성숙하고 정상인 포유류 6종의 동물들을 이용하여 위에 분포하는 비만세포의 형태와, 세포내 과립의 구조적 형태의 종간차이를 비교하고자 전자현미경으로 관찰을 하였다. 저자는 특히 관찰된 세포질내 과립을 편의상 다음과 같이 분류하였다. 1) 동질성 과립 (homogeneous granule, GR1) 2) 미세 입자과립 (particulate granule, GR2) a. 고전자밀도 미세 입자과립 (dark dense particulate granule, GR2-1) b. 중전자밀도 미세 입자과립 (less dense particulate graunle, GR2-2) 3) 망상구조과립 (reticular granule, GR5) a, 고전자말도 망상구조과립(dark dense reticular granule, GR5-1) b. 저전자밀도 망상구조과립(light dense reticular granule, GR5-2) 포유류인 염소, 개, 고양이, 햄스터에서는 대부분 세포질내 소기관중 골지체 및 사립체가 나타났으며 세포질내 과립의 대부분이 전자밀도가 높은 동질성인 것 (GR1)과 미세입자형으로 된 것 (GR2)이 나타났다. 그러나 Guinea pig에서는 망상구조형의 과립들 (GR5-1, GR5-2)이 나타났다. 또한 개와 Guinea pig 에서 과립의 한쪽이 함몰되었거나 반월형인 것이 나타났다. 위 결과로 보아 표유류 각 종 간의 비만세포, 세포내 과립은 형태학적으로 차이가 있음을 알 수 있으며, 이러한 차이는 아마도 종 간의 기능에 따른 과립의 구조적 차이와 구성성분 및 성숙도등과 상관관계가 있는 것으로 추측된다.
한반도 중부지방인 충청남북도 7개 지역에서 재배되고 있는 벼 시료 21점을 채집하여 이들의 뿌리를 표면살균 한 후 내생균을 44주 분리하고 내생성 검정 시스템을 통해 정착력이 상대적으로 우수한 균주를 최종 16주 확보 하였다. 이들의 분리빈도는 뿌리 생체중 1g당 $10^{3-5}$ CFU로 나타났다. 흥미롭게도 이중 7주가 Eurkholderia 속 균으로 동정되어 기존의 다른 벼 내생세균 연구 결과와는 다른 특징을 보였다. 또한 GFP tagging 방법을 이용하여 분리균주 중 하나인 Enterobacter sp. KJ001 균주에 대해 뿌리조직 내 colonization 위치를 확인해본 결과 뿌리 조직 중 관다발 주변에 군락을 이루고 있음을 관찰하였다. Burkholderia 분리주들은 국내 재배 벼에서 높은 빈도로 분리되며 in vitro상에서 광범위한 진균성 식물병원균에 대해 우수한 길항력과 더불어 대부분 질소고정 관련 유전자인 nifH를 가지는 점으로 보아 질소고정에 의해 식물생육에 도움을 줄 수 있을 것으로 예측되며 실제로 오이 유묘의 생장을 30% 이상 촉진하는 효과를 보여 식물병 억제 및 감소와 더불어 작물의 생장 촉진 및 생산성 증대에 활용가치가 높은 내생균으로 사료된다.
Objectives: The development of an useful method for obtaining metaphase chromosomes from a biopsied blastomere would allow differentiation between embryos with balanced and normal chromosome complements in the preimplantation genetic diagnosis for chromosomal translocations. This study was performed to evaluate the effects of microtubule depolymerizing agents (MTDAs) on the blastomeres of mouse and human preimplantation embryos, and to establish an effective method for obtaining metaphase chromosomes of biopsied blastomeres in human early embryos. Materials and Methods: Early embryos (2-4 cell stage) from superovulated mice (ICR strain) were collected and treated with single or mixture MTDAs, such as vinblastine, nocodazole and colcemid. After the treatment of MTDAs for 16 hours, the metaphase aquisition (MA) rates were evaluated by the observation of chromosome status with bis-benzimide or DAPI staining. The optimal condition from the above experiment was applied to human embryos, which were developed from abnormal fertilization (3-pronuclei). Fluorescence in-situ hybridization (FISH) with whole chromosome probes was conducted on the human metaphase chromosomes by the MTDAs. Results: In mouse embryos, the effective concentrations of each MTDAs for obtaining metaphase chromosomes were $1.0{\mu}M$ of vinblastine (20.3%), $5.0{\mu}M$ of nocodazole (28.1%) and $1.0{\mu}M$ colcemid (55.6%), respectively. The highest MA rate (91.2%) in the mouse embryos was obtained by a mixture of vinblastine ($1.0{\mu}M$) and nocodazole ($1.0{\mu}M$). In the human embryos, the metaphase chromosomes of blastomeres were obtained in 44 of 113 blastomeres (38.9%) by treatment of the mixture of vinblastine and nocodazole. FISH signals of the metaphase chromosomes were successfully observed in human individual blastomeres. Conclusions: The treatment of a mixture MTDAs for obtaining metaphase chromosomes was an efficient method, and the MA rate was above 90% in the mouse embryos. However, only a relatively small proportions of the blastomeres yielded metaphase chromosomes by the MTDAs in the human embryos. The inconsistent effects of MTDAs may be related to the variation of different species and the poor developmental potency of abnormally fertilized human embryos. We should develop more reliable and efficient methods for obtaining the metaphase chromosomes in the biopsied blastomeres of human preimplantation embryos.
감귤저장 방법의 개선과 감귤 껍질의 효율적인 활용을 위해서 시판 중인 농약제제와 감귤정유의 감귤부패 관련 사상균에 대한 살균 작용을 조사하였다. Alternaria alternata, Rhizopus sp., Botrytis cinerea, Monilia candida, Penicillium italicum, Penicillium digitatum 등 6종의 사상균에 대한 시판 합성 농약제제 11종의 생육저해 효과를 조사한 결과, mancozeb 또는 fluazinam을 함유한 제제의 활성 범위가 가장 넓었고, conazole 계통의 화합물이 중간 정도의 활성 범위를 나타내었으며, iprodione, benomyl, azoxtrobin 또는 thiophanate을 함유한 제제의 항균활성 범위가 가장 좁은 것으로 나타났다. 농약제제의 생육저해 효과는 대상 균주에 따라 달랐으며, Penicillium italicum과 Alternaria alternata는 각종 살균제의 처리에 대한 생존력이 비교적 강하였다. 감귤정유를 상기 6개 균주의 포자와 각각 접촉시켰을 때는 그 어느 균주의 생존 포자도 검출되지 않았으며, 감귤정유의 살균력은 paper disk법과 현미경 관찰로도 증명되었다. 이는 감귤정유가 광범위한 살균력을 지니고 있음을 제시한다. 따라서 감귤 정유를 감귤저장에 활용하는 방법을 검토할 필요가 있다.
This study was performed to investigate the effect of desalinated underground seawater (named as 'magma seawater', MSW) of Jeju Island in Korea on lipid metabolism and antioxidant activity. MSW was collected from underground of Han-Dong in Jeju Island, and freely given to high fat diet (HFD)-fed C57BL/6 mice for 10 weeks. Although there were no significant differences in the body weight changes and plasma lipid levels, hepatic triglyceride levels were significantly lower in the MSW group than in the normal tap water (TW)-drunken control group. Furthermore, the activity of fatty acid synthase (FAS) was significantly decreased and carnitine palmitoyltransferase (CPT) activity was increased in MSW group compared to TW group. Similarly, real-time PCR analysis revealed that mRNA expressions of lipogenic genes were lowered in MSW groups compared to the control group. In a morphometric observation on the liver tissue, accumulation of fats was remarkably reduced in MSW group. Meanwhile, in vitro assay, tree radical scavenging activity measured by using diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) was increased in MSW group. The 2'-7'-dichlorofluorescein diacetate (DCF-DA) staining followed with fluorescent microscopy showed a low intensity of fluorescence in MSW-treated HepG2 cells, compared to TW-treated HepG2 cells, which indicated that the production of reactive oxygen species by tert-butyl hydroperoxide (t-BHP) in HepG2 cells was decreased by MSW treatment. The antioxidant effect of MSW on t-BHP-induced oxidative stress in HepG2 cells was supported by the increased activities of intracellular antioxidant enzymes such as catalase and glutathione reductase. From these results, we speculate that MSW has an inhibitory effect on lipogenesis in liver and might play a protective role against cell damage by t-BHP-induced oxidative stress.
Sodium chloride plays an important role as the main condiment at daily meal. It is well known that humans require sodium chloride as an essential nutrient to keep the homeostasis of electrolytes. The amounts of salt intake may be a reflection of geography, culture and food habit rather than necessity. Lee has reported (1962) that Koreans ingest high amounts of sodium chloride in their meals, with an intake of excess carbohydrate (80-90% of total Calories) and low protein in their diet. This includes large amounts of rice, Kimchi and other fermented soybean products common in the Korean diet. This investigation was designed to study the dietary relations of sodium chloride to other nutrients in the Korean diet. Twenty four albino male rats, weighing from 290-300g, were divided into four dietary groups according to the amounts of carbohydrate, protein and fat in the basal diet. Each diet contained a rice powder as a carbohydrate source. Diet I was a control diet, Diet II, low protein, Diet III, low protein and low fat diet and Diet IV, low fat diet. All rats were provided with 3% sodium chloride solution. Diet and salt solution were given ad libitum. The experiment was carried out for 9 weeks during which time the body weight, the food intake, and 3% sodium chloride solution consumption were determined. At the 9th week, the urine was collected the blood sample from the artery of each rat for the analysis of sodium and potassium and other chemical studies. The rats were sacrificed and the kidney, adrenal, liver and spleen were measured, and observed changes of the pathological tissue in the kidney and adrenal. The results were summarized as follows: 1) The growth rate was higher in Diet I than in the other experimental diets (II, III and IV) after 4 weeks. There was no significant difference found between the experimental Diets II, III and IV. 2) The daily food intake was greater in the experimental diets II, III and IV than in the control diet. However, there was no difference among the high carbohydrate diets Diet II, III and IV. 3) The daily water (3% sodium chloride solution) intake was also greater in the Diets II, III and IV, than in the control diet. However, there was no difference between Diets II, III and IV. 4) The concentration of sodium and potassium in the blood were within the normal range in all diets. 5) The amount of sodium chloride in the urine was significantly greater in Diets II, III and IV than in the control diet. Diets II, III, IV had a larger amount of sodium solution consumption. 6) Observation of pathological tissue in the experimental diets found a cell proliferation in the glomerlulus of the kidney, while such change was not found in the control diet.
The immunomodulatory effects of Aureohasidium pullulans SM-2001 exopolymers containing $\beta$-1,3/1,6-glucan were evaluated in cyclophosphamide (CPA)-treated mice. To induce immunosuppression, 150 and 110 mg/kg of CPA were intraperitoneally injected 3 days and 1 day, respectively, before beginning administration of the test material. Exopolymers were delivered subcutaneously or orally, four times, in a volume of 10 ml/kg at 12-h intervals beginning 24 h after the second CPA treatment. Changes in thymus and spleen weights, splenic amounts of tumor necrosis factor (TNF)-$\alpha$, interleukin (IL)-$1{\beta}$, and IL-10, and numbers of CD3+, CD4+, CD8+, and TNF-$\alpha+$ thymus and spleen cells were monitored in CPA-treated mice. As a result of CPA treatment, dramatic decreases in the number of CD3+, CD4+, CD8+, and TNF-$\alpha+$ cells were detected in the thymus and spleen, along with decreases in thymus and spleen weights. In addition, splenic TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$, and IL-10 contents were also decreased on observation with flow cytometry. However, oral and subcutaneous treatments with exopolymers effectively reduced the immunosuppressive changes induced by CPA. Therefore, it is concluded that exopolymers of A. pullulans SM-2001 can effectively prevent immunosuppression through, at least partially, the recruitment of T cells and TNF-$\alpha+$ cells or enhancement of their activity, and can provide an effective component of prevention or treatment regimens for immunosuppression related to cancer, sepsis, and high-dose chemotherapy or radiotherapy.
Although the parallel prescription of Sopoongsangagambang (SG) administration along with external treatment such as spraying or ointment application on the skin is clinically used for the treatment of atopic dermatitis (AD), molecular mechanism underlying its effectiveness is unknown. Thus in the present study, diverse immune responses in terms of chemical mediators related to AD were investigated using an atopic mouse model NC/Nga after SG administration and external treatment (ET), and major findings are summarized as follows. 1. The clinical severities in 16 and 20 week old NC/Nga mice with SG and ET treatment were decreased to 72.2% and 62.3% respectively compared to the control NC/Nga mice with no drug treatment. 2. IgE, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, IgM, IgG1 and IgG2a levels in the serum of SG and ET treated NC/Nga mouse group were significantly decreased compared to the untreated control mice. In contrast, $IFN-{\gamma}$ showed a significant increase in the experimental group compared to the untreated control group. 3. The spleen weight of SG and ET treated NC/Nga mice was significantly decreased compared to the untreated control group. 4. The B/T ratio in the lymph node of SG and ET treated NC/Nga mice was increased compared to the untreated control group. $CD4^+\;and\;CD8^+$ cell numbers in the lymph node of SG and ET treated NC/Nga mice were significantly increased compared to the untreated control group, but $CD69^+\;and\;CD11a^+$ cells were significantly decreased. 5. mRNA expression levels of IL-4, IL-5, and CCR3 in the skin tissues of SG and ET treated NC/Nga mice were significantly decreased, and expression levels of IL-6, IL-13, $CD69^+/CD3{\varepsilon}^+\;and\;CD19^+/CD44^+$ in the skin tissues of SG and ET treated NC/Mga mice were significantly decreased compared to the untreated control group. $IFN-{\gamma}$ mRNA expression levels were increased compared to the untreated control group. 6. Histological observation of the ear and neck skin tissues showed that the extents of inflammation and infiltrated immune cells in the epidermis and dermis of SG and ET treated NC/Nga mice were highly reduced compared to the untreated control group. 7. Lymphokine assay showed a significant decrease in IL-4 levels in SG and ET treated NC/Nga mice compared to the untreated control group, but the levels of $IFN-{\gamma}$ secretion were significantly increased drug treated NC/Nga mice.
Objective : This Experimental study was done to investigate the Effect of Taklisodok-um and Hwangryunhaedok-tang(TH) on Atopic Dermatitis. Methods : We assessed effects of TH on the IgE, IL-4, IL-5, IL-6, IgM, IgG1, IFN-${\gamma}$ in vivo, on the IL-4, IL-5, CCR3 in the skin tissues of ear and dorsum with NC/Nga mice. And we assessed effects of TH on the COX-2, IL-$1{\beta}$, TNF-${\alpha}$, IL-6 with RAW 264.7 cell. Results and Conclusion : 1. IgE, IL-4, IL-5, IL-6, IgM, IgGl levels in the serum of TH treated NC/Nga mouse group were decreased compared to the untreated control mice. IFN-r showed a increase in the experimental group compared to the untreated control group. The spleen weight of TH treated NC/Nga mice was decreased compared to the untreated control group. 2. mRNA expression levels of IL-4, IL-5 and CCR3 in the skin tissues of TH treated NC/Nga mice were decreased, and expression levels of IL-6 in the skin tissues of TH treated NC/Nga mice were decreased compared to the untreated control group. IFN-${\gamma}$ mRNA expression levels were increased compared to the untreated control group. 3. Judged from that IL-$1{\beta}$, TNF-${\alpha}$, IL-6 express of gene, effect of inflammatory Cytokines revelation were decreased compared to the untreated control group. 4. Depend on the strength of TH, inflammatory RAW 264.7 in the serum of TH were inhibited compared to the untreated control serum that leaded a COX-2 activity model. 5. Histological observation of the ear and skin tissues showed that the extents of inflammation and infiltrated immune cells in the epidermis and dermis of TH treated NC/Nga mice were highly reduced compared to the untreated control group.
장류의 유해균과 biogenic amines 함량을 줄이기 위해 항균작용과 biogenic amines 분해능력이 있는 한 균주를 83종의 전통장류로부터 분리하였다. 형태 및 생화학적 특성, 16S rRNA 유전자 서열 해독 결과 이 균주는 Bacillus licheniformis에 속했으며, B. licheniformis SCK B11로 명명되었다. SCK B11을 이틀간 배양한 후의 원심분리 상층액은 유해 균주들인 Enterococcus faecalis, Listeria monocytogenes, Micrococcus luteus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Aspergillus flavus에 대해 균 증식 저지력을 보였다. 이 균주의 항균 특성을 확인하기 위해 B. licheniformis의 항균물질로 알려진 surfactin, lichenysin, lichenicidine 합성 유전자들에 대한 PCR을 수행한 결과 모두 음성으로 나와 이 항균 물질은 기존에 보고된 물질들과는 다름을 보였다. 또한 전자 현미경 사진 결과 이 항균 물질은 유해균들의 세포막 손상을 야기하는 것이 관찰되었다. 이 균주는 각각 5.3%의 histamine과 tyramine이 함유된 삶은 콩에서 10일의 발효 기간 동안 histamine 함량의 72%, tyramine 함량의 66%를 분해하는 것으로 나타났다. SCK B11의 항균 및 biogenic amine 분해 특성을 고려할 때, 공정상 필연적으로 유해균 증식 및 biogenic amine 생성 문제를 지닌 전통 장류 발효 과정에서 이 균주는 이 문제점들을 해결할 수 있을 것으로 보인다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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