• 제목/요약/키워드: Cell Extraction

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Detection of Superior Markers for Polymerase Chain Reaction Diagnosis of Breast Cancer Micrometastasis in Sentinel Lymph Nodes

  • Shargh, Shohreh Alizadeh;Movafagh, Abolfazl;Zarghami, Nosratolah;Sayad, Arezou;Mansouri, Neda;Taheri, Mohammad;Pour, Atefeh Heidary;Iranpour, Mostafa;Ghaedi, Hamid;Montazeri, Vahid;Massoudi, Nilofar;Hashemi, Mehrdad;Mortazavi-Tabatabaei, SA
    • Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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    • 제17권sup3호
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    • pp.179-183
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    • 2016
  • Breast cancer is the most prevalent type of cancer among women around the world, and mortality is primarily caused by micro-metastatic disease. The complex mechanisms of breast cancer invasion and metastasis are intrinsically related to the malignant cell type so that early detection of micro-metastases can help prolongation of survival for patient. The aim of the present research work was evaluation of the expression status of mammoglobin protein as a candidate molecular marker in the negative sentinel lymph node (SLN). Fifty tumor specimens, and 50 normal adjacent breast tissue samples from the same patients were selected on the basis of having more than 10% tumor content for RNA extraction from SLNs. Tumor samples and normal adjacent breast tissue were archived in the form of frozen fresh tissue in liquid nitrogen. Real-time PCR was performed on a Bioner life express gradient thermal cycler system. Mammoglobin gene overexpression in breast cancer metastasis was investigated. Single marker results were mammaglobin 66.7% and CK19 50.0%, with 58.3% for the two in combination. Due to improved outcome with at least 3 genes (83.3%), it seems, triple marker evaluation will be most likely useful for detecting micro-metastases instead of studying separate genes.

LPS로 유도한 Raw 264.7 세포에서 A.C.C. 추출물의 항염증 효과 (The anti-inflammation effects of A.C.C. extracts on the LPS-induced Raw 264.7 cell)

  • 류진협;안주희;우용규;조현정
    • 한국산학기술학회논문지
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    • 제18권12호
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    • pp.503-511
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    • 2017
  • 본 연구의 목적은 황백을 포함한 총 14가지의 한약재를 증류 추출하여 얻은 시료(A.C.C. 추출물)의 항염증 활성을 확인하고 임상적인 효과를 평가하는 것이다. 이를 위해, Lipopolysaccharide(LPS)로 자극한 RAW 264.7세포에서 세포가 방출하는 nitric oxide(NO) 생성량과 염증성 사이토카인인 tumor necrosis factor(TNF)-${\alpha}$, interleukin(IL)-$1{\beta}$ 및 IL-6 생성량의 변화를 확인하였다. 그 결과, A.C.C. 추출물은 세포 독성없이 LPS가 증가시킨 NO와 염증성 사이토카인들의 생성을 강력하게 억제하였다. 또한, A.C.C. 추출물은 Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, MRSA(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus), Candida albicans and Streptococcus mutans 등의 세균들에서 99.9%의 강력한 세균 감소율을 보여 주었다. 이는 A.C.C. 추출물이 항염증 효과와 함께 강력한 항균 효과를 가진 유효한 성분인 것을 의미한다. 또한, 기저귀 발진, 가려움증, 땀띠 증상을 겪고 있는 영 유아에게 A.C.C. 추출물을 도포하였을 때, 발진, 아토피, 짓무름, 가려움증, 땀띠 등의 증상 개선 효과를 나타내었으며, 영 유아 피부의 땀띠가 2주일 경과 후 상당히 완화된 것을 육안으로 확인할 수 있었다. 이는 A.C.C. 추출물이 임상적으로도 항염증 및 항균작용을 통하여 기저귀 발진 및 땀띠 등의 증상을 완화 시키는 물질임을 확실히 한 것이다. 그러므로, A.C.C. 추출물이 염증성 질환에 대한 효과적인 대안이 될 수 있을 것으로 사료된다.

인산형 연료전지용 백금촉매제조에서 황의 제거에 따른 전극 성능 (Effect of the Sulfur Removal in Manufacturing Pt/C Electrocatalysts on the Performance of Phosphoric Acid Fuel Cell)

  • 심재철;이경직;이주성
    • 공업화학
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    • 제9권4호
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    • pp.486-490
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    • 1998
  • 콜로이드법을 이용하여 인산형 연료전지에서 전극촉매로 사용되는 Pt/C 분말을 제조하였다. 이 때 환원제로 사용되는 $Na_2S_2O_4$ (sodium hydrosulfite)로부터 유입되는 황성분이 연료전지의 장기운전시 촉매독으로 작용하는 것으로 알려져 었다. 따라서 다음의 3가지 방법을 이용하여 황을 제거하였다. 첫 번째, 열처리에 의한 황의 제거시 온도가 올라갈수록 황의 제거 효과가 좋지만 너무 높은 온도에서는 백금입자의 크기가 성장하여 입자의 크기가 $50{\AA}$ 이상이 되면 전극성능이 감소하였다. 최적의 열처리 온도는 $400^{\circ}C$ 이었으며, 이 때의 백금입자의 크기는 $35{\sim}40{\AA}$였으며, 반전지 측정시 0.7V의 전압에서 $360mA/cm^2$의 전류밀도를 나타내었다. $400^{\circ}C$에서 1시간, 3시간, 5시간 동안 처리하였을 경우 백금입자의 크기는 변함이 없었고 황제거율은 각각 비슷하였다. 두 번째, 환원성 분위기의 도가니 속에서 열처리를 했을 경우 $900^{\circ}C$의 같은 온도에서 수소분위기에서의 열처리보다는 황의 제거율은 떨어지나 같은 온도에서 백금입자의 성장이 작아 상대적으로 좋은 전극성능을 보여 주었다. 세 번째, 용매추출의 경우에는 초기에 일부의 황을 제거할 수 있음을 확인하였고 이 때의 전극성능은 서로 비슷하였다.

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Cloning and protein expression of Aggregatibacter actinomycetemcomitans cytolethal distending toxin C

  • Lee, Eun-Sun;Park, So-Young;Lee, Eun-Suk;Kim, Hyung-Seop
    • Journal of Periodontal and Implant Science
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    • 제38권sup2호
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    • pp.317-324
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    • 2008
  • Purpose: Aggregatibacter actinomycetemcomitans was associated with localized aggressive periodontitis, endocarditis, meningitis, and osteomyelitis. The cytolethal distending toxin (CDT) of A. actinomycetemcomitans was considered as a key factor of these diseases is composed of five open reading frames (ORFs). Among of them, An enzymatic subunit of the CDT, CdtB has been known to be internalized into the host cell in order to induce its genotoxic effect. However, CdtB can not be localized in host cytoplasm without the help of a heterodimeric complex consisting of CdtA and CdtC. So, some studies suggested that CdtC functions as a ligand to interact with GM3 ganglioside of host cell surface. The precise role of the CdtC protein in the mechanism of action of the holotoxin is unknown at the present time. The aim of this study was to generate recombinant CdtC proteins expression from A. actinomycetemcomitans, through gene cloning and protein used to investigate the function of Cdt C protein in the bacterial pathogenesis. Materials and Methods: The genomic DNA of A. actinomycetemcomitans Y4 (ATCC29522) was isolated using the genomic DNA extraction kit and used as template to yield cdtC genes by PCR. The amplifed cdtC genes were cloned into T-vector and cloned cdt C gene was then subcloned to pET28a expression vector. The pET28a-cdtC plasmid expressed in BL21 (DE3) Escherichia coli system. Diverse conditons were tested to opitimize the expression and purification of functional CdtC protein in E. coli. Results: In this study we reconstructed CdtC subunit of A. actinomycetemcomitans Y4 and comfirmed the recombinant CdtC expression by SDS-PAGE and Western Blotting. The expression level of the recombinant CdtC was about 2% of total bacterial proteins. Conclusion: The lab condition of procedure for the purification of functionally active recombinant CdtC protein is established. The active recombinant CdtC protein will serve to examine the role of CdtC proteins in the host recognition and enzyme activity of CDT and investigate the pathological process of A. actinomycetemcomitans in periodontal disease.

인삼추출물의 랫트 비만세포 히스타민 유리 억제 효과 (Inhibitory Effects of Ginseng Extracts on Histamine-release from Rat's Mast Cell)

  • 박광현;김영선;정재훈
    • 한국자원식물학회지
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    • 제24권1호
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    • pp.98-104
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    • 2011
  • 수삼 추출물에서 홍삼특이 사포닌 성분의 함량을 증대시키고자 추출온도 및 시간에 따른 사포닌 성분별 함량 변화를 조사하였다. 수삼을 $85^{\circ}C$에서 48시간 추출 시 총 사포닌 함량이 23.5 mg/g(D.W.)로 가장 많았으며, 본 조건에서 추출한 인삼추출물의 항알러지 기능성을 검토하고자 랫트 비만세포에서 compound 48/80로 유도된 히스타민 유리 작용을 억제하는 인삼추출물의 효능을 분석하였다. 인삼추출물의 비만세포에 대한 세포 독성 시험 결과 각 추출물은 수시간 노출시 높은 세포 생존율을 보이고 있었고 비교적 고농도인 0.5 mg/ml 처리군에서도 80% 이상의 세포 생존율을 보였다. 인삼추출물의 히스타민 유리 억제 효과를 조사하기 위해 랫트 비만세포에 대표적인 탈과립 유도제인 compound 48/80을 단독 또는 각 추출물을 동시에 처리한 후 얻어진 상청액의 히스타민의 정량을 실시한 결과 비만세포는 compound 48/80의 처리 조건에서 대조군에 비하여 30% 가량의 히스타민 유리량이 증가하였는데, 인삼추출물 처리 시 히스타민 유리 수준이 정상 수준에 가까이 감소하는 것을 확인하였다. 이는 인삼추출물의 항 알러지 목적으로의 이용 가능성을 제시하고 있다.

신장조직(腎臟組織)에서 백강잠 추출물(抽出物)의 항산화(抗酸化) 작용(作用)에 관(關)한 연구(硏究) (Antioxidant action of Bombycis corpus extraction in renal tissues)

  • 이무형;윤철호;정지천
    • 동국한의학연구소논문집
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    • 제7권1호
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    • pp.87-98
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    • 1998
  • 백강잠 추출물이 신장조직에서 반응성 산소기들에 의한 지질의 과산화와 세포 손상을 방지하는지를 관찰하기 위하여 정상조직과 t-BHP를 처리한 조직에서 백강잠 추출물의 효과를 조사하였다. 지질의 과산화와 LDH 유출은 t-BHP의 농도에 비례하여 증가되었으나, 백강잠 추출물의 첨가로 유의하게 억제되었다. 그리고, t-BHP에 의한 지질의 과산화 및 LDH 유출은 백강잠 추출물의 농도에 비례하여 억제되었다. 또한, 백강잠 추출물은 oxidant를 처리하지 않은 정상조직에서도 지질의 과산화 및 LDH 유출을 유의성 있게 감소시켰다. 그리고, catalase 활성에는 영향이 없는 반면, 정상 조직과 t-BHP를 처리한 조직에서는 glutathione peroxidase 활성을 유의성 있게 증가시켰다. 한편, 반응성 산소기의 발생은 백강잠 추출물의 농도에 비례하여 억제되었다. 이러한 결과로 볼 때, 백강잠 추출물은 신장 조직내 항산화 효소의 활성을 증가시킴과 동시에 직접 반응성 산소기의 발생을 억제하므로 신장 조직에서 지질의 과산화와 세포손상을 방지하는 효과가 있을 것으로 여겨진다.

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Periodontopathogen LPSs Regulate MicroRNA Expression in Human Gingival Epithelial Cells

  • Lee, Hwa-Sun;Na, Hee-Sam;Jeong, So-Yeon;Jeong, Sung-Hee;Park, Hae-Ryoun;Chung, Jin
    • International Journal of Oral Biology
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    • 제36권3호
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    • pp.109-116
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    • 2011
  • Periodontitis results from the activation of host immune and inflammatory defense responses to subgingival plaque bacteria, most of which are gram-negative rods with lipopoly-saccharides (LPSs) in their cell walls. LPSs have been known to induce proinflammatory responses and recently it was reported also that they induce the expression of microRNAs (miRNAs) in host cells. In our current study therefore, we aimed to examine and compare the miRNA expression patterns induced by the LPSs of major periodontopathogens in the human gingival epithelial cell line, Ca9-22. The cells were treated with 1 ${\mu}g$/ml of E. coli (Ec) LPS or 5 ${\mu}g$/ml of an LPS preparations from four periodontopathogens Porphyromonas gingivalis (Pg), Prevotella intermedia (Pi), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa), and Fusobacterium nucleatum (Fn) for 24 h. After small RNA extraction from the treated cells, miRNA microarray analysis was carried out and characteristic expression profiles were observed. Fn LPS most actively induced miRNAs related to inflammation, followed by Aa LPS, Pi LPS, and Ec LPS. In contrast, Pg LPS only weakly activated miRNAs related to inflammation. Among the miRNAs induced by each LPS, miR-875-3p, miR-449b, and miR-520d-3p were found to be commonly up-regulated by all five LPS preparations, although at different levels. When we further compared the miRNA expression patterns induced by each LPS, Ec LPS and Pi LPS were the most similar although Fn LPS and Aa LPS also induced a similar miRNA expression pattern. In contrast, the miRNA profile induced by Pg LPS was quite distinctive compared with the other bacteria. In conclusion, miR-875-3p, miR-449b, and miR-520d-3p miRNAs are potential targets for the diagnosis and treatment of periodontal inflammation induced by subgingival plaque biofilms. Furthermore, the observations in our current study provide new insights into the inflammatory miRNA response to periodontitis.

황금 발효물의 항산화 및 미백 효과 증진 (Enhancement of Antioxidant and Whitening Effect of Fermented Extracts of Scutellariae baicalensis)

  • 엄지나;민진우;주광식;강희철
    • 대한화장품학회지
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    • 제43권3호
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    • pp.201-210
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    • 2017
  • 황금(Scutellariae baicalensis)은 항염 작용이 뛰어나 예로부터 사용되어온 약재로, 본 연구는 인삼에서 분리한 유산균 Leuconostoc mesenteroides (L. mesenteroides)을 이용해 황금 발효물을 제조하고 항산화와 미백 효과를 조사하였다. 황금 발효물은 황금을 70% 에탄올로 추출한 후에 L. mesenteroides를 접종하여 발효제조하였다. 발효 전 황금과 황금 발효물에서 2가지 지표 성분 baicalin과 baicalein을 high-performance liquid chromatography (HPLC)을 이용하여 retention times ($t_R$)과 UV spectra를 확인함으로써 정성 및 정량 분석하였다. 세포 생존율 실험 결과, 발효 전후 황금 모두 독성이 확인되지 않았고 DPPH 라디칼 소거능 실험은 발효물의 $SC_{50}$ 값이 $34.43{\mu}g/mL$ 로 발효 전보다 우수한 효능을 나타내었으며, 세포 독성을 나타내지 않는 농도에서 흑색종 세포인 B16F10을 이용한 melanin 생성 억제 활성 실험 결과, 황금 발효물은 우수한 melanin 생성 억제 효과를 나타내었다($IC_{50}=68.17{\mu}g/mL$). 이상의 결과들로부터 황금 발효물이 항산화 효능뿐만 아니라 미백 효능을 갖는 화장품 원료로서 개발 가능성이 있음이 시사되었다.

쥐치아 치근면의 치주인대세포의 활성도를 평가하는 방법으로 MTT검색법의 적절성에 대한 조직학적인 검증 (THE VERIFICATION OF THE MTT ASSAY ON THE VIABILITY OF PERIODONTAL LIGAMENTAL CELLS IN RAT MOLARS THROUGH THE HISTOLOGIC EXAMINATION)

  • 김현기;김의성;최인복;김진;이승종
    • Restorative Dentistry and Endodontics
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    • 제28권5호
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    • pp.385-391
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    • 2003
  • The purpose of this study is to examine the viability of PDL cells in rat molars by using MTT assay and to verify the MTT assay through the histologic observation. Thirty of Sprague-Dawley white female rats of 4-weeks old with a body weight of about 100 grams were used. Groupings are as follows : Immediate Group : Positive control group(n=10)-after extraction immediately. Dried Group : Negative control group(n=10)-after drying for an hour under warm dry. $ViaSpan^{\circledR}$ Group : 1hour $ViaSpan^{\circledR}$ group(n=10)-after storing in $ViaSpan^{\circledR}{\;}at{\;}4^{\circ}C$ for 1hour. Ten teeth of each group were treated as same as above and replanted to the original socket of experimental animals. After two weeks of replantation. all the experimental animals were sacrificed. And after fixation, extracted maxillary jaw was dimineralized. After it was embedded in paraffin. serial section by $5\mu\textrm{m}$ was carried out and for construction of specimen, hematoxylin-eosin dye was used. The mean MTT measurement of immediate group(positive control) is 2.81 and the mean measurement of dried group(negative control) is 0.98 which is significantt differnt(P<0.05), The mean measurement of $ViaSpan^{\circledR}$ group is 2.65 and there is significant difference between dried group and $ViaSpan^{\circledR}$ group(P<0.05), However, there is no difference between immediate group and $ViaSpan^{\circledR}$ group. The average resorption points of immediate group is 3.03 points. In the dried group, average 6.44 points resorption and 2.68 points showed resorption in the $ViaSpan^{\circledR}$ group. Unlike with MTT assay, there was no significant difference between the immediate group and $ViaSpan^{\circledR}$ group. The usage of MTT assay as a viable cell marker may give us a better indication of the maintenance of periodontal ligament cell vitality.

천마(Gastrodia elata)로부터 분리한 VHR DS-PTPase 저해 물질 (The VHR Dual-Specificity Protein Tyrosine Phosphatase (DS-PTPase) Inhibitor Isolated from Gastrodia elata)

  • 이명선;오원근;배은영;안순철;손천배;히로유키 오사다;안종석
    • 한국식품과학회지
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    • 제34권3호
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    • pp.505-509
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    • 2002
  • 천마의 methanol 추출물로부터 VHR DS-PTPase 저해 물질을 분리하여 이를 HREI-MS와 $^1H-NMR$, $^{13}C-NMR$, DEPT 등의 기기 분석 자료에 의하여 baicalein으로 구조를 동정 하였다. 이 물질은 VHR에 대하여 $2.4{\mu}M$$IC_{50}$값을 나타내었고 T-cell PTPase나 PPase 1과 같은 다른 단백질 탈인산화 효소에 대하여는 저해 활성을 나타내지 않았다. 또한 7종류의 인간 암세포주(흑색종 세포주인 LOX-IMVI, 폐암 세포주인 NCI H23과 A549, 대장암 세포주인 HCT 116와 SW 620, 전립선암 세포주인 PC-3와 백혈병 세포주인 MOLT 4F)에 대한 세포독성을 조사하여 본 결과 $5.26{\sim}12.93\;{\mu}g/mL$에서 $GI_{50}$값을 나타내었다.