This study was conducted to measure the total protein, DNA, and RNA contents of corpus luteum(CL) in various stages of estrous cycle and pregnancy. CLs were collected from a local slaughterhouse and stages of the estrous cycle of CL were classified as CL1~2, days 1 to 10; CL3(with/without central cavity), days 11 to 17; CL4, days 18 to 20 by method of Ireland et. al(1980) and stages of the pregnancy of CL were classified as P1~3, months 11~3: P4~6, months 4~6; P7~9, months 7~9 of pregnancy. CL3 with/without central cavity(CC) was identified as described by Kastelic et. al.(1990)-CL with CC, more than 2mm in diameter; CL without CC, less than 2mm in diameter. In total protein content, CL3 with CC was significantly lower than P7~9(p<.05). The total DNA content was lower in CL3 with CC than CL3 without CC and CL4(p<.05). In protein : DNA ratio, CL3 with CC was significantly lower than CL4(p<.05), CL3 without CC was significantly lower than P7~9(p<.05), CL4 was significantly lower than CL3 with CC, P1~3 and P7~9(p<.05). No differences were observed in RNA content, protein:RNA ratio, RNA/DNA of CLs in stages of estrous cycle and pregnancy.
젖소 난소 황체에 있어서 중심강의 유무에 따른 황체 조직 중의 total protein, DNA 및 RNA 함량을 조사하여 중심강이 있는 황체와 중심강이 없는 황체간의 기능성을 구명하고자 수행한 시험에서 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 중심강이 없는 황체의 total, supernatant 및 Pellt protein의 함량은 각각 32.83, 16.87 및 15.96 mg/g wet tissue이었고, 중심강이 있는 황체의 그것들은 각각 29.62, 16.10 및 13.52 mg/g wet tissue으로서 중심강이 없는 황체와 중심강이 있는 황체간에 유의적인 차이를 나타내지 않았다(p〉0.05). 2. DNA 함량은 중심강이 없는 황체가 1.99mg/g wet tissue이었고 중심 강이 있는 황체가 1.32mg/g wet tissue으로 중심강이 없는 황체와 있는 황체간에 유의적인 차이(p<0.05)를 나타내었다. Protein : DNA ratios에 있어서도 중심강이 없는 황체가 16.63mg/g wet tissue이었고 중심강이 있는 황체가 22.99mg/g wet tissue으로 중심강이 없는 황체와 중심강이 있는 황체간에 유의적인 차이(p<0.05)를 나타내었다. 3. 중심강이 없는 황체의 RNA함량, Protein: RNA 및 RNA:DNA ratios는 각각 2.87, 12.24및 1.43mg/g wet tissue이었고, 중심강이 있는 황체의 그것들은 각각 2.47, 13.73 및 1.89mg/g wet tissue으로서 중심강이 없는 황체와 중심강이 있는 황체간에 유의적인 차이를 나타내지 않았다(p〉0.05).
Lee, Eunyoung;Kim, Sang Hwan;Kim, Byung-Gak;Yoon, Jong Taek
한국발생생물학회지:발생과생식
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제19권4호
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pp.227-234
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2015
The objective of this study was to investigate the expression of bovine luteum expressed sequence tags (ESTs), vascular endothelial growth factor (VEGF), and tumor necrosis factor receptor 1 (TNFR1) and the presence of functional ESTs in the bovine corpus luteum (CL) during different stages of the estrus cycle. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) analysis showed a difference in the expression of ESTs during the CL stage. Concentration of ESTs in the CL tissue increased significantly from the mid-luteal stage and decreased thereafter. RT-PCR analysis showed higher levels of the EST genes in the CL of the mid-luteal stage than in other stages, and the same level of expression of VEGF. Immunohistochemistry analysis of the tissue from CL formation to regression showed low cytosol and aggregation of the nucleus. And activity caspase 3 (apoptosis detector) was most strongly detected in the CL1 stage of bovine. During the estrous cycle, the cytosol was magnified and differentiation of the nucleus was clearly manifested. The ESTs affected the CL, and the relationship between VEGF and TNFR1 played a pivotal role for CL development and activation, dependent on the stage of CL. These results suggest local production of ESTs, the presence of functional ESTs in the bovine CL, and that ESTs play a role in regulating the function of cell death in bovine CL.
The corpus luteum (CL) is a temporary endocrine gland whose main function is to secrete progesterone to support pregnancy. On the other hand, the cyclic bovine CL has also been shown to be a site of prostaglandin $F_{2{\alpha}}$ ($PGF_{2{\alpha}}$) production. Although there is general agreement that endometrial $PGF_{2{\alpha}}$ is an essential luteolysin in cattle, luteal $PGF_{2{\alpha}}$ seems to play a luteotropic role as an autocrine and/or paracrine factor, especially for the development and maintenance of the CL. This supposition is based on evidence that some of the prerequisites for autocrine/paracrine mechanisms are present, including local production of $PGF_{2{\alpha}}$ and the existence of specific binding sites within the CL. The purpose of this paper is to review the regulation of luteal $PGF_{2{\alpha}}$ secretion, its action on CL as an autocrine and/or paracrine factor and the receptivity of bovine CL to. $PGF_{2{\alpha}}$.
Kim, Minseong;Lee, Sang-Hee;Lee, Seunghyung;Kim, Gur-Yoo
대한의생명과학회지
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제25권1호
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pp.107-112
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2019
The corpus luteum (CL) is composed to various cells, such as luteal steroidogenic cells (LSCs), luteal thecal steroidogenic cells (LTCs), luteal endothelial cells (LECs), fibroblast, immune cells and blood cells. The life span of CL is controlled by proliferation and apoptosis of luteal cells. Therefore, this study investigated apoptotic factors in luteal cells derived from bovine CL. The CL tissues were collected from bovine ovaries and luteal cells were isolated from middle phase CL. Then, LTCs and LECs were separated according to cellular morphology from LSCs. The expression of Bax, Bcl-2, Fas and tumor necrosis factor 1 receptor (TNF1R) mRNA and protein were analyzed using quantitative RT-PCR and western blot. Results show that, Bax and TNFR1 mRNA expression were significantly increased at late group than early and middle groups, otherwise Bcl-2 were significantly decreased at late group than early group (P<0.05). Fas mRNA expression were significantly decreased in middle group compared to early and late groups (P<0.05). In addition, Bax and Bcl-2 mRNA in LTCs was lower than LSCs, Fas mRNA was higher than LSCs. The Bcl-2 protein expression was lower at LTCs than LSCs, especially Fas protein in LTCs was significantly lower than LSCs and LECs (P<0.05). Otherwise, TNFR1 protein of LTCs were similar with LSCs but higher compared with LECs. In conclusion, we suggest that the results may help understanding of apoptosis ability in luteal cells according to cell type during CL regression of estrous cycle.
The objective of this work was to determine the effect of corpus luteum (CL) grade on pregnancy rate after embryo transfer in Korean cattle and we found that CL development was linked to pregnancy rate. The in vivo derived blastocyst-stage embryos were transferred to 15 recipients synchronized in the estrus cycles. Based on size and palpable characteristics, CLs were categorized into three grade. The grade three CL is not to be identified by rectal palpation. The pregnancy rates tended to increase with the increase in CL size of recipients. In grade one, two, and three, the pregnancy rates were 62.5%, 50.0%, and 0%, respectively. This result suggests that pregnancy rates after embryo transfer might be affected by the CL status of recipients.
본 연구는 복강경을 이용하여 한국흑염소의 난소를 연속적으로 관찰하여 그 형태적 변화를 확인함으로써 한국흑염소의 성주기를 판정하고 그 결과를 한국흑염소의 수정란 이식시에 활용하고자 하는 목적으로 수행하였다. $CIDR^(R)$ 제거 2일 후부터 복강경 수술을 통해 난소의 형태적 변화를 관찰하였다. 난소의 크기와 황체의 변화를 관찰하였으며, 황체는 그 성숙과 퇴축 과정에 따라 corpus hemorrhagicum(CH), corpus luteum(CL), corpus albicans(CA)로 나누었다. 배란 전일(Day 0)에는 배란 직전의 대형난포(Graafian follicle)가 존재하였고, 배란일(Day 1)에는 배란 직후의 함몰 부위(OD)를, 그리고 배란 2일째(Day 2)에는 초기 출혈체$(CH_1)$가 관찰되었다. 배란 3일 및 4일째에는 배란된 자리로부터 형성된 출혈체가 성숙하여 $CH_2,\;CH_3$로 발육되며 점차 그 크기가 커지고 주위에 잘 발달된 혈관의 분지들을 관찰할 수 있었다. 배란 5일째와 6일째에는 완전히 성숙하여 난소의 절반 이상을 차지하는 성숙 황체$(CL_3)$를 관찰하였다. 배란 10일째에는 더욱 발달한 성숙 황체와 함께 같은 쪽 또는 반대편 난소에 작은 난포가 생성된 것을 확인하였고, 배란 15일째에는 10일째 생성된 난포와는 다른 새로운 난포가 나타나 발육되는 것을 확인하였다. 배란 17일과 18일째에는 점차 황체의 크기가 작아져 $CL_2,\;CL_1$의 단계로 퇴행하였고, 배란 20일과 22일째에는 완전히 퇴행된 황체, 즉 백체(CA)의 존재와 함께 같은 쪽 또는 반대편 난소에 발육된 우세난포를 확인하였다. 본 연구에서 복강경을 통한 난소의 변화상을 관찰한 결과, 한국흑염 소의 발정주기는 estrus기(성숙 난포기)가 1일(성주기제 0일), metestrus기(배란 및 황체 발육기)는 4일(성주기 제 $1{\sim}4$일), diestrus기(황체기)는 $12{\sim}13$일(성주기 제$5{\sim}16/17$일), proestrus기(황체퇴행 및 난포 형성기)는 5일(성주기 제 $17/18{\sim}21/22$일)인 것으로 확인되었다. 난소의 육안적 관찰을 위해 사용한 복강경 시술은 개복술에 비래 수술 상처와 감염이 적고 수술 후 회복도 빨랐으며 최소한의 유착과 수술 시간의 단축 등 많은 장점을 가지고 있어 한국흑염소의 수정란이식 등에 그 활용 가치가 클 것으로 사료된다.
The corpus luteum (CL) is formed by the action of a surge of luteinizing hormone (LH) on the pre-ovulatory follicle. Luteal cells derived from granulosa and theca interna cells continue to secrete progesterone for about two weeks. LH in domestic animals is essential for the normal secretion of progesterone at all stages of the luteal phase. For this process in the rodents, 20$\alpha$-hydroxysteroid dehydrogenase (20$\alpha$-HSD) is indispensable. 20$\alpha$-HSD is an enzyme to be a biologically inactive steroid. This enzyme plays a critical role in the regulation of the rat luteal function and reported to be present in steroid-producing tissues such as the testis and adrenal gland. We have purified 20$\alpha$-HSD and found two distinct 20$\alpha$-HSD molecules (HSD-1 and HSD-2). Their molecular weights are both estimated to be 33kd.The amino acid compositions of HSD-1 and HSD-2 are mostly similar, but there is a slight difference in the content of lysine. We demonstrated that 1) CL of previous generations contribute more to whole ovarian 20$\alpha$-HSD activity, 2) newly formed corpora lutea contain only 20$\alpha$-HSD-1 activity, and 3) old CL express activities of each HSD isozyme as shown in the luteal tissue of cycling rats on the day of diestrus where only degenerating old CL exist. The increase in 20$\alpha$-HSD activity identified seems to be related to the increase in the numbers of 20$\alpha$-HSD-positive cells. Interestingly, 20$\alpha$-HSD-1 activities were strongly found in the follicle fluids and theca interna cells by immunohistochemical study. Thus, the activity of 20$\alpha$-HSD may be related to a survival mechanism of those luteal cells and follicles remaining in the ovaries. Luteal cells arise from two sources. The small luteal cells are all of theca cell origin, while the large luteal cells are mainly of granulosa cell origin. CL of Korean Native Cattle, as those of other animal species, contains two morphologycally and functionally distinct luteal cell populations, such as small and large luteal cells as well as nonluteal cells. In all reproductive states except in the late luteal phase, the bovine CL also contained more small luteal cells than large luteal cells. Luteal tissue secretes a variety of growth factors (proteins) and the pattern of secretion changes during all stages of the luteal phase. These growth factors could be important in regulating the function of the bovine corpus luteum and may act in a potential endocrine autocrine and paracrine mechanisms. Therefore, further work has to be done to elucidate the role of growth factors in the ovary, especially in the corpus luterum. Interest should be focussed on interaction of these growth factors in the regulation of luteal cell and the localization of cytokine synthesis in differnet luteal cells.
Steroidogenesis requires coordination of the anabolic and catabolic pathways of lipid metabolism, but the profile of proteins associated with progesterone synthesis in cyclic and pregnant corpus luteum (CL) is not well-known in cattle. In Experiment 1, plasma progesterone level was monitored in cyclic cows (n = 5) and pregnant cows (n = 6; until d-90). A significant decline in the plasma progesterone level occurred at d-19 of cyclic cows. Progesterone level in abbatoir-derived luteal tissues was also determined at d 1 to 5, 6 to 13 and 14 to 20 of cyclic cows, and d-60 and -90 of pregnant cows (n = 5 each). Progesterone level in d-60 CL was not different from those in d 6 to 13 CL and d-90 CL, although the difference between d 6 to 13 and d-90 was significant. In Experiment 2, protein expression pattern in CL at d-90 (n = 4) was compared with that in CL of cyclic cows at d 6 to 13 (n = 5). Significant changes in the level of protein expression were detected in 32 protein spots by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2-DE), and 23 of them were identified by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS). Six proteins were found only in pregnant CL, while the other 17 proteins were found only in cyclic CL. Among the above 6 proteins, vimentin which is involved in the regulation of post-implantation development was included. Thus, the protein expression pattern in CL was disorientated from cyclic luteal phase to mid pregnancy, and alterations in specific CL protein expression may contribute to the maintenance of pregnancy in Korean native cows.
황체내 TNF$\alpha$는 큰황체세포를 포함한 황체내 세포들의 사망을 일으키고, 황체내 혈관의 퇴화와 프로게스테론 농도의 감소를 초래하는 등 황체의 구조적 및 기능적 퇴화를 유발하는 것으로 밝혀졌다. 반면 이와는 대조적으로 TNF$\alpha$는 황체발달의 초기에는 황체자극효과를 가지고 있다는 보고도 있다. 황체내에서 TNF$\alpha$의 중요성에도 불구하고, 아직 이 물질의 분비원이 대식세포라는 보고들과 대식세포는 주된 분비원이고 내피세포에서도 소량 분비된다는 보고 등 이견이 있다. 이를 알아보기 위해 저자들은 돼지에서 비임신기와 임신기의 성숙황체와 용해황체를 이용하여 대식세포와 TNF$\alpha$ 면역조직화학을 실시한 결과, 성숙황체내에서 TNF$\alpha$의 주된 분비원은 대식세포이고 내피세포도 일부 분비하는 것을 확인하였으며, 황체용해가 진행되면서 내피세포가 TNF$\alpha$의 분비와 반응에 다양성과 역동성을 보이고 있음을 추정할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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