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Cloning and Expression of pcbC and pcbD Genes Responsible for 2,3-Dihydroxybiphenyl Degradation from Pseudomonas sp. P20

  • Nam, Jung-Hyun;Oh, Hee-Mock;Kim, Chi-Kyung
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제5권2호
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    • pp.68-73
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    • 1995
  • Pseudomonas sp. P20 was shown to be capable of degrading biphenyl and 4-chlorobiphenyl (4CB) to produce the corresponding benzoic acids wnich were not further degraded. But the potential of the strain for biodegradation of 4CB was shown to be excellent. The pcbA, B, C and D genes responsible for the aromatic ring-cleavage of biphenyl and 4CB degradation were cloned from the chromosomal DNA of the strain. In this study, the pebC and D genes specifying degradation of 2, 3-dihydroxybiphenyl (2, 3-DHBP) produced from biphenyl by the pebAB-encoded enzymes were cloned by using pBluescript SK(+) as a vector. From the pCK102 (9.3 kb) containing pebC and D genes, pCK1022 inserted with a EcoRI-HindIII DNA fragment (4.1 kb) carrying pebC and D and a pCK1092 inserted with EcoRI-XbaI fragment (1.95 kb) carrying pebC were constructed. The expression of pcbC and D' in E. coli CK102 and pebC in E. coli CK1092 was examined by gas chromatography and UV-vis spectrophotometry. 2.3-dihydroxybiphenyl was readily degraded to produce meta-cleavage product (MCP) by E. coli CK102 after incubation for 10 min, and then only benzoic acid(BA) was detected in the 24-h old culture. The MCP was detected in E. coli CK1022 containing pebC and 0 genes (by the resting cells assay) for up to 3 h after incubation and then diminished completely in 8 h, whereas the MCP accumulated in the E. coli CK1092 culture even after 6 h of incubation. The 2, 3-DHBP dioxygenases (product of pebC gene) produced by E. coli CK1, CK102, CK1023, and CK1092 strains were measured by native PAGE analysis to be about 250 kDa in molecular weight, which were about same as those of Pseudomonas sp. DJ-12, P. pseudoa1caligenes KF707, and P. putida OU83.

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토마토 김치의 제조 및 특성 (Preparation of tomato Kimchi and its characteristics)

  • 김은정;한영숙
    • 한국식품조리과학회지
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    • 제22권4호통권94호
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    • pp.535-544
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    • 2006
  • 토마토 김치의 발효특성을 살펴보기 위하여 pH, 산도, 색도, Texture, 미생물수, 당도 및 염도 측정, Na와 K 함량을 측정하였고 DPPH free radical 소거 활성과 퐁 폴리페놀 함량을 조사하였으며 최종적으로 관능적 평가를 한 결과는 다음과 같았다. 1. 토마토김치(Tomato Kimchi, TK)의 pH는 제조 직후, 배추김치(Chinese Cabbage Kimchi, CK)보다 낮은 값을 보였으나 발효 48시간 후 CK의 PH가 급격히 낮아져 이후 거의 비슷한 값을 보였다. 2. TK의 산도는 초기값은 CK보다 높았으나 2일후에는 CK와 동일한 산도를 나타냈다. 3. TK의 명도(L값)는 발효 전 기간에 걸쳐 CK에 비해 낮았다. 적색도(a값)는 TK, CK모두 발효 4시간에 급격히 증가했으며 이후 거의 비슷한 값을 보였다. 황색도(b값)는 발효전반에 걸쳐 TK의 값이 CK보다 다소 낮게 나타났다. 4. TK의 경도(hardness)는 발효와 더불어 낮아졌으나 발효 전반에 걸쳐 CK보다 다소 높은 값을 보였다. 5. TK의 초기 총 균수는 2.7${\times}$10$^4$ cfu/ml으로 CK의 6.1${\times}$10$^4$ cfu/ml보다 적었다. 그러나 24시간에 각각3.1${\times}$10$^6$ cfu/ml, 3.5${\times}$10$^6$ cfu/ml로 거의 비슷해졌다가 발효 120시간까지 약간 높은 값을 보였다. TK의 젖산균수도 초기에는 CK보다 낮았으나 급격히 증가하여 발효 48시간 이후 CK의 3.3${\times}$10$^6$ cfr/ml보다 높은값 5.1${\times}$10$^6$ cfu/ml를 나타내 총 균수의 증가는 젖산균 수의 영향을 받는 것으로 나타났다. 6. 발효 초기의 TK의 당 농도($^{\circ}$Brix)는 7.4, CK는 7.3이었다. TK와 CK는 발효가 진행됨에 따라 당 농도가 감소했다. 발효 48시간에 TK는 6.4, CK는 6.6$^{\circ}$Brix로 발효 120까지 TK의 당 농도가 CK보다 낮은 값을 보였다. 7. TK와 CK의 발효 초기의 염도는 TK가 6.7, CK가 6.5% 였다. TK와 CK는 발효가 진행됨에 따라 염농도가 감소했다. 발효 48시간에 TK 5.1, CK 5.2%로 발효 120시간까지 TK가 CK보다 다소 낮은 값을 보였다. 8. TK와 CK의 Na와 K의 함량을 초기와 숙성적기인 48시간에 분석한 결과, TK와 CK의 Na 함량은 초기에 860.09 895.26 mg/100g이었고, 48시간에는 각각 867.57, 683.98 mg/100g이었다. K 함량은 초기에각각 352.26, 365.77 mg/100g이었고, 48시간에는 343.73, 345.51 mg/100g이었다. 9. TK와 CK의 Methanol 추출액을 대조군 1% BHT에 대해 DPPH free radical 소거 활성을 비교한 결과, TK와 CK의 초기 값은 큰 차이가 없었으나 발효가 진행됨에 따라 TK의 DPPH 활성이 약간 증가되며, 발효 120시간 후에는 초기 값보다 10% 증가한 값을 보였다. 10. 토마토의 총 페놀함량은 280 mg/100g으로 배추 60 mg/100g보다 거의 5배 높았다. 11. TK와 CK의 20$^{\circ}$C 에서 발효 2일후의 관능적 특성은신맛은 유의적인 차이를 보이지 않았다. 외관, 색상,향, 상큼한 맛, 견고성, 매운맛, 짠맛, 전반적인 기호도 면에서도 유의적인 차이를 보였으며 특히, 색상과 상큼한 맛, 매운 맛은 유의적인 차(p<0.01)를 보였으며 관능적 품질이 우수한 것으로 나타났다.

토끼 허혈성 하지 모델에서 VEGF 발현 Naked DNA 벡터인 pCK-VEGF의 근육내 투여가 측부혈관형성에 미치는 영향 (Direct Intramuscular Gene Transfer of Naked DNA Expressing Human Vascular Endothelial Growth Factor (pCK-VEGF) Enhances Collateral Growth in a Rabbit Ischemic Hind Limb Model)

  • 채제건;전현순;박은진;김종묵;김덕경;김선영
    • 약학회지
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    • 제45권1호
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    • pp.108-115
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    • 2001
  • We have recently reported the development of a high efficiency expression vector, pCK, which can drive a high level of gene expression in mouse skeletal muscle. In this study, we tested the therapeutic potential of pCK expressing human VEGF165, pCK-VEGF in the rabbit ischemic hind limb model. To determine the optimal dose of plasmid DNA, various concentrations of pCK-CAT were injected into the muscle of a rabbit hind limb and the levels of CAT activity were determined. It was found that the expression level of the exogenously added gene became stable between 250 and 1,000 $\mu$g. Based on this result, we tested whether intramuscular transfer of 500$\mu$g of pCK-VEGF could actually modulate collateral vessel development in a rabbit ischemic hind limb model. It was found that relative to the control group injected with the pCK lacking the VEGF sequence, single intramuscular doses (500$\mu$g) of pCK-VEGF produced statistically significant augmentation of collateral vessels as determined by the angiographic vessel count, maximal blood flow by Doppler flowmeter and the number of capillaries by histology. These results suggest that a single 500$\mu$g-delivery of pCK-VEGF is potent enough to induce sufficient angiogenic activity and achieve therapeutic benefit on this rabbit model.

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Downregulation of JMJD2a and LSD1 is involved in CK2 inhibition-mediated cellular senescence through the p53-SUV39h1 pathway

  • Park, Jeong-Woo;Bae, Young-Seuk
    • BMB Reports
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    • 제55권2호
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    • pp.92-97
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    • 2022
  • Lysine methylation is one of the most important histone modifications that modulate chromatin structure. In the present study, the roles of the histone lysine demethylases JMJD2a and LSD1 in CK2 downregulation-mediated senescence were investigated. The ectopic expression of JMJD2a and LSD1 suppressed the induction of senescence-associated β-galactosidase activity and heterochromatin foci formation as well as the reduction of colony-forming and cell migration ability mediated by CK2 knockdown. CK2 downregulation inhibited JMJD2a and LSD1 expression by activating the mammalian target of rapamycin (mTOR)-ribosomal p70 S6 kinase (p70S6K) pathway. In addition, the down-regulation of JMJD2a and LSD1 was involved in activating the p53-p21Cip1/WAF1-SUV39h1-trimethylation of the histone H3 Lys9 (H3K9me3) pathway in CK2-downregulated cells. Further, CK2 downregulation-mediated JMJD2a and LSD1 reduction was found to stimulate the dimethylation of Lys370 on p53 (p53K370me2) and nuclear import of SUV39h1. Therefore, this study indicated that CK2 downregulation reduces JMJD2a and LSD1 expression by activating mTOR, resulting in H3K9me3 induction by increasing the p53K370me2-dependent nuclear import of SUV39h1. These results suggest that CK2 is a potential therapeutic target for age-related diseases.

Dephosphorylation of p53 Ser 392 Enhances Trimethylation of Histone H3 Lys 9 via SUV39h1 Stabilization in CK2 Downregulation-Mediated Senescence

  • Park, Jeong-Woo;Bae, Young-Seuk
    • Molecules and Cells
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    • 제42권11호
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    • pp.773-782
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    • 2019
  • Cellular senescence is an irreversible form of cell cycle arrest. Senescent cells have a unique gene expression profile that is frequently accompanied by senescence-associated heterochromatic foci (SAHFs). Protein kinase CK2 (CK2) downregulation can induce trimethylation of histone H3 Lys 9 (H3K9me3) and SAHFs formation by activating SUV39h1. Here, we present evidence that the PI3K-AKT-mTOR-reactive oxygen species-p53 pathway is necessary for CK2 downregulation-mediated H3K9me3 and SAHFs formation. CK2 downregulation promotes SUV39h1 stability by inhibiting its proteasomal degradation in a p53-dependent manner. Moreover, the dephosphorylation status of Ser 392 on p53, a possible CK2 target site, enhances the nuclear import and subsequent stabilization of SUV39h1 by inhibiting the interactions between p53, MDM2, and SUV39h1. Furthermore, $p21^{Cip1/WAF1}$ is required for CK2 downregulation-mediated H3K9me3, and dephosphorylation of Ser 392 on p53 is important for efficient transcription of $p21^{Cip1/WAF}$. Taken together, these results suggest that CK2 downregulation induces dephosphorylation of Ser 392 on p53, which subsequently increases the stability of SUV39h1 and the expression of $p21^{Cip1/WAF1}$, leading to H3K9me3 and SAHFs formation.

병저항성 GM(OsCK1)벼가 미꾸리(Misgurnus anguillicaudatus)및 잉어(Cyprinus carpio)에 미치는 영향 (Responses of Misgurnus anguillicaudatus and Cyprinus carpio Fed on Disease Resistant(OsCK1) Rice Variety)

  • 오성덕;이기종;박수윤;이대용;손수인;김민영;류태훈
    • 한국환경농학회지
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    • 제32권3호
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    • pp.231-239
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    • 2013
  • 본 연구는 병저항성 OsCK1 유전자와 제초제저항성 PAT 유전자가 도입된 병저항성 GM벼에서 도입 유전자의 발현 검증과 수서환경의 비표적 생물체인 잉어와 미꾸리에 미치는 영향을 확인하기 위해 수행되었다. 병저항성 GM벼에 도입된 OsCK1와 PAT 유전자의 PCR 분석 결과, 병저항성 GM벼에서만 특이적인 밴드가 검출되었으며, PAT 단백질 발현량을 ELISA 분석한 결과, 병저항성 GM벼에서만 $45.44{\pm}2.23{\mu}g/g$ 수준으로 검출되었고, 모품종인 낙동벼에서는 검출되지 않았다. 병저항성 GM벼와 낙동벼의 미꾸리(Misgurnus anguillicaudatus)와 잉어(Cyprinus carpio)에 대한 급성독성시험을 실시한 결과, 48시간 및 96시간-$LC_{50}$ 은 5,000 mg/L 이상으로 나타났다. 48시간 및 96시간 무영향농도 NOEC)는 5,000 mg/L이었다. 급성독성 시험기간 중 병저항성 GM벼와 낙동벼간의 pH, DO, 수온, 체중 및 전장에 대한 유의적인 결과는 나타나지 않았다.

Cromakalim이 해명의 과민반응 매개체 유리에 미치는 영향 (Effects of Crormakalim on the Release of Mediators in Hypersensitivity of Guinea pig)

  • 노재열;김경환
    • 대한약리학회지
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    • 제29권2호
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    • pp.263-274
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    • 1993
  • $K^+$통로는 기도 평활근 세포에 존재하며 이들 통로가 활성화되면 평활근의 과분극의 결과 이완작용이 나타난다. $K^+$통로의 이런 효과는 과민반응과 천식 치료에 응용될 수 있으므로 우리는 $K^+$통로 개방제인 cromakalim (BRL34915, CK)이 $IgG_1$ 항체로 감작시킨 기도 및 폐조직으로 부터 유리되는 매개체 유리에 미치는 영향을 조사하였다. 피동적으로 감작된 두 조직은 $2{\times}10^{-6}\;M$의 CK로 30분동안 superfusion시킨 후 CK와 항원 (Ox-HSA) 0.1 mg/ml로 자극하였다. 또한 비만세포를 이용하여 CK의 효과를 조사하였다. 해명 폐조직 비만세포는 효소에 의한 digestion method (monodispersed; 미분리 정제), count current elutriation에 의한 방법(partially purified; 부분분리정제), 그리고 discontinuous Percoll방법(highly purified; 순수분리정제)에 의해 순수 분리되었다. CK로 전처치한후, 피동적으로 감작된 비만세포는 OA와 CaI의 여러 농도에 의해 자극되었다. 유리된 Hist은 spectrophotofluorometry에 의해, LT는 면역방사법에 의해 측정되었다. CK 전처치는 $IgG_1$ 감작후 항원에 의해 자극된 기도 조직에서 Hist 유리량을 35%까지, LT 유리량은 40%까지 감소시켰으나 기도 평활근 수축력에는 반응을 나타내지 못하였다. 항원 유도 폐조직에 있어서 CK전처치는 Hist유리량을 25%까지 감소시켰으나 LT 유리에는 미약한 감소를 나타내었다. 해명의 미분리정제, 부분분리정제, 그리고 순수 분리 정제된 비만세포로부터 Hist과 LT은 면역자극(OA)이나 비면역자극(CaI)에 의해 농도 의존적으로 유리되었다. 비만세포에서 유리된 LT는 5-lipoxygenase억제제인 A64077에 의해서 억제됨이 확인되었다. CK전처치는 OA유도 및 CaI유도 해명 폐조직 비만세포에서 Hist과 LT 유리량을 20%까지 감소시켰다. $IgG_1$ 감작후 Ox-HSA유도 기도 평활근 조직이나 혹은 OA유도 및 CaI유도 비만세포에서 Hist과 LT유리에 미치는 CK의 억제효과는 TEA와 GBC에 의해 완전히 봉쇄되었다. 이상의 결과에서 폐조직 비만세포는 LT를 유리할 수 있는 세포로 간주되며, 기도 평활근 이완제로 알려져 있는 CK은 특수 항원 유도 기도 평활근조직에서 매개체 유리를 부분적으로 억제하며, CK은 또한 OA유도 및 CaI로 유도된 순수분리 정제된 비만세포에서 매개체 유리를 부분적으로 억제하는 것으로 보아 비만세포가 활성화시 야기되는 여러 생화학적 현상중에서 미약하나마 $K{^+}$통로가 관여할 것으로 사료된다.

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초산균 Acetobacter pasteurianus CK-1의 분리 및 발효 특성 (Isolation of an Acetic Acid Bacterium Acetobacter pasteurianus CK-1 and Its Fermentation Characteristics)

  • 방규호;김채원;김철호
    • 생명과학회지
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    • 제32권2호
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    • pp.119-124
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    • 2022
  • 막걸리 식초 생산에 효과적인 초산균을 분리하기 위해 다양한 시료에서 초산균을 검색하였고, 그 중 초산 생산이 우수한 균주인 Acetobacter pasteurianus CK-1을 최종 분리하였다. 분리균주의 최적 생육온도는 30.0℃로 확인되었고, pH 6.0에서 가장 왕성하게 생장하였으며, pH 5.5~6.5 범위에서 잘 생장하였다. A. pasteurianus CK-1은 배지의 초기 에탄올 농도가 4%일 때 가장 왕성하게 생장하였고, 7%의 에탄올 농도에서도 생장이 가능하였다. 분리균주를 막걸리에 접종하여 초산 발효를 유도하였을 때, 발효 초기 pH 3.54였던 것이 발효가 진행되면서 점차 낮아져서 발효 18일 후에는 pH 2.77이 되었다. 산도는 발효 초기에 0.75%였던 것이 발효 4일경부터 점차 증가하여 최종 산도는 5.54%로 증가하였다. A. pasteurianus CK-1 발효 식초에서는 acetic acid가 3,575.7±48.6 mg%로 높게 검출되었고, malic acid와 citric acid는 각각 2,150.8±27.6 mg%와 55.8±3.7 mg%로 검출되었다. 접종한 균주의 종류에 따라 생성되는 유기산의 함량과 비율이 유의하게 차이가 나는 것을 확인하였다. 초산 발효 동안 발효액 내의 효모와 A. pasteurianus CK-1의 개체군은 반비례적으로 변화하였다. 발효 초기에는 효모가 우점하였으나, 발효가 진행됨에 따라 A. pasteurianus CK-1이 서서히 증식하여 10일 후에는 정체기에 이르렀다.

Yeast Elf1 Factor Is Phosphorylated and Interacts with Protein Kinase CK2

  • Kubinski, Konrad;Zielinski, Rafal;Hellman, Ulf;Mazur, Elzbieta;Szyszka, Ryszard
    • BMB Reports
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    • 제39권3호
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    • pp.311-318
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    • 2006
  • One of the biggest group of proteins influenced by protein kinase CK2 is formed by factors engaged in gene expression. Here we have reported recently identified yeast transcription elongation factor Elf1 as a new substrate for both monomeric and tetrameric forms of CK2. Elf1 serves as a substrate for both the recombinant CK2$\alpha$' ($K_m$ 0.38 ${\mu}M$) and holoenzyme ($K_m$ $0.13\;{\mu}M$). By MALDI-MS we identified the two serine residues at positions 95 and 117 as the most probable in vitro phosphorylation sites. Co-immunoprecypitation experiments show that Elf1 interacts with catalytic ($\alpha$ and $\alpha$') as well as regulatory ($\beta$ and $\beta$') subunits of CK2. These data may help to elucidate the role of protein kinase CK2 and Elf1 in the regulation of transcription elongation.

Compound K 측정을 위한 ELISA법 개발 (Development of ELISA Method for the Determination of Compound K)

  • 류미나;이해광;성종환;성충기
    • 생약학회지
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    • 제46권4호
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    • pp.279-282
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    • 2015
  • In order to quantify compound K(CK), anticancer component of Panax ginseng C. A. Meyer, high titer rabbit polyclonal antibodies (pAbs) were raised against a conjugate of CK and bovine serum albumin coupled by a periodate oxidation method. Coating antigen (CK-OVA) was also prepared by the same method with OVA. As a result of optimization of antiserum dilution (2,000 fold), coating antigen ($25{\mu}g/ml$) and other condition (incubation time, temperature and washing method), ELISA method for the determination of CK was established. The measuring range extended from 0.5 ng/ml to 25 ng/ml of CK. The antibodies exhibited minor or even no cross reactivities with protopanaxatriol (1.56%) and other tested ginsenosides, $GRb_1$ (0.11%), $GRg_1$ (0.07%) except protopanaxadiol (87.2%) from the structural similarity. And the antibody showed good correlation (r=0.987) between the assay values obtained by this ELISA method and HPLC. Therefore, the ELISA method could be very useful tools for the determination of CK in biological fluids because of their high sensitivity and specificity.