In order to cultivate watermelon on farm, grafting of the watermelon seedling to the watermelon stock is necessary because the watermelon root is less viable than the root of watermelon stock. Recently, commercially important watermelon varieties further require a resistant stock against especially CGMMV to control the heavy loss of the total yield of watermelon by CGMMV infection. Therefore, we have set out a project to develop a CGNEMV-resistant watermelon stock. We have successfully transformed dozens of watermelon stocks (gongdae) during last two years especially using a cDNA encoding the coat protein of CGMMV (cucumber green mottle mosaic virus). Recently we have tested levels of resistance of those watermelon stocks against CGMMV infection. For CGMMV inoculation, the leaves of one month old gongdae (T1) were rubbed by carborundum mixed with the CGMMV. A total of 140 plants (T1) were exposed to the CGMMV and we found that ten plants were completely resistant to virus infection. This is the first report that by genetic engineering a cucubitaceae crop resistant to CGMMV infection is ever developed. Further information will be provided in the poster.
박과 작물에 발생하는 종자전염성 막대형 바이러스인 CGMMV, KGMMV, ZGMMV 3종의 단독 및 동시 VC/RT-PCR 유전자 진단법을 개발하였다. CGMMV 등 3종의 바이러스에 대한 동시진단용 조합선발을 위하여 12조합 중에서 동시 진단용 프라이머 조합 CGMMV-C724, KGMMV-K513, ZGMMV-Z407A를 선발하였다. CGMMV등 3종에 대한 triplex VC/RT-PCR 유전자 진단법은 박, 수박, 오이, 멜론, 쥬키니 호박, 애호박, 담배(N. benthamiana) 작물의 식물체 즙액과 프라이머 간에 간섭현상 없이 특이적으로 진단되었다.
Kim, Jeong-Soo;Cho, Jeom-Deog;Park, Hong-Soo;Kim, Kyung-Soo
The Plant Pathology Journal
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제16권4호
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pp.211-215
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2000
Symptoms on 4 varieties of watermelons inoculated with watermelon mosaic potyvirus II isolated from watermelon (WMV-W) were severe mosaic and leaf malformation while those inoculated with cucumber green mottle mosaic tobamovirus from watermelon (CGMMV-W) were mild mosaic and chlorotic spots. Inoculation of the mixture of WMV-W and CGMMV-W produced extremely severe mosaic along with necrotic spots and general necrosis. Doubly infected plants were also stunted. Cells infected with WMV-W or CGMMV-W alone exhibited the intrinsically ultra-structural properties of each virus infection. WMV-W induced potyvirus-characteristic cylindrical inclusions in the cytosol. Virus particles were orderly aligned along the tonoplasts. CGMMV-W induced tobamovirus-characteristic stacked crystalline arrays of virus particles in the cytosol. Cells infected doubly with WMV-W and CGMMV-W contained striking cytopathic effects that were not present in single infection of each virus. The unique ring structure, nonagon, was that a single potyvirus particle was surrounded by 9 CGMMV-W tobamovirus particles.
CGMMV의 즙액전염 양상을 구명하고 수박의 즙액전염 억제를 위한 소독제를 선발하였다. 바이러스 이병주를 혼식한 후 병 발생 추이를 조사한 결과, 생육초기에 4% 이병율을 보인 후 생육후기에 83%를 나타내 급속히 전파되는 것을 확인하였다. 수박의 접목용 칼과 적심용 가위에 대한 소독제는 전지분유, 탈지분유, 제3인산소다, 차아염소산나트륨용액 등 4종이 87~95%의 CGMMV 억제효과론 보였다. 전지분유와 탈지분유는 손에 대해 88.2%와 91.2%의 소독효과를 나타냈다.
참외 주산지인 성주에서 2008년부터 2010까지 약 2,000점의 시료를 수집하였으며, 참외에 발생하는 바이러스를 동정하고 병 발생생태를 구명하기 위하여 전자현미경 검경과 박과 작물에 발생하는 8종의 바이러스, CGMMV, CMV, KGMMV, MNSV, PRSV, SqMV, WMV2, ZYMV의 종 특이적인 프라이머를 이용한 RT-PCR 방법으로 바이러스 감염 여부를 분석하였다. 그 결과 CGMMV, WMV2, ZYMV의 발병을 확인하였으며, 이외 5종의 바이러스는 발생하지 않는 것으로 조사되었다. 본 조사에서 성주 참외에서 발생하는 주요 바이러스는 CGMMV와 WMV2임이 확인되었다. CGMMV는 생육초기부터 발생하며 생육 후기에는 거의 대부분의 참외가 감염이 이루어졌다. 반면에 WMV2는 참외보다 몇 달 늦은 6월쯤에 발생이 이루어졌다. 이들 바이러스들은 최초 감염이 이루어지고 나면 생육하면서 급격히 확산되어 매우 높은 감염율을 나타내었다. CGMMV는 지상부 식물체 모든 조직에서 검출되었으나, 호박을 대목으로 사용한 뿌리 조직에서는 검출되지 않았다. 시판종자 5품종을 진단한 결과 3품종에서 CGMMV가 검출되었다. 참외의 대목으로 사용하고 있는 시판용 호박에 CGMMV를 접종한 결과, 바이러스에 감염되지 않았다. CGMMV에 감염된 참외 식물체를 분쇄하여 혼합한 토양을 통한 CGMMV의 전염은 확인할 수 없었으며, 덩굴손과 줄기와의 접촉, 전지가위를 통해서 각각 48%, 30%의 전업률을 나타냈다.
충북지역 수박과 멜론재배지에서 2020년부터 2021년까지 시료를 채집하여 reverse transcription polymerase chain reaction으로 유전자 진단을 실시해 바이러스 발생현황을 조사하였다. 2020년 수박에서는 정식 전 접목묘에 대해 바이러스를 검정했을 때 음성군과 진천군 두 곳에서 cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV)만이 각각 8%의 감염률을 보였다. 6월에는 진천군과 음성군 모두에서 watermelon mosaic virus (WMV), CGMMV, cucurbit aphid-borne yellows virus (CABYV)가 공통적으로 검출되었으며, 감염률은 진천군이 WMV 3.7%, CGMMV 11.1%, CABYV 3.7%이었고 음성군은 WMV 15.8%, CGMMV 33.3%, CABYV 3.5%로 음성군이 진천군에 비해 WMV와 CGMMV 감염률이 높았다. 2021년 3월부터 5월까지 월별로 수박재배지에서 바이러스를 검정했을 때 3월에는 음성군과 진천군 모두에서 바이러스가 검출되지 않았으며, 4월에는 진천군에서 CGMMV 1.6%, 음성군에서는 WMV 0.4%, CGMMV 38.5% 발생하였다. 5월에는 진천군에서 cucumber mosaic virus (CMV) 35%, CGMMV 10%, 음성군에서는 CMV 20.9%, CGMMV 29% 발생하였다. 충북지역에서 수박 바이러스 조사기간 동안 zucchini yellow mosaic virus (ZYMV)와 cucurbit chlorotic yellows virus (CCYV)는 검출되지 않았으며, 2020년에는 발생되지 않았던 CMV가 2021년도에 발생하였다. 2020년부터 2021년까지 멜론재배지에서 최근 문제가 되고 있는 CABYV와 CCYV 발생을 조사했을 때 CABYV는 조사기간 동안 음성군과 진천군 모두에서 발생되었고 감염률은 53.9-92.2%였다. CCYV는 2020년에 음성군에서만 20.8% 2021년에는 진천군에서만 2.7% 발생하였다.
Mixed infection of watermelon mosaic potyvirus II isolated from pumpkin (WMV-P) and cucumber green mottle mosaic tobamovirus from watermelon (CGMMV-W) caused extremely severe symptoms such as progressive silting and death of watermelon plants. Single infections of either WMV-P or CGMMV-W on the same hosts produced only vein clearing and/or mosaic on the upper leaves. In cells infected with WMV-P, potyvirus-characteristic inclusions of pinwheels, scrolls and cylindrical inclusions were present in the cytosol. Parallel arrays of virus particles in the tonoplast were also common. In cells infected with CGMMV-W, virus particles occurred as stacked-bands of scattered randomly in the cytosol and vacuoles in all type cells. Many cells also contained vesiculated mitochondria with fibril-containing vesicles. Cells infected mixedly with WMV-P and CGMMV-W contained structural features that were not observed in cells infected singly with the two viruses. A particle of WMV-P potyvirus was surrounded by evenly spaced nine particles of CGMMV-W tobamovirus, which made a unique nonagon ring. The angled layers having $60^{\circ}$-$135^{\circ}$ were alternating layer, herringbone, crosshatching and ladder figures.
Tobacco mosaic tobamovirus (TMV), cucumber mosaic cucumovirus (CMV), cucumber green mottle mosaic tobamovirus (CGMMV) and zucchini yellow mosaic potyvirus (ZYMV) from individual fruits and seeds of hot pepper and cucumber were detected by the reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). The dilution end-points for RT-PCR in curde sap from TMV. and CMV - infected hot pepper leaves and CMV - and CGMMV-infected cucumber leaves were 10-5. However, the amount of PCR product obtained from preparation of ZYMV-infected cucumber leaf was 10-fold lower than those of CMV or CGMMV-infected cucumber leaves. In hot pepper, both TMV and CMV were detected in all parts of the fruit wall tissue, but the yields of PCR products in the fruit stalk and its surrounding tissues were higher than those of the end parts of the fruit. On the other hand, in cucumber fruit infected with CMV, CGMMV or ZYMV, the fruit wall tissue and seed located in both stalk and end parts showed higher yields of PCR products than those of intermediate parts. Of five viruses that were analysed, only TMV in hot pepper seed, and CGMMV and CMV in cucumber seed were detected in testa parts.
The coat protein (CP) gene of kyuri green mottle mosaic virus zucchini strain (KGMMV-Z) isolated from zucchini (Cucurbita pepo) in Chonfu, Korea in 1999 was sequenced by the reverse transcription and polymerase chain reaction with degenerate and generate primers originated from tobamoviruses. The degenerate primers were very effective in amplification of KGMMV-Z CP region. The KGMMV-Z CP gene consisted of 486 nucleotides and had the same nucleotide length compared with those of cucurbit-infecting tobamoviruses. KGMMV-Z CP gene shared 43.8, 44.2, and 44.4% nucleotide sequence similarity with the CP gene of cucumber green mottle mosaic virus watermelon strain (CGMMZ-W), CGMMV-KW1, and CGMMV-SH, respectively, whereas three CGMMV strains among themselves showed 98.6-99.6% nucleotide similarity. The deduced amino acids of KGMMV-Z CP gene were 161 amino acid residues with the molecular weight of 17,181 daltons. The first 24 codons of KGMMV-Z CP gene corresponded to the sequences of the N-terminal amino acid of the viral capsid protein. The amino acid sequences of KGMMV-Z CP had 45.3% similarity compared with those of three CGMMV strains. However, the amino acid sequences of CGMMV strains were identical. These results showed that two cucurbit-infecting tobamovirus members, KGMMV-Z and CGMMV were genetically distantly related.
박과는 스쿼시, 호박, 애호박, 조롱박, 오이 및 수박 등 100여 속이 넘는 속이 포함된 식물과이며, 종자의 수입량이 매우 많은 작물이다. 이들이 우리나라로 수입될 때, 규제바이러스인 Squash mosaic virus (SqMV), Cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV) 및 Kyuri green mottle mosaic virus (KGMMV)에 대하여 검역을 수행한다. 본 연구에서는 SqMV, CGMMV 및 KGMMV를 신속·높은 감도로 검출할 수 있는 특이적 RT-PCR 및 nested PCR 프라이머 조합과 유전자변형-양성대조구 플라스미드를 개발하였다. 또한 본 연구에서 개발한 진단시스템을 2010년부터 2014년 상반기까지 현장적용하여, SqMV 47건, CGMMV 67건 및 KGMMV 17건을 검출하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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