine the effects of high glucose on the alloxan-induced beta cell injury. The insulinoma (RINm5F) cells were clutured either with high glucose (22.2 mM) or normoglucose (5.6 mM) in RPMI 1460 media for 3 days. The SOD activities were determined by spectrophotometric assay and nitroblue tetrazolium (NBT) stain. The effects of high glucose on the cytotoxicity of alloxan were also investigated in RINm5F cells and the cells viability were determined by 3-(4,5-dimethylthiazolyl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) methods. Results showed that the CuZn-SOD activity was decreased but Mn-SOD activity was increased significantly in RINm5F cells cultured with high glucose (22.2 mM) media. The cytotoxicity of alloxan was increased by high glucose compared with normoglucose in RINm5F cells. Diethyl-dithiocarbarmate (DDC), as inhibitor of CuZn-SOC, also potentiate the alloxan-induced cytotoxocity in RINm5F cells. These results suggest that, in RINm5F cells, short term culture with high glucose media decreases Cu-Zn-SOD activity and the decreased activity of CuZn-SOD many one of the causative factors of beta-cell injury induced by high glucose.
적혈구는 산소를 운반하는 세포이므로 본 연구는 마필의 훈련과정에 적혈구내 SOD 활성을 포함한 혈액내 항산화 효소계의 활성변화와 상호작용이 있는지 조사하였다. 마무리 훈련중인 경주 후보마 6두, 21월령, 체중 474kg~509kg을 2001년 9월 24일부터 11월 13일 경주후보 발주 검사시 까지 7주의 훈련기간 조사하였다. 마필에서 10월 1일, 10월 16일, 10월 30일, 및 11월 6일 네 번 각각 채혈되었고, 아침 훈련후 약 3시간의 휴식후 일정시간에 마필이 스트레스를 느끼지 않게 매우 조심하여 헤파린 처리 Vacutainer로 약 5~10mL가 채혈 되었다. 혈액은 적혈구의 MnSOD와 CuZnSOD의 활성, 혈장의 Ceruloplasmin 활성과 그리고 혈장의 과산화물과 과산화물 분해효소 활성 및 포도당과 젖산의 농도 측정에 사용되었다. 훈련기간의 경과에 따라, 마필 적혈구의 MnSOD 활성과 혈장의 과산화물 수준은 점차 유의하게 높아지고, CuZnSOD 활성과 혈장의 Ceruloplasmin과 과산화물 분해효소의 활성은 점차 낮아졌다. 마필의 계산된 산소 소비량의 증가에 따라 MnSOD 활성은 직선적으로 증가하나(r=650, n=32) CuZnSOD 활성은 감소하였다. 그리고 적혈구의 MnSOD 활성은 혈장의 과산화물 함량과 양의 상관관계(r=616, n=48)를 그리고 혈장 젖산농도와 부의 상관관계를 나타내었다. 본 성적은 훈련량이 많아짐에 따라 과산화물은 축적되나, 적혈구의 MnSOD 활성이 높아지는 것은 혈액의 항산화계와 산화계의 균형을 위한 적응을 나타내고 있다. 적혈구의 SOD 활성과 혈장의 과산화물함량은 혈장의 젖산농도와 함께 마필의 훈련정도 평가의 지표로 사용할 수 있다는 것을 보였다.
일품벼(Oryza sativa L. cv. Ilpoombye)에 고선량 감마선을 조사한 후 벼 잎의 생리적 손상과 항산화 효소인 superoxide dismutase (SOD)의 isoenzyme 수준에서의 유전자 발현 및 효소활성 변화와의 연관성을 조사하였다. 500 Gy의 감마선 조사는 24 h 이내에 벼 잎의 단백질, 엽록소, 그리고 카로테노이드의 함량을 유의적으로 감소시켰으며 특히 엽록소는 대조구에 비해 26% 이상 감소하였다. 반면에 SOD isoenzyme들의 유전자 발현은 감마선 조사 후 6 h부터 24 h까지는 전반적으로 대조구보다. 높게 유지되었으나 48 h부터 현저히 감소되어 72h에는 모든 isoenzyme들의 유전자 발현 이 대조구보다. 낮았다. 그러나 isoenzyme들의 효소활성은 조사구에서 일부 CuZn-SOD isoenzyme들의 경우 48 h까지 대조구보다. 약간 높았지만 72h에는 모두 현저히 감소하였다. 따라서 본 연구에 사용된 500 Gy의 고선량 감마선은 단백질, 엽록소, 그리고 카로테노이드 함량의 감소를 초래하며, 조사 후 초기단계에는 이러한 생리적 손상과 무관하게 일시 적으로 SOD isoenzyme들의 유전자 발현을 증가시키지만 72 h 이후에는 유전자 발현과 효소활성을 동시에 감소시키면서 산화스트레스에 의한 생리적 손상을 유도하는 것으로 생각된다.
Superoxide dismutase (SOD) 고생산세포주로 선발된 토마토(Lycopersicun esculentum) 배양세포를 사용하여 현탁배양에 따른 SOD 활성과 isoenzyme변화를 조사하고 토마토 식물체의 것과 비교하였다. 현탁배양은 세포생중량 2 g을 1 mg/L 2,4-D, 30 g/L sucrose를 함유한 MS 배지 50 mL과 함께 mL flask에서 $25^{\circ}C$암상태로 배양(100 rpm)하였다. 세포생장은 계대배양후 20일에 최고점에 도달한 후, 급격히 감소하며 배양 후 23일부터 세포가 검게 변하였다. 세포 단위무게당 SOD활성(unit/g dry cell wt)은 배양 후 23일부터 증가하여 28일째에 최고활성(52,400 unit)을 나타낸 후 급격히 감소하였다. 세포 밖으로 분비되는 extracellular SOD활성은 배양 후 25일에 최고치(27,800 unit/so mL medium)를 나타낸 후 감소하였다. Flask 전체의 SOD활성은 배양 후 25일에 최대치(35,700 unit)를 나타내었으며 extracellular SOD 활성이 약 75%을 차지하였다. 토마토 배양세포에는 4개의 SOD isoenzyme이 존재하며, isoenzyme의 패턴변화는 세포생장에 따른 효소활성의 변화와 일치하였다. 토마토 식물체는 배양세포에 없는 CuZnSOD가 존재하며 배양세포와 식물체 조직사이에는 서로 다른 isoenzyme 패턴이 존재함을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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