• 제목/요약/키워드: Cell-based assay

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갑상샘 암종을 가진 개에서 조절 T 세포의 증가 (Increased Regulatory T cells in Thyroid Adenocarcinoma in a Mixed Breed Dog)

  • 김준환;홍연정;김범석;김윤혜;박진호;정태호;박철
    • 한국임상수의학회지
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    • 제30권6호
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    • pp.482-485
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    • 2013
  • 6년령의 개가 오른쪽 턱 밑의 종괴와 고체온증으로 전북대학교 수의과대학 동물병원에 내원하였다. 정확한 위치와 크기를 측정하기 위해 CT 촬영을 진행하였으며 3D 재구성을 실시하였다. CT 촬영 후 수술적으로 제거하였으며 제거 후 조직검사를 실시한 결과 거대세포 갑상샘 암종으로 확인되었다. 또한 본 환자의 혈액 중 조절 T 세포의 비율을 보기 위해 흐름세포측정기를 이용하여 실험한 결과 38.28%로 정상인 개(8마리 정상 비글견에서 조사한 결과 $7.66{\pm}1.65%$ (P<0.01))에서 보다 높게 나왔다. 보호자가 항암치료는 원하지 않아서 실시하지 못하였으며 수술 7일 후 다시 재발하였으며 혈액검사 결과 심한 백혈구 증가증 및 비재생성 빈혈이 나타났다. 또한 폐전이 부위로 의심되는 부위가 악화되었으며 결국 심한 빈혈과 호흡곤란으로 폐사하였다.

Multi-Parameter Approach for Evaluation of Genomic Instability in the Polycystic Ovary Syndrome

  • Sekar, Nishu;Nair, Manju;Francis, Glory;Kongath, Parvathy Raj;Babu, Sandhya;Raja, Sudhakaran;Gopalakrishnan, Abilash Valsala
    • Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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    • 제16권16호
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    • pp.7129-7138
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    • 2015
  • Background: The polycystic ovary syndrome (PCOS), characterized by hyperandrogenism and chronic anovulation, is a common endocrine disorder in women. PCOS, which is associated with polycystic ovaries, hirsutism, obesity and insulin resistance, is a leading cause of female infertility. In this condition there is an imbalance in female sex hormones. All the sequelae symptoms of PCOS gradually lead to cancer in the course of time. It is heterogeneous disorder of unknown etiology so it is essential to find the exact cause. Materials and Methods: In this study both invasive and non-invasive techniques were employed to establish the etiology. Diagnosis was based on Rotterdam criteria (hyperandrogenism, ovulatory dysfunction, PCOM) and multiparameters using buccal samples and dermatoglypic analysis and cytogenetic study for 10 cases and four age and sex matched controls. Results: In clinical analysis we have observed the mean value of total testosterone level was 23.6nmol/L, total hirsutism score was from 12-24, facial acne was found in in 70% patients with 7-12 subcapsular follicular cysts, each measuring 2-8 mm in diameter. In dermatoglypic analysis we observed increases in mean value ($45.9^{\circ}$) of ATD angle when compared with control group and also found increased frequency (38%) of Ulnar loops on both fingers (UU), (18%) whorls on the right finger and Ulnar loop on left finger (WU) and (16%) arches on right and left fingers (AA) were observed in PCOS patients when compared with control subjects. Features which could be applied as markers for PCOS patients are the presence of Ulnar loops in middle and little fingers of right and left hand. The buccal micronucleus cytome assay in exfoliated buccal cells, we found decrease in frequency of micronuclei and significant increases in frequency of karyolysed nuclei in polycystic ovarian syndrome patients. Chromosome aberration analysis revealed a significant increase in frequency of chromosome aberrations (CAs) in PCOS patients when compared with controls. Conclusions: From this present work it can be concluded that non-invasive technique like dermatoglypics analysis and buccal micronucleus cytome assays with exfoliated buccal cell can also be effective biomarkers for PCOS, along with increased CAs in lymphocytes as a sign of genetic instability. There is a hypothesis that micronuclei and chromosomal aberrations could have a predictive value for cancer. From this present work it can be concluded to some extent that non-invasive technique like dermatoglypics and buccal cell analysis can also be effective for diagnosis.

도심 벽면녹화식물 능소화 (Campsis grandiflora K. Schum)의 화분 형태 및 세포독성에 근거한 유해성평가 (Hazard Assessment of Green-Wall Plant Campsis grandiflora K. Schum in Urban Areas based on Pollen Morphology and Cytotoxicity)

  • 김현준;소순구;신창호;노혜지;나천수;이유미
    • 환경생물
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    • 제33권2호
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    • pp.256-261
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    • 2015
  • 본 연구는 능소화를 대상으로 화분형태 및 RAW264.7 대식세포에서의 세포생존에 미치는 영향을 조사하여 유해성 여부를 파악하고자 한다. 주사전자현미경을 이용한 화분 형태를 확인해 본 결과, 화분립 형태는 장구형이고 발아구의 형태는 3공구형이며 화분 표벽 (extine)은 망상의 형태이고 외부로 돌출된 돌기는 관찰되지 않았다. 능소화 70% MeOH 부위별 (꽃, 잎, 줄기) 추출물 및 화밀을 24, 48시간 동안 농도별 (10, 20, 50, $100{\mu}g\;mL^{-1}$)로 RAW264.7 대식세포에 처리한 후 MTT assay로 측정하였다. 그 결과, 능소화 추출물 및 화밀을 농도별로 24시간 처리하였을 때 모든 농도에서 99.0% 이상의 세포생존율을 보여 세포독성은 나타나지 않았다. 48시간 처리하였을 때 꽃, 잎, 줄기 추출물은 $50{\mu}g\;mL^{-1}$농도 이하에서 세포독성은 나타나지 않았으나, 화밀의 경우 저농도인 $10{\mu}g\;mL^{-1}$부터 농도의존적으로 세포독성이 높아지는 것을 확인하였다.

Distribution of Oncogenic Human Papillomavirus Genotypes at High Grade Cervical Lesions above CIN 2 Grade with Histological Diagnosis

  • Kim, Geehyuk;Park, Sungyoung;Wang, Hye-young;Kim, Sunghyun;Park, Sangjung;Yu, Kwangmin;Lee, Boohyung;Ahn, Seung-Ju;Kim, Eun-Joong;Lee, Dongsup
    • 대한의생명과학회지
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    • 제22권2호
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    • pp.37-45
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    • 2016
  • High risk human papillomavirus (HR-HPV) is major risk factor for uterine cervical cancer. There are approximately 15 types of HR-HPV. Liquid based cytology samples (116 samples) with high grade cervical lesions belonging to cervical intraepithelial neoplasia (CIN) 2, CIN 3, carcinoma in situ (CIS) and squamous cell carcinoma (SCC) were used after histologic confirmation. HR-HPV genotype assay was conducted using DNA chips. The HR-HPV infection rate was 81.9% with SCC samples showing the highest HR-HPV infection rate of 31%. CIN 3, CIS and CIN 2 showed infection rates of 25%, 16.4% and 9.5%, respectively. According to age with HR HPV infection rate, the 30~39 years-old group showed the highest infection rate by 92.3%. According to distribution with HR HPV genotyping, HPV 16 showed the highest infection rate by 42.3% whereas HPV 33 and HPV 58 showed infection rates of 11.7% and 10.8%, respectively. HPV 18 which is the second most common infected HPV genotype in the world showed 3.6%. Of the three most common oncogenic HR-HPV genotypes in CIN 2, we detected HPV 16, 35, 58; CIN 3 was HPV 16, 33, 58; CIS was HPV 16, 58, 33 (35/52); and SCC was HPV 16, 33, and 18 (31/52/58). Among the HPV 18, CIN 2, CIN 3, CIS and SCC showed 0.9%, 0.9%, 0% and 1.8%, respectively. The most often used preventive vaccines for cervical cancers use HPV 16 and HPV 18 as targets. However, results derived from this study suggest that a preventive vaccine against HPV 16 and HPV 18 would not be optimal for populations in this study.

Expression of Functional Pentameric Heat-Labile Enterotoxin B Subunit of Escherichia coli in Saccharomyces cerevisiae

  • Lim, Jung-Gu;Kim, Jung-Ae;Chung, Hea-Jong;Kim, Tae-Geum;Kim, Jung-Mi;Lee, Kyung-Ryul;Park, Seung-Moon;Yang, Moon-Sik;Kim, Dae-Hyuk
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제19권5호
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    • pp.502-510
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    • 2009
  • Although the Escherichia coli heat-labile enterotoxin B subunit (LTB) has already been expressed in several different systems, including prokaryotic and eukaryotic organisms, studies regarding the synthesis of LTB into oligomeric structures of pentameric size in the budding yeast Saccharomyces cerevisiae have been limited. Therefore, this study used a functional signal peptide of the amylase 1A protein from rice to direct the yeast-expressed LTB towards the endoplasmci reticulum to oligomerize with the expected pentameric size. The expression and assembly of the recombinant LTB were confirmed in both the cell-free extract and culture media of the recombinant strain using a Western blot analysis. The binding of the LTB pentamers to intestinal epithelial cell membrane glycolipid receptors was further verified using a GM1-ganglioside enzyme-linked inmmunosorbent assay (GM1-ELISA). On the basis of the GM1-ELISA results, pentameric LTB proteins comprised approximately 0.5-2.0% of the total soluble proteins, and the maximum quantity of secreted LTB was estimated to be 3 mg/l after a 3-day cultivation period. Consequently, the synthesis of LTB monomers and their assembly into biologically active aligomers in a recombinant S. cerevisiae strain demonstrated the feasibility of using a GRAS microorganism-based adjuvant, as well as the development of carriers against mucosal disease.

기관배양을 통한 추간판 재생용 나노파이버 및 온도 감응성 지지체에 대한 검증 (Investigation of Nanofiber and Thermosensitive Scaffold for Intervertebral Disc through Organ Culture)

  • 이용재;신지원;신호준;김찬환;박기동;배진우;서형연;김영직;신정욱
    • 대한의용생체공학회:의공학회지
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    • 제28권4호
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    • pp.512-519
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    • 2007
  • The purpose of this study is to investigate the potential of a novel tissue engineering approach to regenerate intervertebral disc. In this study, thermosensitive scaffold (chitosan-Pluronic hydrogel) and nanofiber were used to replace the nucleus pulposus (NP) and annulus fibrosus of a degenerated intervertebral disc, leading to an eventual regeneration of the disc using the minimally invasive surgical procedure and organ culture. In preliminary study, disc cells were seeded into the scaffolds and cellular responses were assessed by MTT assay and scanning electron microscopy (SEM). Based on these results, we could know that tissue engineered scaffolds might provide favorable environments for the regeneration of tissues. Organ culture was performed in fresh porcine spinal motion segments with endplates on both sides. These spinal motion segments were classified into three groups: control (Intact), injured NP (Defect), and inserting tissue engineered scaffolds (Insert). The specimens were cultivated for 7 days, subsequently structural stability, cell proliferation and morphological changes were evaluated by the relaxation time, quantity of DNA, GAG and histological examination. In these results, inserting group showed higher relaxation time, reduced decrement of DNA contents, and accumulated GAG amount. Consequently, the tissue engineered scaffolds used in this study seen to be a promising base scaffolds for regenerative intervertebral disc due to its capacity to absorb external dynamic loading and the possible ideal environment provided for disc cell growing.

마우스와 사람 림프구에서 방사선에 의한 미소핵의 형성 및 고려인삼의 효과 (Induction of Micronuclei in Human and Mouse Lymphocytes Irradiated with Gamma Radiation and Effect of Panax ginseng C.A. Meyer)

  • 김성호;오헌;이송은;이윤실;김태환;정규식;류시윤
    • Journal of Radiation Protection and Research
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    • 제22권3호
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    • pp.153-160
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    • 1997
  • 사람의 말초혈액림프구와 C57BL/6마우스의 비장림프구를 사용하여 시험관내에서 감마선을 조사하고 배양하여 세포질분열 차단 림프구내에 형성되는 미소핵의 빈도를 측정하였다. 미소핵 발생빈도는 방사선조사 선량에 비례하여 증가하였으며 linen-quadratic 곡선식에 적용하여, 세포 당 0.2개의 미소핵이 유도되는 방사선량을 산출하면 사람의 말초혈액 림프구에 비하여 마우스 비장림프구에서 1.67배 민감하였다. 미소핵시험방법을 이용하여, 사람의 말초혈액 림프구에 대한 인삼의 방사선 방호효과를 시험관내 시험으로, 마우스의 미장림프구에 대한 효과를 생체내 시험으로 검정하였다. 사람림프구에 있어서 방사선(3Gy)에 의해 유도되는 미소핵의 수는 방사선조사 전 및 후 투여군에서 공히 감소하였으며(p<0.01), 마우스를 사용한 생체시험에서도 림프구의 미소핵 발생빈도는 낮게 관찰되었다(p<0.025). 이상의 결과에서 인삼은 인체에서도 방사선에 의한 세포장해를 감소시킬 가능성을 나타냈다.

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한약 단미제 분획의 Influenza virus type A 활성에 관한연구 (Study on the Influenza Type A Activity of Fractions of Korean Medicinal Herbs)

  • 정재득;박인호;이광희;김호경;고병섭;박갑주
    • 한국한의학연구원논문집
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    • 제3권1호
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    • pp.67-83
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    • 1997
  • In order to search for anti-influenza virus type A agents from Korean medicinal herbs, we selected 100 medicinal herbs, based on a review of the Korean traditional medicine books. Four of 100 Korean medicinal herbs, MM-40, MM-55, MM-63, MM-110, exhibited very strong anti-influenza virus activity. The fractions of four medicinal herbs, which had very strong anti-influenza virus activity, were tested for antiviral activity by means of Haemagglutination inhibition test(HTT), 40% MeOH fraction of MM-40, $H_2O$ fraction of MM-55, 20% fraction of MM-63 3nd $H_2O$ fraction of MM-110 had strong anti-influenza virus activity at the range of $78{\mu}g/ml$ to $156{\mu}g/ml$, 1.56mg/ml to 100mg/ml, 6.25mg/ml to 50mg/ml and $48.7{\mu}g/ml$ to $780{\mu}g/ml$, respectively. These results of HIT indicated that fractions of Korean medicinal herbs might inhibit either attachment of virus to cell surface receptor or penetration of virus into cell during the initial stage of infection. In the cytotoxicity of fractions against red blood cells, 40% MeOH fraction of MM-40, 20% fraction of MM-63 and $H_2O$ fraction of MM-110 showed cytotoxicity at the range of $78{\mu}g/ml$ to 10mg/ml, 50mg/ml to 100mg/ml and $195{\mu}g/ml$ to 100mg/ml, respectively, whereas $H_2O$ fraction of MM-55 did not show cytotoxicity. In order to establish influenza virus adapted animal model, influenza virus type A were passaged 3 and 4 times successively in Balb/c mouse. As a result, we had 4 HA unit titers on the 5 days of 3rd passages and 7 days of 4th passages after infection, respectively.

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제초제 내성 유전자 변형 옥수수 중 PAT단백질에 특이한 단크론성 항체의 생산과 특성 확인 (Production and Characterization of Monoclonal Antibodies Specific to PAT Protein Expressed in Genetically Modified Herbicide-Resistance Maize)

  • 김솔아;이정은;심원보;강성조;정덕화
    • 한국식품위생안전성학회지
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    • 제33권3호
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    • pp.193-199
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    • 2018
  • 본 연구에서는 유전자 변형 옥수수(GM 옥수수)에 특이한 단크론성 항체를 개발하고 이에 대한 특성을 확인하는 연구를 수행하고자 하였다. 먼저 형질전환 대장균으로부터 PAT 단백질을 발현시킬 수 있는 시스템을 확립하였고, 재조합 PAT 단백질을 대량 생산하여 항원으로 사용하였다. 준비된 항원을 면역한 결과 재조합 PAT 단백질의 항원성은 매우 높은 것으로 확인되었으며, 세포융합과 클로닝을 통해 12 종의 hybridoma를 확립하였고 western blot 결과 10 종의 hybridoma가 재조합 PAT 단백질과 강한 반응성을 나타내었다. 10종의 hybridoma가 생산하는 항체가 실제 GM 옥수수에 반응하는지를 추가의 western blot으로 분석한 결과 2종의 단크론성 항체(PATmAb-7 and PATmAb-12)가 재조합 PAT 단백질뿐만 아니라 실제 GM 옥수수 중 PAT와 반응하는 것으로 확인되었다. 항체를 대량 생산하고 정제한 후 2종의 항체는 SDS-PAGE 상에서 대표적인 항체의 분리패턴(heavy와 light chain)을 나타내었고, 전형적인 $IgG_1$${\kappa}$ type으로 확인되었다. 정제된 단크론성 항체는 특성을 조사한 결과 다른 GMO에서 발현될 수 있는 재조합 단백질과 non-GM 옥수수 추출물에는 반응성이 없고 PAT 단백질에만 특이적으로 반응하는 것을 확인할 수 있었다. PATmAb-7 를 이용한 간접효소면역분석법의 검출한계는 0.3 ng/mL 수준으로 기준의 유전자변형 콩 면역분석법과 비교했을 때 높은 민감도를 나타내었다. 이상의 결과로 볼 때 개발된 2종의 항체(PATmAb-7 and PATmAb-12)는 GM 옥수수에서 발현되는 PAT 단백질에 특이적으로 반응하는 항체로 확인되었고, 2종의 항체를 이용한 면역분석법과 바이오센서의 개발 가능성을 제시할 수 있었다.

손바닥선인장의 생리활성 비교 연구 (Comparison of Biological Activities of Opuntia humifusa and Opuntia ficus-indica)

  • 박철민;곽병희;박시형;김휘;류동영
    • 한국자원식물학회지
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    • 제26권5호
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    • pp.519-525
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    • 2013
  • 본 연구는 전남 신안군과 제주도에서 재배되고 있는 손바닥 선인장 두 종간의 생리활성을 비교 분석하기 위해 기존에 밝혀진 바 있는 생리활성을 중심으로 in vitro 조건에서 DPPH 라디칼 소거능, ${\alpha}$-glucosidase와 tyrosinase 활성 억제능, 대식세포의 cytokine 생성 증가효과 및 뇌세포 산화적 손상 억제효과를 측정하였다. ${\alpha}$-glucosidase 활성 억제 및 대식세포의 cytokine 생성 증가효과에서는 OFI 추출물의 효과는 거의 없거나 미약하게 보이지만, OH 추출물에서는 매우 효과적으로 높게 나타났다. DPPH 라디칼 소거능과 tyrosinase 활성 억제효과에서는 OFI와 OH 추출물간의 큰 차이가 없으나 OFI 추출물에서 조금 더 좋은 효과를 나타냈다. 손바닥선인장 줄기와 줄기 다당류 추출물의 생리활성 비교 연구에서는 DPPH 라디칼 소거능, ${\alpha}$-glucosidase 활성 억제능 및 대식세포의 cytokine 생성 증가효과가 손바닥선인장 줄기 다당류 추출물보다 줄기 추출물에서 효과적인 것으로 관찰되었다. 그러나 OFI 줄기 다당류 추출물의 tyrosinase 활성 억제효과는 양성대조물인 ascorbic acid 보다 높게 나타났다. 뇌세포 산화적 손상 억제효과에서는 시료를 첨가하지 않은 대조군에 비해 모든 추출물에서 뇌세포 사멸을 약간 감소시키는 경향만을 나타냈다. 결론적으로 우리나라에 재배되고 있는 손바닥선인장 두 종의 생리활성을 비교한 결과, OH-S 추출물은 ${\alpha}$-glucosidase 활성 억제능 및 대식세포의 cytokine 생성 증가효과 그리고 OFI-SP 추출물은 tyrosinase 활성 억제효과가 상대적으로 뛰어난 것으로 나타났다. 그러나 지역농민의 소득창출을 위한 유용생물자원으로서 고부가가치를 확보하기 위해서는 효율적인 추출법, 전임상 동물실험 그리고 유효성분의 개발과정이 수반되어야 한다고 사료된다.