• 제목/요약/키워드: Cell-based assay

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새로운 Platinum (II) Complex ([Pt (II)(trans-1-dach)(DPPP)] $(NO_3)_2$와 [Pt (II)(trans-1-dach)(DPPE)] $(NO_3)_2$의 항암효과 및 신독성에 관한연구 (A New Class of Platinum (II) Complexes [Pt (trans-1-daeh) (DPPP)] $2NO_3$ and [Pt (trans-1-daeh)(DPPE)] $2NO_3$ Exhibiting Antitumor Activity and Nephrotoxieity)

  • 정지창;윤진희;장성구;이경태;노영수
    • 대한약리학회지
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    • 제29권2호
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    • pp.283-295
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    • 1993
  • 일부 malignant tumor에 Pt-complex의 임상 응용 과정에서 신장독성등의 심한 부작용이 문제점으로 지적되고 있다. 이 연구에서는 기존의 cisplatin보다 항암효과는 우수하면서, 부작용을 감소시킨 새로운 Pt-complex의 개발에 역점을 두었다. 본 연구에서는 합성한 Pt (II) complex는 carrier ligand로서 1, 2-diaminocyclohexane (dach)을 사용하였고, leaving group으로는 diphosphine류인 1, 3-bis (diphenylphosphine)의 propane (DPPP) 및 ethane (DPPE)을 도입하였으며, 물에 대한 용해도를 높이기 위해 dinitrate로 만들었다. 새로이 합성한 [Pt (II)-(trans-1-dach)(DPPP)] $(NO_3)_2$ 과 [Pt (II)(trans-1-dach)(DPPE)] $(NO_3)_2$ 는 원소 분석, IR 및 $^{13}C-NMR$ 분석 data에 의하여 위의 물질임이 확인되었다. KHPC-001과 KHPC-002는 MTT assay method에 의한 항암활성 연구를 통하여 P-388, L-1210 lymphocytic leukemia cell에서 항암효과가 인정되었으며, 이 항암효과는 대조 약물로 사용된 cisplatin에 비하여 우수하였다. KHPC-001과 KHPC-002는 토끼의 신세뇨관 세포와 인체의 신피질 세포를 이용한 cytotoxity 및 thymidine 섭취율과 인체 신피질 조직 배양을 이용한 glucose consumption 실험을 통하여 모두 cisplatin보다 신장독성이 현저히 감소되었다. 이상의 결과로 보아 Pt (II) complex는 carrier ligand와 leaving group의 선택에 따라 항암활성의 증가와 신독성의 감소를 일으키는 요인으로 보여지며, 이 연구에서 만들어진 두 Pt (II) complex는 앞으로 다각적인 검토를 거쳐 새로운 anticancer chemotherapeutic agent로 개발될 가능성이 있을 것으로 생각된다.

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종모우 정액중 Brucella균 신속 검출을 위한 PCR기법 개발 (Development of PCR assay for the detection of Brucella spp in bovine semen)

  • 정석찬;정병열;우승룡;조동희;김종염;김우택;이정미;박용호;백병걸
    • 대한수의학회지
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    • 제38권2호
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    • pp.345-352
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    • 1998
  • The diagnosis of brucellosis is currently based on serological and microbiological tests. However, the microbiological isolation and identification have several disadvantages such as time-consuming and laborious, and the serological methods have been reported to cross-react with antigens other than those from Brucella spp. To develop a sensitive and rapid diagnostic method for detection of Brucella species, the genus-specific primers were designed and synthesized from the sequence of gene encoding a 31kDa cell surface protein(BCSP) and a 36kDa outer membrane protein(OMPB) of B abortus. The amplified 711bp and 982bp DNA fragments were only visible in each species of Brucella by PCR method using the BCSP and OMPB primers, respectively. However, PCR product was not obtained with DNA from other Gram-negative bacteria. As little as 1pg of the B abortus genomic DNA could be detected by this PCR method. Using the PCR technique, semen samples from 185 bulls of Brucella-seronegative herds in Cheju island were examined for comparison of this PCR method with conventional methods in 1995. The semen samples from 5 bulls were positive by culture method and PCR, and one was positive and 5 were suspect by semen plasma agglutination test. However, the semen samples obtained from 177 bulls were negative by semen plasma agglutination, culture and PCR methods in 1996. The results of comparison tests suggested that PCR was a better test than agglutination test against semen of bulls. This study indicated that the PCR technique was a valuable for the diagnosis of bovine brucellosis, particulary in bull semens.

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The Significance of Caspase-Cleaved Cytokeratin 18 in Pleural Effusion

  • Lee, Keu Sung;Chung, Joo Yang;Jung, Yun Jung;Chung, Wou Young;Park, Joo Hun;Sheen, Seung Soo;Lee, Kyi Beom;Park, Kwang Joo
    • Tuberculosis and Respiratory Diseases
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    • 제76권1호
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    • pp.15-22
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    • 2014
  • Background: Apoptosis plays a role in the development of pleural effusion. Caspase-cleaved cytokeratin 18, a marker for epithelial cell apoptosis, was evaluated in pleural effusion. Methods: A total of 79 patients with pleural effusion were enrolled. The underlying causes were lung cancer (n=24), parapneumonic effusion (n=15), tuberculous effusion (n=28), and transudates (n=12). The levels of M30, an epitope of caspase-cleaved cytokeratin 18, were measured in blood and pleural fluids using enzyme-linked immunosorbent assay along with routine cellular and biochemical parameters. The expression of M30 was evaluated in the pleural tissues using immunohistochemistry for M30. Results: The M30 levels in pleural fluid were significantly higher in patients with tuberculosis ($2,632.1{\pm}1,467.3U/mL$) than in patients with lung cancer ($956.5{\pm}618.5U/mL$), parapneumonic effusion ($689.9{\pm}413.6U/mL$), and transudates ($273.6{\pm}144.5U/mL$; all p<0.01). The serum levels were not significantly different among the disease groups. Based on receiver operating characteristics analysis, the area under the curve of M30 for differentiating tuberculous pleural effusion from all other effusions was 0.93. In the immunohistochemical analysis of M30, all pathologic types of cancer cells showed moderate to high expression, and the epithelioid cells in granulomas showed high expression in tuberculous pleural tissues. Conclusion: Caspase-cleaved cytokeratin 18 was most prominently observed in tuberculous pleural effusion and showed utility as a clinical marker. The main source of M30 was found to be the epithelioid cells of granulomas in tuberculous pleural tissues.

인간 $\alpha$-fetoprotein에 대한 모노클로날 항체의 제조 및 모노클로날 항체를 이용한 효소면역분석법의 개발 (Production of a Monoclonal Antibody to Human $\alpha$-Fetopotein and Development of Monoclonal Antibody-Based Enzyme-Linked Immunosorbent Assays for Human $\alpha$-Fetoprotein)

  • Michung Yoon;Hyun-Hee Lee;Youngwon Lee
    • 대한의생명과학회지
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    • 제5권1호
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    • pp.1-10
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    • 1999
  • 본 연구에서는 혈장이나 양수에 있는 $\alpha$-fetoprotein (AFP)을 인식 할 수 있는 모노클로날 항체를 제조하고, 모노클로날 항체를 이용한 효소면역분석법을 개발하고자 하였다. 양수로부터 얻은 AFP를 쥐에 주사한 후 비장을 분리하여 종양세포 (Sp2/O-Ag-14)와 융합하였고, 하이브리도마 기술을 이용하여 모노클로날 항체를 제조하였다. 모노클로날 항체를 클로닝하였으며, 생성된 항체를 MabF22로 명명하였고, IgG1 중사슬과 k 경사슬의 isotype을 나타냈다. 또한 immunoblotting 방법과 ELISA로 특이도를 조사한 결과 모노클로날 항체는 AFP와만 반응하였고, 결합 친화상수는 0.8$\times$$10^{-10}$M이었다. 두 종류의 효소면역분석법 -경쟁적 또는 비경쟁적 분석 -을 이용하여 항체의 효용성을 조사하였으며, 두 방법 모두 AFP와 농도에 비례하여 반응하였다. 따라서 본 연구에서 생산된 모노클로날 항체는 연구목적으로 뿐만 아니라 AFP 농도를 측정하기 위한 면역진단시약의 개발에도 유용할 것으로 생각된다.

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전구체 프로합토글로빈과 성숙 합토글로빈의 시알산 함량 및 헤모글로빈-결합력 비교 (Differential Sialic Acid Content and Hemoglobin-binding Activity of Precursor Prohaptoglobin and Mature Haptoglobin)

  • 이주현;오미경;김인숙
    • 생명과학회지
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    • 제27권6호
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    • pp.632-639
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    • 2017
  • 성숙 합토글로빈(haptoglobin, Hp)은 혈장 당단백질로서 혈중의 유리 헤모글로빈(hemoglobin, Hb)을 제거하고 항산화 작용을 한다. 프로합토글로빈(prohaptoglobin, proHp)은 Hp 전구체이며 혈중에 낮은 농도로 존재하지만 그 생리적 기능은 아직 확실하지 않다. 본 연구에서는 proHp와 Hp의 구조적, 기능적 차이를 연구하기 위하여 재조합 proHp를 제조하여 시알산과 Hb-결합력을 조사하고 성숙 Hp와 비교하였다. 비환원 조건의 Western blot 분석에서 proHp1은 약 130 kD의 하나의 밴드를 보였고 proHp2는 200 kDa 이상의 다중 밴드를 보였는데 이것은 대응되는 성숙 Hp1-1과 Hp2-2와 각각 동일한 양상이었다. 하지만 비환원 및 비변성 조건 하에서 수행된 전기영동에서는 proHp가 Hp보다 더 느리게 이동하였다. 렉틴을 이용한 ELISA 분석에서 proHp는 Hp보다 산성 당인 시 알산 함량이 더 낮음을 알 수 있었다. 또한 proHp는 Hb과의 결합력도 더 낮았다. 이러한 결과들로부터 proHp는 Hp와 같은 양상으로 중합체를 형성하지만 시알산 함량과 Hb-결합력이 Hp와 다름을 알 수 있었고 혈중에서 전구체인 proHp는 Hp와 다른 기능을 수행할 것임을 시사한다.

특정 세균으로 유도된 백서의 치수염에서 T 세포 아군집의 분포와 interleukin-2, interferon-γ, interleukin-4의 수준에 관한 연구 (THE LEVELS OF INTERLEUKIN-2, INTERFERON-γ, INTERLEUKIN-4 AND TLYMPHOCYTE SUBPOPULATIONS IN RAT PULPAL INFLAMMATION INDUCED EXPERIMENTALLY BY SPECIFIC BACTERIA)

  • 김선아;임성삼
    • Restorative Dentistry and Endodontics
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    • 제27권1호
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    • pp.1-11
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    • 2002
  • Immune responses associated with bacterial infection involve various inflammatory cells. Clinical symptoms and pathologic features are particularly influenced by the predominant cells Among inflammatory cells, T cells have the heterogenity. T cells may develop into the mature cells expressing the cell surface markers with different functions and T helper cells are categorized into Th1 and Th2 cells based on their different patterns of cytokine production. The objective of this study was to investigate the change of expression of surface markers on T cells and the Th1/Th2 immune response in pulpal inflammation associated with specific bacteria. We experimentally induced pulpal inflammation in rat incisors by drilling without coolant and innoculated with Streptococcus mutans (S.M. group), Porphyromonas endodontalis (P.E. group), or only sterile cotton (control group). After 1, 2, and 5 days, mandibular incisors were extracted and the pulp tissues were extirpated The expressions of IL-2 recepters (CD25) and ICAM-1 (CD54) on CD4+ and CD8+ cells in the pulps were determined using a flow cytometer, and the concentration of IL-2, IFN-$\gamma$ and IL-4 was measured by enzyme-linked immunosorbent assay. The results were as follows: 1 In the S.M. group, CD4+ cells were more increased at 2nd day than 1st day and in the P.E. group, CD8+ cells were more increased at 2nd day than 1st day. 2. The percentages of CD4+, CD4+25+ and CD4+54+ cells were decreased in the pulp tissues at 5th day after irritation in all groups. 3. The ratios of CD4+/CD8+, CD4+/CD4+25+ and CD4+/CD4+54+ in the pulps at 2nd day after irritation by P. endodontalis were significantly lower than the other groups. 4. The higher concentrations of IFN-$\gamma$ than IL-4 in the pulps at 2nd day after irritation by P. endodontalis showed that T helper 1 reaction were predominant in the early stage of the pulpal inflammation induced by P. endodontalis. 5. The higher concentrations of IL-4 than IFN-$\gamma$ in the pulps at 1st day and 5th day after irritation by S. mutans were measured but the differences were not significant.

ELISA에 의한 T-2 toxin의 분석법에 관한 연구 (Studies on Analysis Method of T-2 Toxin by ELISA)

  • 오유진;장성재;윤여표
    • 한국식품위생안전성학회지
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    • 제3권2호
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    • pp.65-73
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    • 1988
  • 종래의 화학적, 생물학적 분석방법의 단점인 검출한도가 낮은점, 시료전처리의 복잡성, 비경제성 및 비 특이성 등을 극복하기 위해 monoclonal AB를 사용한 ELISA법으로 T-2 toxin 에 대해 특이성있는 새로운 분석법을 개발하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 종래의 GLC 및 GC-MS 분석법보다 간편하고 신뢰성이 높으며 검출한계가 0.1ppb인 고감도의 분석법을 개발하였다. 2. 본 분석법을 이용하여 Fusarium spp. 균의 T-2 생산유무를 단시간에 다량의 시료를 검색할 수 있었으며, data의 정확도가 GLC와 유사하며 GLC로는 검색할 수 없는 150ppb이하의 미량함유 시료에서도 T-2 toxin을 검색할 수 있었다. 3. 본 실험에 사용한 F. sporotichioides M-1-1 균주의 밀에 대한 최적 배양조건은 $24~27^{\circ}C$ 2주간임을 알았다.

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생리신호 분석을 이용한 실내온열환경에서의 수면 쾌적성 평가 (Evaluation of Sleep Comfort for Indoor Thermal Environment based on the Physiological Signal Analysis)

  • 이낙범;임재중;금종수;이구형;최호선
    • 감성과학
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    • 제3권2호
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    • pp.75-84
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    • 2000
  • 문명의 발달과 함께 수면부족으로 인한 여러 가지 스트레스와 질환이 증가하게 되어 최근 수면연구에 대한 관심이 증가하고 있다. 본 연구는 다양한 온열환경 조건에서의 쾌적한 수면을 위한 온열환경을 제시하기 위해, 5명의 여성 피험자를 대상으로 22$^{\circ}C$, 26$^{\circ}C$, 3$0^{\circ}C$의 일정온도 조건과 $25^{\circ}C$에서 1시간 후와 2시간 후에 각각 1, 2$^{\circ}C$를 상승시켜주는 변동온도 조건하에서 수면생리신호를 측정하였다. 그리고, 수면단계 평가를 이용하여 총 수면시간, 깊은 수면의 비율, 그리고 최초 수면시작 시간에서 최초의 서파 수면이 나타나기까지의 지연시간 등의 수면효율을 평가하였다. 그 결과, 일정온도 조건에서는 26$^{\circ}C$에서 총 수면시간(466.7$\pm$10.25분)과 깊은 수면의 비율(33.1$\pm$4.95%)은 타 조건에 비해 높게 나타났고, 최초 서파수면까지의 지연시간(9.8$\pm$3.33분)은 타 조건에 비해 낮게 나타나 쾌적한 수면을 위한 가장 적절한 온열조건임을 관찰할 수 있었다. 그리고 변동온도 조건에서는 4가지 온열조건간에는 큰 차이가 나타나지 않았지만, 모든 조건에서 일정온도 조건보다는 좋은 결과를 나타내었다. 또한 수면 중 신체 움직임과 설문 분석에서도 동일한 결과를 보였다. 본 연구를 통해, 수면생리신호를 이용한 수면 쾌적성 분석은 수면의 질적인 상태를 관찰하는데 매우 적합한 파라메터를 도출할 수 있으며, 여러 가지 수면환경 조건을 평가하는데 매우 유용한 지표가 될 수 있음을 보였다.e results suggest that hCG treatment at 7 days after insemination could be used to increase the pregnancy rate of embryo transfer, and transfer, and only the recipients with PUN concentration of <12 mg/dl were influenced by treatment with hCG./TEX>이었으며, 이는 화성 기원을 지시한다.sucrose를 이용한 2단계 희석이 수정란의 생존성을 향상시키는 것으로 나타났다. 또한 발육 단계별 생존성에 있어서는 발육이 진전된 확장배 반포 시에 동결하는 것이 배반포기에 동결하는 것 보다 유리한 것으로 나타났다.ody를 사용하여 flow cytometery해석을 실시하는 한편 125I-hGH binding assay에 의하여 hGH binding activity를 측정하였다. 최종적으로 GH signal transduction의 target genedf으로 알려져 있는 serine protease inhibitor 2.1(Spi 2.1) gene의 promotor activity를 검토한 결과 hGHR을 transfect한 CHO Cell에 있어서 hGH의 농도에 의존적으로 증가되었다. 따라서 본 실험에서 cloning한 cDNA hGHR는 native hGHR와 같은 기능을 가지는 것으로 판명되었다.것으로 판명되었다..ments of that period left both in Japan and Korea. "Hyojedo" in Korea is supposed to have been influenced by the letter design. Asite- is also considered to

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고지방식이로 비만이 유도된 마우스에서 황정 주정 추출물의 항비만 효과 (Anti-obesity Effects of Ethanolic Extract of Polygonatum sibiricum Rhizome in High-fat Diet-fed Mice)

  • 고종희;전우진;권혁상;연승우;강재훈
    • 한국식품과학회지
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    • 제47권4호
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    • pp.499-503
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    • 2015
  • 본 연구에서는 P. sibiricum rhizome (황정)의 80% 알코올 추출물인 ID1216의 비만예방모델과 치료동물모델에서 비만 억제 효과를 입증하고 ID1216의 비만 억제 관련 조절인자를 밝히고자 하였다. ID1216은 비만예방동물모델에서 사료섭취량 감소 없이 유의적인 체중 증가 억제 효과를 보였으며, 비만치료동물모델에서도 대조약물인 지방흡수억제제인 orlistat과 동등한 복부 지방감소를 동반한 항비만 효과를 나타내었다. ID1216의 체중 증가 억제를 유도하는 조절인자를 확인하기 위해서 비만예방모델과 단회 투여 시험 후 부고환지방조직과 분화된 3T3-L1 지방세포주에서 관련 유전자 및 단백질의 발현 변화를 조사하였다. 이를 통해 ID1216의 항비만 효과가 SIRT1, $PGC1{\alpha}$$PPAR{\alpha}$의 발현 증가와 관련됨을 확인하였다. 또한 단회 투여만으로도 지방조직에서 SIRT1과 $PGC1{\alpha}$의 발현을 유도하는 것을 확인함으로써 ID1216이 이들 유전자 발현을 직접적으로 조절할 가능성을 제시하였다. ID1216은 P. sibiricum rhizome 추출물로 다양한 성분을 포함하고 있어 $PGC1{\alpha}$, $PPAR{\alpha}$와 SIRT1의 발현을 독립적으로 조절하거나 또는 주 조절 인자인 SIRT1의 발현 또는 활성을 증가시켜 순차적인 반응을 유도할 수 있을 것으로 예상되며, 이를 규명하기 위해서는 더욱 체계적인 연구가 필요할 것으로 판단된다. 본 연구는 ID1216에 의해 지방조직에서 지방산 산화 및 발열과 관련된 유전자 발현 증가를 통해 체중 및 지방 감소 효과가 있음을 보여줌으로써, ID1216이 향후 유용한 항비만 소재로 활용될 가능성을 제시하였다.

Caenorhabditis elegans 생체대체모델을 이용한 한국 영유아분변 유래 프로바이오틱스 균주의 in vivo 장 우점능 검토 (Rapid in vivo Colonization Screening of Probiotic Bacteria Isolated from Human Infants using Caenorhabditis elegans Surrogate Host)

  • 박미리;정은선;오상남;송민호;두재균;정용섭;문용일;김영훈
    • 한국축산식품학회지
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    • 제33권4호
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    • pp.522-530
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    • 2013
  • Probiotic 기능성이 우수한 유산균을 선발하기 위하여 9개월 미만의 모유수유아로부터 100종의 Lactobacillus균을 분리하였다. C. elegans를 이용한 in vivo 실험으로 장내 우점능을 검사하여 L. rhamnosus GG와 비교했을 때 다른 균주들보다 상대적으로 장환경에 대하여 우수한 우점특성을 갖는 probiotic 유산균주 9종을 선발하였다. Mucin을 이용한 in vitro 부착능력 검토결과, L. rhamnosus GG대비 90% 이상의 부착능을 보였으며, pH 2.5에서의 내산성 및 0.5% oxgall을 함유한 내담즙성에서 각각 97% 이상과 99% 이상의 높은 생존율을 나타냈다. 또, 81% 이상의 높은 콜레스테롤 저해능과 다양한 prebiotics 이용가능성을 확인하였고 최종적으로 L. rhamnosus 4종, L. plantarum 5종인 것으로 동정되었다. 이상의 결과로부터 in vivo 실험을 통해 우선 선발한 균주들이 프로바이오틱스 균주로서 요구되는 조건을 우수하게 충족시킨다는 것을 알 수 있었으며, 따라서 in vivo 모델로서 C. elegans을 이용한 장내우점능력 검토는 내산성, 내담즙성, 콜레스테롤 저하, 그리고 prebiotic 기질 이용능 등의 고기능성의 probiotic 균주 선발에 직접적으로 이용할 수 있을 것으로 기대된다.