In order to identify the effects of the kainic acid in the retina kainic acid (120 nmol/$5{\mu}l$) were injected through the pars plana of the ciliary body into the duck eye ball at 7th day after hatching. The animals were sacrificed by decapitation on the 1st, 4th and 10th day after injection of the kainic acid. The specimen was processed for the light and electron microscopes respectively. The results obtained were as followings 1. The inner nuclear, inner plexiform and ganglion cell layers of the retina showed marked changes in all of the groups. 2. The cells in the inner nuclear layer showed marked degenerative changes of the organelles including the pyknoses and destruction of the nucleus on the 1st day after injection. These destructive changes of the cells were progressively disappeared until the 10th day after injection. 3. After injection of the kainic acid the neurites of the inner plexiform layer were swollen at the first, and thereafter those changes were gradually disappeared until the 10th day. 4. In the ganglion cell defected by the kinic acid, the enlargement and segmentation of the endoplasmic reticulum and pyknosis of the nucleus were-observed in all the groups, although the lipid droplets were only shown in the 4th day. From the above results, the evidence suggests that kainic acid gives to the toxic effect on the nuurons of the retina with exception of the photoreceptors.
Therapeutic efficacy of mesenchymal stem cells (MSCs) is determined by biodistribution and engraftment in vivo. Compared to intravenous infusion, biodistribution of locally transplanted MSCs are partially understood. Here, we performed a pharmacokinetics (PK) study of MSCs after local transplantation. We grafted human MSCs into the brains of immune-compromised nude mice. Then we extracted genomic DNA from brains, lungs, and livers after transplantation over a month. Using quantitative polymerase chain reaction with human Alu-specific primers, we analyzed biodistribution of the transplanted cells. To evaluate the role of residual immune response in the brain, MSCs expressing a cytosine deaminase (MSCs/CD) were used to ablate resident immune cells at the injection site. The majority of the Alu signals mostly remained at the injection site and decreased over a week, finally becoming undetectable after one month. Negligible signals were transiently detected in the lung and liver during the first week. Suppression of Iba1-positive microglia in the vicinity of the injection site using MSCs/CD prolonged the presence of the Alu signals. After local transplantation in xenograft animal models, human MSCs remain predominantly near the injection site for limited time without disseminating to other organs. Transplantation of human MSCs can locally elicit an immune response in immune compromised animals, and suppressing resident immune cells can prolong the presence of transplanted cells. Our study provides valuable insights into the in vivo fate of locally transplanted stem cells and a local delivery is effective to achieve desired dosages for neurological diseases.
본 연구는 녹황색채소류에서 추출되어 항암효과를 나타내는 활성 물질로 보고되어 있는 phytol과 들미나리 추출물을 sarcoma 180마우스에 주사한 후 적출한 비장세포내 T임프구와 T subset, 그리고 asialo GM1$^{+}$세포를 정량하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1) 종양 마우스에 phytol 을 투여하였을 때 비장세포내의 T cell과 T-subset은 종양세포이식에 의해서 상승된 치를 더욱 증가시켰다. 그러나 들미나리추출물의 경우는 대동소이하였다. 2) Asialo GM1$^{+}$세포는 종양마우스에 phytol이나 들미나리추출물을 주사하였을 때 모두 상승하였으며 정상마우스에 phytol 을 투여하였을 때도 대조군에 비하여 상승했지만 들미나리추출물을 작용시켰을 때는 저하되었다. 3) L3T4$^{+}$/Lyt-2$^{+}$세포비는 종양마우스에 phytol을 주사하였을 때 감소를 보였지만 정상 마우스에 투여하였을 때는 더욱 크게 낮아졌다. 그러나 들미나리추출물을 정상마우스에 투여 하였을때는 크게 감소하던 것이 종양마우스에 적요 시켰을 때는 증가현상을 보였다. 이상의 결과로 미루어 볼 때 phytol이나 들미나리추출물은 종양마우스에서 작용자 세포인 자연살해세포(natural killer cell)의 활성 인자로서 작용할 가능성이 높을 것으로 사료된다.
In order to investigate the effects of Sakunjatang(四君子湯) and Samultang(四物湯) aqua-acupuncture on immune response, Sprague-Dawley male rats were used and randomly divided into four group. Normal group was normal control, Control group was injected i.v. with 2mg/kg MTX on 9th and 11th day after sensitization with SRBC on 5th day, Sakunjatang aqua-acupunctured group(Sample A) was aqua-acupunctured daily for 18 days into the locus corresponding Bisu(B20) locus of the human body to Rat and MTX was administered 9th and 11th experimental day, Samultang aqua-acupunctured group(Sample B) was aqua-acupunctured daily for 18 days into the locus coresponding Bisu(B20) locus of the human body to Rat and MTX was administered 9th and 11th experimental day. In the 9th day and the 11th day after aqua-acupuncture, MTX was injected to reduce immune function in the tail of rat. leukocyte count, lymphocyte ratio, lymphocyte count of spleen, lymphocyte count of bonemarrow, contact hypersensitivity to DNFB, morphologic change of thymus cell, and electropherogram of serum protein. The result were summarized as follows: 1. Before MTX injection, leukocyte count had no significant difference in Sakunjatang aqua-acupunctured group and Samultang aqua-acupunctured group compared to control group and after MTX injection, leukocyte count had no significant difference Sakunjatang aqua-acupunctured group and Samultang aqua-acupunctured group. 2. Before MTX injection, lymphocyte ratio was decreased significantly Sakunjatang aqua-acupunctured group and Samultang aqua-acupunctured group compared to control group. 3. After MTX injection, lymphocyte ratio was increased significantly Sakunjatang aqua-acupunctured group, Samultang aqua-acupunctured group had no significant difference compared to control group. 4. The lymphocyte count of spleen was increased significantly Sakunjatang aqua-acupunctured group and Samultang aqua-acupunctured group compared to control group. 5. The lymphocyte count of bonemarrow was increased significantly Sakunjatang aqua-acupunctured group, Samultang aqua-acupunctured group had no significant difference compared to control group. 6. Contact hypersensitivity was no significant difference in Sakunjatang aqua-acupunctured group and Samultang aqua-acupunctured group compared to control group. 7. In the morphologic change of thymus cell, control group compared to normal group had a indistinct boundary between cortex and medulla, and lymphocyte cell density of thymus was low, Sakunjatang aqua-acupuryctured group had a distinct boundary between cortex and medulla, and lymphocyte cell density of thymus was high. 8. In the SDS-PAGE electrophorogram of serum protein, Sakunjatang aqua-acupunctured group and Samultang aqua-acupunctured group had a wide band of nearby 50,000 and 25,000 Dalton which meant IgG generate more activity.
This paper dealt with the distribution of normal mast cells in the spleen, liver and lung on cattle, horses, pigs and dogs, and also degranulation of mast cells in the dogs infected with Rompun (2% Xylazine HCl). The results observed are summarized as follows. Normal mast cells were distributed in spleen, liver and lung on cattle, horse, pig and dog. Mast cells were observed in both red pulp and surroundings of white pulp of the spleen in horse, in the white pulp of the spleen in cattle, in the trabeculae of the spleen in pigs, and in white pulp and red pulp of the spleen in dogs, respectively. Mast cells were observed in the portal triad of the liver in cattle and horses, in both portal triad and interlobular connective tissues of the liver in pigs, and not only the portal triad but also walls of the sinusoids and the central veins in dogs. A large number of mast cells were observed in the interlobular septa and peribronchioles of lung on all the species in this experiment. The mast cells are more numerous in the lungs than other organs. Author considers that numbers of normal mast cells distributed in the tissue is related to the dosage of Rompun in animal. The degranulation of mast cells were observed in the subcutaneous tissues of dog intramuscularly injected with Rompun(0.5ml/times) for 4 or 5 times and subcutaneously injected with Rompun(0.3ml/times) for 4 times. In dog intradermally injected with 0.1ml of Rompun, mast cells were decreased in number at 30 minutes and markedly decreased in number at 2 hours, but more or less increased in number at 3 hours after injection. In addition, the granules of the mast cells were decreased in number at 30 minutes and marked degranulation of the mast cells were recognized at 2 hours after injections, but normal mast cells begun to appear in subcutaneous tissue with the lapse of time from 3 hours after injection. There was also observed local infiltration of neutrophils in subcutaneous tissues of dogs intradermally injected with 0.1ml of Rompun at 30 minutes. At 2 hours after injection, numerous neutrophils and a small number of eosinophils were observed in the site of injection. Conclusionally, Rompun was regarded as a factor which causes the degranulateon of mast cell and the authors considered that histamine released from the mast cells by Rompun might cause relaxation of skeletal muscle.
The exogenous gene transfer by intracytoplasmic sperm injection (ICSI) procedure has been recently used to produce transgenic mice and pigs. Sperm-mediated DNA transfer has the potential to markedly simplify the generation of transgenic animals. This method may serve as an alternative to the pronucleus injection of DNA for the production of transgenic pigs. Therefore, in this study, we investigated the expression of transgene after co-injection of spermatozoon or sperm head with green fluorescent protein (GFP) gene into in vitro matured porcine oocytes. Spermatozoon and sperm head, that was obtained by sonication, were treated with 0.03% Triton X-100 to remove the membrane. They were preincubated with linearized pEGFP-N1 for 1 min, and then embryos cultured NCSU23 medium for 2.5 days after co-injected of sperm and DNA. We monitored expression of GFP in embryos under epifluorescent microscope. The remove of sperm membrane did not alter the developmental competence of embryos after ICSI. At 7 days following injection, the rates of blastocysts following injection of intact sperm (15.0%), and of sperm with disrupted membrane (14.2%) were higher than that following IVF (10.0%). Porcine oocytes injected with sperm which co-cultured with DNA concentration of 1, 0.1, and 0.01 ng were 60, 65.7 and 75% and 18.5, 37.4 and 22.2% for rates of cleavage and GFP expression, respectively. In vitro matured porcine oocytes injected with sperm and isolated sperm head resulted in 69 and 59.7% of cleavage rates, respectively The rates of embryo GFP expressed did not significantly different between sperm (20.4%) and sperm head (20.0%) injection. The transgenic embryos with the clusters of positive blastomeres were observed under fluorescent microscope. Most of embryos expressed GFP gene showed mosaicism. They showed GFP expression at 1/4, 2/4 and 3/4 of blastomeres at the 4-cell stage. Among these 4-cell embryos, the expression rate of 1/4 blastomere group (54.6%) was higher than the other groups (15.3-30.7%). These results indicate that membrane disrupted sperm could attach with exogenous DNA, and that this procedure may be useful to introduce foreign gene into porcine oocytes. Therefore, our data suggest that the ICSI car be a useful tool to efficiently produce transgenic pig as well as other mammals.
This study was carried out to evaluate the efficiency of production of cloned embryos by nuclear translatation (NT) when using 4-cell to compact morula stage embryos as nuclear donor. In micromanitulation and electrofusion of blastomeres from 4-cell to morula stage embryos, the successful injection rate was higher with late stage blastomeres, on the contrary the fusion rate was lower. The in vitro developmental rate of NT embryos was not significantly different between cell-stages of donor blastomeres. Although the overall rate of production of cloned embryos with 4-cell. 8-cell, early and late morula stage embryos was 14.0, 18.0, 15.3 and 14.1%, respectively, the mean number of blastocysts produced with a donor embryo was the most (4.51) with the compact morulae. Therefore, it can be suggested that the embryos at thelate stage is more beneficial for the mulciple production of cloned embryos, If the late stage blastomeres have maintained their totipotency to produce intact offspring.
Methane hydrate, non-polluting new energy resource, satisfies requirement and considered as a precious resource that can prevent the global warming. Fortunately, there are abundant resources of methane hydrate distribute in the earth widely. Therefore, developing the techniques that can utilize these gases effectively is highly desired. The work in this paper here is to develop a skill which can transport and store methane hydrate. As a first step, the equilibrium experiment was carried out by increasing temperatures in the cell at fixed pressures. The influence of gas consumption rates under variable degree of subcooling, stirring and water injection has been investigated formation to clarify kinetic characteristics of the hydrate. The results of present investigation showed that the enhancements of the hydrate formation in terms of the gas/water ratio are closely related to operational pressure, temperature, degrees of subcooling, and water injection.
In this work, back bias effects in the program of the silicon-oxide-nitride-oxide-silicon (SONOS) cell using two-step pulse sequence, are investigated. Two-step pulse sequence is composed of the forward biases for collecting the electrons at the substrate terminal and back bias for injecting the hot electrons into the nitride layer. With an aid of the back bias for electron injection, we obtain a program time as short as 600 ns and an ultra low-voltage operation with a substrate voltage of -3 V.
The author studied the effects of anticancer Endoxan to the rat's teeth. Two hundred pregnant rats were used. The experimental rats were given an intramuscular injection of Endoxan as nitrogen mustard derivatives 10mg. per 40gm of body weight. In order to investigate effects of Endoxan to the teeth of rats the control and experimental rats group wee sacrificed on 1,3,5,7 and 14days, and made preparation for histopathologic findings. The rusults were as follows: 1. In several days (about 5days) after injection of Endoxan, tooth germs of cap stage, bell stage, and dental lamina were irregular arranged form as compared with in the control group teeth. 2. Irregular arranged cell were recovered from 14days after injection of Endoxan.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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