국내 해안 근접지역과 내륙 일부 지역에 서식하고 있는 야생화들로부터 분리, 동정한 효모들 중에서 국내 미기록 효모들을 선별하여 이들의 미생물학적 특성들을 조사하였다. 동해시의 야생화들에서 Candida silvae와 Cryptococcus terrestris, 안동시 부근의 야생화에서는 Auriculibuller fuscus의 국내에서 보고되지 않은 효모들을 분리하였다. 충남 내륙지역인 금산군에서는 Candida quercitrusa, Hanseniaspora opuntiae등의 미기록 효모들을 분리하였다. 또한 서해안 지역의 대천시에서는 Hannaella zeae, 태안시의 야생화에서는 Ca-ndida saopaulonensis, Sporobolomyces carnicolor, sporobolomyces phaffii등이 미기록 효모들로 분리, 선별하였고 예산군에서는 Candida oleophila와 Jaminaea angkoriensis 미기록 효모들을 분리하였다. 우리나라 서남부지역인 광주시 야생화에서는 Hanseniaspora vineae, 최남단인 완도군에서는 Pseudozyma hubeiensis, Pichia mexicana 등 모두 8곳에서 14종의 미기록 효모들을 분리하였다. 이들 미기록 효모들의 형태적, 배양학적 성질들이 조사한 결과 유포자 효모가 3종, 무포자 효모가 11종이었고 위균사 형성 효모가 7종이었으며 각기 다른 배양학적 특성을 보였다.
토양에서 분리한, 수용성 항진균성물질(solumycin)을 생산하는 Streptomyces sp. LAM-593의 배양액으로부터 butanol 추출, alumina와 2회의 Sephadex LH-20 column chromatography 등의 방법으로 물질을 정제하고 여러가지 성질을 조사한 결과는 다음과 같다. 본 물질은 silica gel TLC에서 단일 spot를 나타내었으며 ethanol-ammonia water-water (8:1:1). butanol-ethanol-water (5:1:4 및 5:2:2), 50% methanol계에서의 Rf치는 각각 0.24, 0.46, 0.57, 0.84였고, 물 methanol, acidic aq. butanol 등에 잘 용해하였으며 Fehling과 Molish 반응에서 양성인 342, 361. 380, 404nm에서 peak를 나타내는 heptaene계 물질이었다. 그리고 Candida, Cryptococcus, Saccharomyces, Trichophyton, Trichosporon 등의 진균에 대해서는 항균력이 컸으나 여러가지 세균에 대해서는 활성이 거의 없었다.
자연환경에서 분포하고 있는 효모의 mycoflora를 확인하고 궁극적으로 이들을 고부가가치의 산업에 응용하기 위한 연구의 일환으로 대전과 인근 충남지역 일부의 야생화들을 채집하여 효모들을 분리, 동정하였다. 대전지역 야생화 42점에서 32종의 효모들을 54균주 분리하였고 이들 중 Cryptococcus 속균과 Phodotonula 속균 등이 우점균이었으며 Metschnikowia 속균과 같이 희귀 효모들을 20여종 분리하였다. 대전 인근의 충남 금산군과 논산군 일부지역의 야생화 28점에서 모두 18종의 효모들을 26균주 분리하였다. 이들 균 중에서 Candida 속균과 Pseudozyma 속균 등이 우점균으로 분리되었다.
우리나라 주요 강 담수와 주변 토양 중의 야생효모 분포특성을 조사하고자 먼저 낙동강과 영산강 일부지역의 담수와 주변 토양 25점을 수집하여 15균주 9종의 야생효모들을 PCR을 이용한 ITS 부위와 26S rDNA의 D1/D2 부위의 염기서열 상동성 비교법을 이용하여 동정하였다. 이들 가운데 Aureobasidium pullulans와 Cryptococcus besiolae가 각각 3균주로 가장 많이 분리되었고, Lachancea thermotolerans와 Wickerhamomyces anomalus도 각각 2주씩 분리되었다. 특히 Candida ghanaensis와 Meira geulakonigii는 국내 처음 보고되는 미기록 균주들로서 포자를 형성하였고, YPD 배지와 potatoes dextrose 배지 등에서 잘 생육하는 특성을 갖고 있었다. 또한 두 미기록 효모들은 5% NaCl을 함유한 YPD 배지에서 생육하는 내염성 효모들이었다.
So, Yee-Seul;Yang, Dong-Hoon;Jung, Kwang-Woo;Huh, Won-Ki;Bahn, Yong-Sun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제27권2호
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pp.357-364
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2017
In this study, we aimed to generate a series of versatile tagging plasmids that can be used in diverse molecular biological studies of the fungal pathogen Cryptococcus neoformans. We constructed 12 plasmids that can be used to tag a protein of interest with a GFP, mCherry, $4{\times}FLAG$, or $6{\times}HA$, along with nourseothricin-, neomycin-, or hygromycin-resistant selection markers. Using this tagging plasmid set, we explored the adenylyl cyclase complex (ACC), consisting of adenylyl cyclase (Cac1) and its associated protein Aca1, in the cAMP-signaling pathway, which is critical for the pathogenicity of C. neoformans. We found that Cac1-mCherry and Aca1-GFP were mainly colocalized as punctate forms in the cell membrane and non-nuclear cellular organelles. We also demonstrated that Cac1 and Aca1 interacted in vivo by co-immunoprecipitation, using $Cac1-6{\times}HA$ and $Aca1-4{\times}FLAG$ tagging strains. Bimolecular fluorescence complementation further confirmed the in vivo interaction of Cac1 and Aca1 in live cells. Finally, protein pull-down experiments using $aca1{\Delta}$::ACA1-GFP and $aca1{\Delta}$::ACA1-GFP $cac1{\Delta}$ strains and comparative mass spectrometry analysis identified Cac1 and a number of other novel ACC-interacting proteins. Thus, this versatile tagging plasmid system will facilitate diverse mechanistic studies in C. neoformans and further our understanding of its biology.
Butylated hydroxyanisole (BHA)과 butylated hydroxytoluene (BHT)의 각 농도에 따른 미생물의 성장 억제 효과에 대한 연구 결과, 본 연구에서 대상으로한 미생물 중 3종의 효모 (Saccharomyces cerevisiae, Kloeckera apiculata, Cryptococcus hungaricus), 3종의세균 (Bacillus subtilis, Lactobacillus casei, Escherichia coli), 2종의 곰팡이 (Aspergillus oryzae, Penicillium sp.) 가 BHA의 농도가 증가함에 따라서 성장이 점차적으로 억제되어 BHA 500ppm에서는 성장속도가 약간 느려졌고 BHA 100ppm 에서는 더욱 느려졌으며 (A. oryzae 는 완전 억제) BHA 150ppm에서는 대부분의 미생물 (S.cerevisiae, K.apiculata, C.hungaricus, B.subtilis, A.oryzae) 의 성장이 완전하게 억제되었으나 3종의 미생물 (L.casie, E.coli, Penicillium sp.)의 성장은 약간 억제되었을 뿐이다. BHT에는 2종의 미생물 (C.hungaricus, L.casei)만이 성장이 약간 억제되었고 시험 농도 범위에서는 기타 미생물에 대한 성장 억제작용은 없는 것으로 나타났다.
Xylan를 기질로 직접 alcohol 발효를 목적으로 각종 토양을 균원시료로 하여 xyla를 분해, 자화하는 효모를 분리하여 동정하고 몇 가지 중요한 성질을 조사하였다. Xylanase를 생산하는 XB-33 효모는 Cryptococcus ater 유연균으로 동정되었다. XB-33 균주의 xylanase 생성은 xylan에 의해 induction되고 xylose나 glucose에 의해서는 repression되었다. 또한 xylan 농도는 1% 수준에서 가장 높았으며, 배양일수 6일째 그 황성이 최고치를 나타내었다. XB-33 균주가 생성 분비하는 xylanase를 DEAE-Sephadex A50으로 colum chromatography 하여 부분 정제한 후 이의 생화학적 특성을 검토한 결과 xylanase의 최적작용 pH는 5.0, 최적 온도는 5$0^{\circ}C$였으며 pH 5.0~7.0에서와 온도 6$0^{\circ}C$ 이하에서 의 효소활성은 비교적 안정하였고 xylan에 대한 xylanase의 작용양상을 조사하기 위해 TLC한 결과 최종산물로서 xylose가 확인되었다. 그리고 xylanase의 xylan에 대한 Km치는 20(mg/ml)이었다.
Iron plays a key role in host-pathogen interactions. Microbial pathogens require iron for survival and virulence, whereas mammalian hosts sequester and withhold iron as a means of nutritional immunity. We previously identified two paralogous genes, CFT1 and CFT2, which encode homologs of a fungal iron permease, Cft1 and Cft2, respectively, in the human fungal pathogen Cryptococcus neoformans. Cft1 was shown to play a role in the high-affinity reductive iron uptake system, and was required for transferrin utilization and full virulence in mammalian hosts. However, no role of Cft2 has been suggested yet. Here, we identified the third gene, CFT3, that produces an additional fungal iron permease homolog in C. neoformans, and we also generated the cft3 mutant for functional characterization. We aimed to reveal distinct functions of Cft1, Cft2 and Cft3 by analyzing phenotypes of the mutants lacking CFT1, CFT2 and CFT3, respectively. The endogenous promoter of CFT1, CFT2 and CFT3 was replaced with the inducible GAL7 promoter in the wild-type strain or in the cft1 mutant for gain-of-function analysis. Using these strains, we were able to find that CFT2 is required for growth in low-iron conditions in the absence of CFT1 and that overexpression of CFT2 compensates for deficiency of the cft1 mutant in iron uptake and various cellular stress conditions. However, unlike CFT2, no clear phenotypic characteristic of the cft3 mutant and the strain overexpressing CFT3 was observed. Overall, our data suggested a redundant role of Cft2 in the high-affinity iron uptake and stress responses in C. neoformans.
본 연구는 kefir로부터 EPS를 분리하여 MA104 세포에 대한 독성과 rotavirus에 대한 저해효과를 확인하기 위하여 수행하였다. Kefir culture 및 grain 파쇄입자에서 Lactobacillus fermentum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis 등의 유산균과 Candida kefyr, Cryptococcus albidus, Pichia ohmeri 등의 효모가 분리 동정되었다. EPS의 1% 농도에서, MTT assay에 의한 EPS의 rotavirus에 대한 억제효과는 human rotavirus(KU)가 $72.52{\pm}6.48%$, bovine rotavirus(NCDV)가 $36.06{\pm}7.63%$, porcine rotavirus(OSU)가 $81.66{\pm}1.11%$로 나타났으며, EPS의 1/128% 농도에서, human rotavirus(KU)가 $24.98{\pm}4.58%$, bovine rotavirus(NCDV)가 $4.71{\pm}6.16%$, porcine rotavirus(OSU)가 $4.05{\pm}14.90%$로 나타났다. Kefir에서 분리한 EPS는 다양한 혈청형과 유래 동물의 rotavirus 모두에게 억제 효과가 있는 것으로 확인되었다.
Betaine derivatives are considered major ingredients of shampoos and are commonly used as antistatic and viscosity-increasing agents. Several studies have also suggested that betaine derivatives can be used as antimicrobial agents. However, the antifungal activity and mechanism of action of betaine derivatives have not yet been fully understood. In this study, we investigated the antifungal activity of six betaine derivatives against Malassezia restricta, which is the most frequently isolated fungus from the human skin and is implicated in the development of dandruff. We found that, among the six betaine derivatives, lauryl betaine showed the most potent antifungal activity. The mechanism of action of lauryl betaine was studied mainly using another phylogenetically close model fungal organism, Cryptococcus neoformans, because of a lack of available genetic manipulation and functional genomics tools for M. restricta. Our genome-wide reverse genetic screening method using the C. neoformans gene deletion mutant library showed that the mutants with mutations in genes for cell membrane synthesis and integrity, particularly ergosterol synthesis, are highly sensitive to lauryl betaine. Furthermore, transcriptome changes in both C. neoformans and M. restricta cells grown in the presence of lauryl betaine were analyzed and the results indicated that the compound mainly affected cell membrane synthesis, particularly ergosterol synthesis. Overall, our data demonstrated that lauryl betaine influences ergosterol synthesis in C. neoformans and that the compound exerts a similar mechanism of action on M. restricta.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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