Objectives : The purpose of this study was to investigate the reproductive effect of Ginseng radix on male mice. Methods : Male C57BL/6J mice were divided into four groups ; normal group (vehicle-treated, n=8), Ginseng radix treatment group (100, 500, 1000 mg/kg, n=8). Ginseng radix extract was treated for 5 weeks. After treatment each group was examined for assessment of sperm count and CatSper protein expression using computer assisted semen analysis (CASA) system and the immunofluorescence. Results : Sperm count of normal and Ginseng radix extract treated group were 287.57 vs. 371.62, 364.83, $343.29{\times}10^6$, respectively. The CatSper3, 4 proteins expression of Ginseng radix treated group were significantly increased than that of normal group. Conclusions : These findings suggest that the Ginseng radix improves male reproductive function by increasing sperm count and CatSper protein expression.
To investigate the mechanism of the regulation of cytochrome P450IAl, the 5'-flanking region of a trout cytochrome P4501Al was cloned into the CAT basic expression vector at HindⅢ site. This trout Cytochrome P450IAl upstream DNA containing CAT construct was transfected into Hepa-1 cells .3MC treatment to hepa I cells transfected with trout P450IAl-CAT construct increased CAT protein and mRNA by 2.81 fold when it was compared with that of control. This increase CAT protein and mRNA was decreased by concomitantly treated flavonoids and aminopyrine. The level of CAT protein was 29.2-58.0% of 3MC stimulated CAT protein.
Microiniection of genes Into Xenopus laeuis oocvtes in highly useful in the annvsis of gene regulation, since a large number of oocvtes can be injected in a relatively short time. The GRP78 enhancer has been identified to a 291-bp fragment that spans a region of GRP78 promoter between -378 and -87 (Lin et at., 1986: Kim and Lee, 1989). We examined whether this GRP78 enhancer is effective in directing expression of heterologous gene in Xenopus laeuis oocytes. The chloramphenicol acetvltransferase (CAT) fusion constructs containing the GRP78 promoter and the SV4O early promoter were constructed and were injected into nuclei of Xencpus laeuis oocvtes. The recipient oocvtes were then assayed for CAT activity. The fusion constructs exhibited higher activity as compared to SV40 promoter tested here. The GRP78 enhancer showed 8.5- to 9.2-fold enhancement over that of the SV4O promoter. The orientation of GRP78 enhancer with respect to the direction of CAT transcription unit had no significant effect. Thus, the GRP78 enhancer is a viable candidate for the construction of expression system for use in Xenopus laevss oocvtes and will be important for the studY of a gene expression throughout development.
미꾸라지를 대상으로 어류 유전자 이식을 위한 유용 model system으로 개발하기 위한 연구의 일환으로 잉어의$\beta$-actin 유전자의 promoter와 CAT 유전자가 융합되어 있는 외래 유전자 (pFV4CAT)를 미꾸라지에 이식, transgenic founder 미꾸라지를 생산하였다. PCR 분석결과, 이식된 외래 유전자는 부화 후 9개월된 성어에서 7.4-37.0%의 빈도로 존재하였으며 Southern blot 분석에 의해서 염색체 상의 삽입 가능성을 나타내었다. In situ immunohistochemical analysis 결과 이식된 외래 유전자는 미꾸라지 세포내에서 비교적 높은 빈도로 발현하였으며 그 발현 양상은 개체마다 다양하게 나타났다.
Three catalase cDNA clones were isolated from the small radish (Raphanus sativus L.). Their nucleotide and deduced amino acid sequences showed the greatest homology to those of Arabidopsis. Genomic Southern blot analysis, using RsCat1 cDNA as a probe, showed that catalases are encoded by small multigene family in the small radish. Nondenaturing polyacrylamide gels revealed the presence of several catalase isozymes, the levels of which varied among the organs examined. The isozyme activities were assigned the individual catalase genes by Northern analysis using total RNA from different organs. The three catalase genes were differentially expressed in response to treatments such as white light, xenobiotics, osmoticum, and UV. Their expression in seedlings was controlled by the circadian clock under a light/dark cycle and/or in constant light. Interestingly, RsCat1 transcripts peaked in the morning, while those of RsCat2 and RsCat3 peaked in the early evening. Our results suggest that the RsCat enzymes are involved in defense against the oxidative stress induced by environmental changes.
Infection of human fibroblast (HF) cells with human cytomegalovirus (HCMV) result in changes in the intracellular level of second messengers. Since nitric oxide (NO) production has been known to be related with other second messengers, it is probable that HCMV infection of HF cells may involve NO. To test this possibility, the amount of NO was measured following ogenous addition of NO generators such as sodium nitroprusside (SNP) or S-nitroso-N-a-cetylpenicillamine (SNAP) immediately after HCMV infection, however, inhibited virus multiplication. Furthermore, immunoblot experiment using monoclonal antibody to HCMV major immediate early (MIE) proteins or CAT assay using pCMVIE/CAT (plasmid containing CAT gene driven by HCMV MIE promoter) revealed that SNP or SNAP blocked the MIE gene expression. SNP was more effective than SNAP in hibiting HCMV multiplication or MIE gene expression. SNP produced more NO than SNAP in inhibiting HCMV multiplication or MIE gene expression. SNP produced more NO than SNAP. Although the mechanism for the inhibition of HCMV multiplication and MIE gene expression by NO is still elusive some correlation with NO-mediated inhibition of HCMV-induced increase in cytosolic free Ca$\^$2+/ concentration ([Ca$\^$2+/]) was observed. The increase of [Ca$\^$2+/] following HCMV infection was inhibited by SNP, and less effectively by SNAP. Raising [Ca$\^$2+/ with bromo-A23187 partially reversed the SNP block of MIE gene expression. Thus, there appear to e some relationships among NO. [Ca$\^$2+/], and HCMV MIE gene expression.
Jorgensen, Lene;Connor J. Thomas;Brian K. Oneill;Anton P.J. Middelbeg
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제7권1호
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pp.21-24
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1997
Chloramphenicol acetyl transferase (CAT) protein and mRNA levels in E. coli were determined following induction of a tac::cat construct by isopropyl-${\beta}$-thiogalactopyranoside (IPTG). High cat mRNA levels did not directly reflect CAT protein levels, in either shakeflask experiments or fermentations. Furthermore, concentrations of IPTG resulting in the highest levels of expression of cat mRNA, were different to those resulting in highest levels of CAT protein. The data suggest that high transcriptional activities lead to limitations at the translational level.
In female tract, mammalian sperm develop hyperactivated motility which is a key physiological event for sperm to fertilize eggs. This motility change is triggered by Ca2+ influx via the sperm-specific Ca2+ channel, CatSper. Although previous studies in human and mice largely contributed to understanding CatSper and Ca2+ signaling for sperm hyperactivation, the differences on their activation mechanisms are not well understood yet. There are several studies to examine expression and significance of the CatSper channel in non-human and non-mouse models, such as domestic animals. In this review, I summarize key knowledge for the CatSper channel from previous studies and propose future aspects for CatSper study using sperm from domestic animals.
명조건과 암조건에서 카드뮴이 벼 유묘 뿌리와 줄기의 카탈라제 총 활성과 동위효소 발현에 미치는 영향을 조사하였다. 카드뮴을 처리하면 명조건과 암조건의 뿌리와 줄기에서 과산화수소 함량이 현저하게 증가하였다. 뿌리의 카탈라제 동위효소는 잎과는 서로 다른 조직 특이적 발현양상을 보여주었다. 또한 카드뮴을 처리하게 되면 명조건 뿌리는 암조건 뿌리와 카탈라제 동위효소의 발현 패턴에 차이를 보였다. 1 mM 카드뮴 처리에 의하여 명조건 뿌리의 카탈라제 총 활성은 약 16배 증가하였는데 이러한 활성증가는 동위효소 CAT1l과 CAT2의 증가에 의한 것이었다. 반면 암조건 뿌리의 카탈라제는 0.1mM 카드뮴에 의하여 약 3배 증가하였느나, 0.5와 1mM카드뮴에 의하여 오히려 효소활성이 감소하였다. 0.1mM카드뮴에 의한 효소활성 증가는 CAT1, CAT3, CAT4 동위효소의 활성 증가에 기인하였으나 카드뮴 농도를 더 높였을때 CAT2와 CAT4가 감소하였다. 대조군 잎에는 양극 동위효소인 CATc, 중성 동위효소인 CATn와 음극 동위효소인 CAT1가 존재하였다. 잎에서는 명조건과 암조건 모두에서 카드뮴을 처리하여도 카탈라제 활성과 동위효소 발현에 차이가 없었다. 이러한 결과들은 카드뮴에 의한 뿌리 카탈라제 효소의 발현변화는 빛에 의하여 조절되지만 잎 카탈라제의 발현은 빛에 의하여 조절되지 않음을 보여준다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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