• 한국식품위생안전성학회지
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• 제34권3호
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• pp.277-282
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• 2019

본 연구에서는 한국 전통 식품에서 Salmonella Typhimurium와 Listeria monocytogenes의 검출에 대하여 LAMP에 기반한 3M Molecular Detection Assay 2 (3M MDA 2)와 식품공전에 등재된 분리배지, real-time PCR의 검출 성능을 비교하고자 하였다. 육회와 육사시미에 $10^0-10^4CFU/25g$의 수준으로 S. Typhimurium와 L. monocytogenes을 각각 접종하였다. Citrobacter freundii와 Listeria innocua는 S. Typhimurium와 L. monocytogene의 검출에 영향을 주는 균으로 사용하였다. S. Typhimurium와 L. monocytogenes만 $10^0-10^4CFU/25g$ 수준으로 접종한 모든 시료에서는 분리배지, real-time PCR과 LAMP에서 양성으로 검출되었다. C. freundii와 L. innocua를 같이 접종한 경우에서 부분적으로 양성이 나타났다. 육회와 육사시미에 대하여 real-time PCR 보다 3M MDA 2가 더 검출효율이 높음을 알 수 있었다. 분리배지가 가장 검출효율이 높았지만 3M MDA 2와 큰 차이가 없었다. 배지를 사용하는 방법은 최소 일주일의 시간이 소요되고 PCR의 경우 inhibitor의 영향을 많이 받아 정확한 검출이 어려운 점이 있다. 그러나 LAMP에 기반한 3M MDA 2는 enrichment 후 다음 날 간단한 protocol을 통해 25분 이내로 샘플의 양성 반응을 확인할 수 있어 식중독균에 대해 신속하고 정확한 검출이 가능한 것으로 판단되었다.

• 한국융합학회논문지
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• 제9권12호
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• pp.69-74
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• 2018

본 연구의 목적은 까마중추출물의 캔디다 알비칸스의 항균력을 확인하고자 하였다. 연구를 위해 까마중을 70퍼센트 메탄올에 추출하였다. 추출물의 성분분석을 위해 까마중 추출물의 플라보노이드와 폴리페놀의 함량을 확인하였다. 까마중 추출물의 캔디다 알비칸스의 항균력을 확인하기 위하여 생존률을 OD값으로 측정하였고, 증식능력을 CFU로 측정하였다. 까마중 추출물의 플라보노이드와 폴리페놀의 함량을 분석한 결과 각 각 $8.23{\pm}0.13mg/g$와 $14.97{\pm}1.58mg/g$로 나타났다. CFU 결과, 대조군과 비교하여 실험군에서 CFU 값이 낮게 나타났다. 균의 활성도를 평가한 결과, 대조군과 비교하여 실험군에서 더 낮은 균활성도 값을 보여 칸디다 알비칸스에 대한 까마중 추출물의 항균력을 확인할 수 있었다. 이러한 연구 결과, 까마중 추출물은 칸디다균뿐만 아니라 치과분야에서 천연 항균제로 사용될 수 있을 가능성이 보인다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권3호
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• pp.321-327
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• 2015

Nocardia salmonicida is one of the main pathogens of fish nocardiosis. The purpose of this study was to build a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method for the rapid and sensitive detection of N. salmonicida. A set of four primers were designed from the 16S-23S rRNA intergenic spacer region of N. salmonicida, and conditions for LAMP were optimized as incubating all the reagents for 60 min at 64℃. LAMP products were judged with agar gel electrophoresis as well as with the naked eye after the addition of SYBR Green I. Results showed the sensitivity of the LAMP assay was 1.68 × 10³ CFU/ml (16.8 CFU per reaction) and 10-fold higher than that of PCR. The LAMP method was also effectively applied to detect N. salmonicida in diseased fish samples, and it may potentially facilitate the surveillance and early diagnosis of fish nocardiosis.

• Restorative Dentistry and Endodontics
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• 제38권2호
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• pp.65-72
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• 2013

Objectives: To evaluate the inhibitory effect of ursolic acid (UA)-containing composites on Streptococcus mutans (S. mutans) biofilm. Materials and Methods: Composite resins with five different concentrations (0.04, 0.1, 0.2, 0.5, and 1.0 wt%) of UA (U6753, Sigma Aldrich) were prepared, and their flexural strengths were measured according to ISO 4049. To evaluate the effect of carbohydrate source on biofilm formation, either glucose or sucrose was used as a nutrient source, and to investigate the effect of saliva treatment, the specimen were treated with either unstimulated whole saliva or phosphate-buffered saline (PBS). For biofilm assay, composite disks were transferred to S. mutans suspension and incubated for 24 hr. Afterwards, the specimens were rinsed with PBS and sonicated. The colony forming units (CFU) of the disrupted biofilm cultures were enumerated. For growth inhibition test, the composites were placed on a polystyrene well cluster, and S. mutans suspension was inoculated. The optical density at 600 nm ($OD_{600}$) was recorded by Infinite F200 pro apparatus (TECAN). One-way ANOVA and two-way ANOVA followed by Bonferroni correction were used for the data analyses. Results: The flexural strength values did not show significant difference at any concentration (p > 0.01). In biofilm assay, the CFU score decreased as the concentration of UA increased. The influence of saliva pretreatment was conflicting. The sucrose groups exhibited higher CFU score than glucose group (p < 0.05). In bacterial growth inhibition test, all experimental groups containing UA resulted in complete inhibition. Conclusions: Within the limitations of the experiments, UA included in the composite showed inhibitory effect on S. mutans biofilm formation and growth.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제26권8호
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• pp.1457-1463
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• 2016

Vibrio anguillarum, a devastating pathogen causing vibriosis among marine fish, is prevailing in worldwide fishery industries and accounts for grievous economic losses. Therefore, a rapid on-site detection and diagnostic technique for this pathogen is in urgent need. In this study, two mouse monoclonal antibodies (MAbs) against V. anguillarum, 6B3-C5 and 8G3-B5, were generated by using hybridoma technology and their isotypes were characterized. MAb 6B3-C5 was chosen as the detector antibody and conjugated with quantum dots. Based on MAb 6B3-C5 labeled with quantum dots, a modified dot blot assay was developed for the on-site determination of V. anguillarum. It was found that the method had no cross-reactivity with other than V. anguillarum bacteria. The detection limit (LOD) for V. anguillarum was 1 × 10³ CFU/ml in cultured bacterial suspension samples, which was a 100-fold higher sensitivity than the reported colloidal gold immunochromatographic test strip. When V. anguillarum was mixed with turbot tissue homogenates, the LOD was 1 × 10³ CFU/ml, suggesting that tissue homogenates did not influence the detection capabilities. Preenrichment with the tissue homogenates for 12 h could raise the LOD up to 1 × 10² CFU/ml, confirming the reliability of the method.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제53권1호
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• pp.5-16
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• 2002

연구배경 : 말초혈액 단핵구와 폐포 대식세포가 림프구에 의하여 활성화된 후 탐식된 세포내 결핵균을 제거하는 최종 효과기로 작용하지만 결핵균은 이러한 세포 내에서조차 살아남아 증식한다. 본 연구에서는 인체 감염의 경우와 유사하도록 낮은 감염률(결핵균:포식세포 1:10)을 이용하여 MAC(Mycobacterium avium)과 Mycobaterium tuberculosis $H_{37}Ra$에 대한 단핵구와 폐포 대식세포의 림프구 의존적 결핵균 살해능의 정도를 측정하고자 하였다. 방 법 : 정상인과 폐결핵 환자의 말초혈액 단핵구를 Ficoll gradient 방법을 이용하여 분리하고, 정상인의 폐포 대식세포를 기판지폐포 세척액에서 분리 하여 96well plate에 $1{\times}10^5$ 씩 분주하고 결핵균주 MAC과 $H_{37}Ra$에 낮은 감염률(결핵균:단핵구 1:10)로 감염시켰다. 일부는 비부착세포(림프구)를 림프구:포식세포 10:1 비율로 첨가하여 $37^{\circ}C$, 5% $CO_2$ 배양기에 배양하였다. 1일, 4일, 및 7일째 각각 수확하여 middlebrook 7H10/OADC agar plate에 접종 후 집락이 형성될 때까지 $37^{\circ}C$, 5% $CO_2$ 배양기에 배양하였다. 결핵균의 수는 lysate의 $m{\ell}$(세포수 $10^6$)당 CFU로 표시하였고, 결핵균의 살해능은 log killing ratio[logKR=$log_{10}$(Final CFU/Initial CFU)]로 표시하였다. 배양 1일째 상층액에서 TNF-${\alpha}$, 배양 4일째 상층액에서 ${\gamma}$-IFN을 Elisa kit를 사용하여 측정하였다. 결 과 : 단핵구의 세포내 결핵균 살해능은 정상대조군에 비하여 결핵환자군에서 ${\Delta}logKR$가 MAC -0.4, $H_{37}Ra$ -0.2 정도로 유의하게 증가되어 있었다(p<0.05). 정상대조군에서 폐포 대식세포의 결핵균 살해능은 단핵구에 비하여 ${\Delta}$logKR가 MAC과 $H_{37}Ra$ 모두 -0.2정도로 증가된 경향을 보였다. 단핵구와 폐포 대식세포내 결핵균 살해능은 림프구 의존적으로 림프구 첨가시의 ${\Delta}logKR$는 MAC -0.4, $H_{37}Ra$ -0.5 정도로 포식세포 단독에 비하여 유의하게 증가되었다 (p<0.05). ${\gamma}$-IFN은 말초 단핵구와 폐포 대식세포 단독배양시 분비량이 경미하였으나 림프구 첨가시에는 유의한 분비의 증가를 보였다. 결 론 : 본 연구는 낮은 결핵균 감염률을 이용한 인체 포식세포의 세포내 결핵균 감염 모델이다. 결핵균 살해능은 림프구 의존적이며, 포식세포의 결핵균 탐식 후 7일까지의 배양에서 결핵환자의 단핵구와 PPD 양성 정상인의 폐포 대식세포에 림프구를 첨가한 경우에만 실질적인 균 증식의 제한을 볼 수 있었다.

• 한국축산식품학회지
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• 제38권4호
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• pp.727-736
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• 2018

In this study, an immuno-magnetic bead (IMB)-based assay was developed to simultaneously detect Escherichia coli, Staphylococcus aureus, and Salmonella spp. and was tested in four animal-derived foods: beef, ham, egg, and ricotta cheese. The IMB-based assay exhibited good specificity by binding to five E. coli serotypes [capture efficiency (CE) average (avg.) 90.4%], five S. aureus strains (CE avg. 91.4%), and five Salmonella serotypes (CE avg. 95.4%) but not binding to non-target bacteria (CE<10%). Furthermore, the assay detected all three pathogens with a detection limit of 10 CFU/g without the need for enrichment or additional platforms. Since the results demonstrated that the IMB-based assay can effectively separate and enrich target bacteria from a variety of animal-derived food matrixes, the assay exhibits good specificity for potential use in providing rapid, immunological, presumptive identification of pathogenic bacteria.

• 식물병연구
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• 제8권4호
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• pp.250-253
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• 2002

참다래 궤양병의 간단하고 효율적인 병원성 검정법을 개발하고자 수행하였다. 이 검정법은 과민성반응(hypersensitive reaction) 검정법을 변형한 것으로 병원균을 50 mM 인산 완충액(pH 7.5)에 현탁하여 5년생 참다래 상위엽에 주사기를 이용하여 엽육세포에 주입하였다. 병징은 접종 2일 후부터 보이기 시작하여 4일후에 판정이 가능하였으며 검정한계 농도는 $10^4$cfu/ml이었다. 주사접종법을 이용하여 25종에 대한 기주범위를 검정하였을 때 병원균과 기주에 따라 여러 가지 병징을 보였다. 이 검정법은 습도와 관계없이 빠르게 병징을 나타내는 효과적인 방법이었다.

• 한국안광학회지
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• 제8권2호
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• pp.65-69
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• 2003

본 연구는 천연보존제인 자몽씨 추출물과 합성보존제인 $H_2O_2$를 사용하여 soft contact lens 착용시 각막염의 원인중 하나인 Gram negative bacteria인 Pseudomonas aeruginosa 대한 살균효과를 알아보았다. Pseudomonas aeruginosa는 4주간 배양하여 포낭 형태를 이루게 한 다음 $7{\times}10^6CFU/m{\ell}$의 현탁액에 soft contact lens를 오염시킨 후 천연보존제와 합성보존제의 살균 효과를 비교하였다. 현탁액에 담군 120분후 균의 생존률은 천연보존제는 $1{\times}10^3CFU/m{\ell}$ 합성보존제는 $0.5{\times}10^2CFU/m{\ell}$으로 나타나 유의한 차이는 없었다. 하지만 합성보존제의 경우 눈에 자극감이나 화학적 안 외상을 줄 수 있는 점을 고려하면 자몽씨 추출액과 같은 인체에 무독한 천연 보존제의 개발이 필요한 것으로 나타났다.

• 대한미생물학회지
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• 제21권4호
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• pp.423-434
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• 1986

The role of macrophages in the resistance of ICR mice to Candida albicans and Salmonella typhimurium was assessed using silica, agent which selectively inactivates macrophages or poly-2-vinylpyridine-N-oxide(PVNO), a lysosomal stabilizing agent. In addition, effect of silica on humoral and cellular immune responses to sheep red blood cells(SRBC) or polyvinylpyroridone(PVP) was examind. Colonyforming units(CFU) of C. albicans or S. typhimurium in the spleen, livers and kidneys of silica-treated or diluent-treated mice were enumerated at various times after infection. Silica was given i. v. to mice at 4 days or 1 day before infection. Although there was no apparent differences in the number of CFU of C. albicans cultured from the spleens or livers of silica-treated and control mice at every assay period, significant differences in the number of CFU of C. albicans in the kidneys of silica-treated and control mice. Namely, silica given to mice 1 day before infection significantly increased the number of CFU of C. albicans in the kidneys at 2, 4 and 6 days after infection, but did not change the number of CFU at 8 days after infection. Silica given to mice at 4 days before infection significantly increased the number CFU in the kidneys at 2 and 4 days after infection, but rather decreased the number of CFU at 8 days after infection. The number of CFU of C. albians cultured from the kidneys of splenectomized which were experimentally infected mice was similar to the number recovered from sham-operated mice at 4 and 8 days postinfection irrespective of time of infection relative to operation. The pretreatment of mice with PVNO appeared to abrogate the silica-induced susceptibility of mice to C. albicans. PVNO alone showed somewhat protective effect against challenge with C. albicans. In contrast, silica treatment did not alter the number of CFU of S. typhimurium recovered from the spleens and kidneys of mice. The administration of silica to mice at 4 days or 1 day before SRBC immunization significantly suppressed delayed-type hypersensitivity(DTH) reactions to SRBC and antibody production to SRBC, a thymus-dependent antigen and PVP, a thymus-independent antigen. These results provide evidence that macrophages play an important role in susceptibility to Candida infection and strongly demonstrated that macrophages play an essential role in the induction of immune responses in mice.