본 연구는 rotifer, B. rotundiformis를 대상으로 소화효소 실험을 하기 위해 이들이 가지고 있는 소화효소의 최고 활성 조건을 확인하기 위해 수행하였다. rotifer, B. rotundiformis의 $\alpha$-amylase, total alkaline Protease, trypsin 및 TG-lipase는 Tris-HCl buffer 보다 phosphate-NaOH buffer 안정적인 효소활성을 보였다. $\alpha$-amylase, trypsin 및 TG-lipase는 pH 8.0에서, total alkaline proteaset pH 7.0에서 높은 효소 활성을 나타내었다. $\alpha$-amylase 활성은 $40^{\circ}C$에서 가장 높은 활성을 보였으며, total alkaline pretense와 trypsin은 $55{\~}60^{\circ}C$의 온도에서 높은 활성을 나타내었다. 반면 TG-lipase 활성은 $25{\~}30^{\circ}C$의 낮은 온도에서 활성이 높았다. $\alpha$-amylase, total alkaline pretense, trypsin 및 TG-lipase의 활성의 적정 기질 농도는 $3.5\%$ starch, $\0.6%$ azo-casein, $87.5{\mu}M$ BApNA and 81.2 mM olive oil이었다. $\alpha$-amylase, total alkaline protease, trypsin 및 TG-lipase의 활성의 적정 반응시간은 40, 60, 30 and 25 min으로 나타났다. 본 연구 결과에서 얻어진 자료는 rotifer, B. rotundiformis의 소화효소 연구를 위한 기초 자료로 이용될 것이다.
The present study describes the gene cloning and high-level expression of an alkaline and thermostable lipase gene from Trichosporon coremiiforme V3. Nucleotide analysis revealed that this lipase gene has an open reading frame of 1,692 bp without any introns, encoding a protein of 563 amino acid residues. The lipase gene without its signal sequence was cloned into plasmid pPICZαA and overexpressed in Pichia pastoris X33. The maximum lipase activity of recombinant lipase was 5,000 U/ml, which was obtained in fed-batch cultivation after 168 h induction with methanol in a 50 L bioreactor. The purified lipase showed high temperature tolerance, and being stable at 60℃ and kept 45% enzyme activity after 1 h incubation at 70℃. The stability, effects of metal ions and other reagents were also determined. The chain length specificity of the recombinant lipase showed high activity toward triolein (C18:1) and tripalmitin (C16:0).
Lipase를 유지분해에 이용하기 위한 기초연구로서 Candida cylindracea에서 추출된 lipase를 흡착법에 의해 고정화하고 그의 반응특이성을 본 결과는 다음과 같다. Lipase 흡착에 적합한 흡착제로는 silica gel이 선정되었으며, Silica gel 1.6g에 lipase 47.5 units를 $5^{\circ}C$, PH 7.0에서 100분간 흡착시키는 것이 좋았다. Silica gel에 고정화 시킨 lipase를 유지방과 olive oil의 분해에 적합한 최적온도 및 최적pH는 가용성효소와 비교시 $37^{\circ}C$, pH 7.0으로 변하지는 않았으나 활성의 범위는 넓어졌다. 또한 열안정성 및 pH안정성도 가용성 효소에 비하여 활성의 범위가 넓어졌다. 유지의 분해에 적합한 고정화 효소의 최적효소농도는 유지방의 경우 30g이었으며 올리브유의 경우 80g으로 선정하였다. 이 때 최적기질농도는 유지방 및 올리브유 모두 20%였다. 반응시간에 따른 반응률은 유지방을 이용하여 조사한 결과 가용성 효소는 반응 4시간까지는 급격한 분해를 나타냈으나 고정화 효소는 8시간 까지 급격한 증가를 나타내고 그 이상은 거의 일정하였다. 또한 유리되는 지방산의 profile은 가용성 효소와 비교시 capric acid의 생성은 모두 높았으며, myristic acid의 함량은 높고 butyic acid의 함량은 적었다.
Staphylococcus xylosus SC-22으로 생성된 lipase을 분리. 정제하여 특성을 조사하였다. Staphylococcus xylosus SC-22의 배양액을 ammonium sulfate (30~80%), Sepadex G-100 및 DEAE-Sephacel chromatography의 정제과정을 거친 결과, specific activity가 756.6 units/mg protein으로 19.3배 정제도었으며 수율은 17.2%로 나타났다. 정제효소의 분자랴은 47kDa, 정제된 효소의 특성은 최적온도은 4$0^{\circ}C$, 최적 pH는 8.0이었으며, pH 안정성 범위는 pH 6.0~10.0부근에서 비교적 안정하였다. Alkaline lipase의 활성은 C $u^{2+}$와 P $b^{2+}$에 의해 완전히 저해되었으며, F $e^{3+}$ 에 의해 50% 효소활성이 저해되었으나, $Ca^{2+}$, $Mg^{2+}$, $Na^{+}$에 의해 저해를 받지 않았다.
Two staphylococcal lipases were obtained from Staphylococcus epidermidis S2 and Staphylococcus aureus S11 isolated from sebaceous areas on the skin of the human face. The molecular mass of both enzymes was estimated to be 45 kDa by SDS-PAGE. S2 lipase displayed its highest activity in the hydrolysis of olive oil at $32^{\circ}C$ and pH 8, whereas S11 lipase showed optimal activity at $31^{\circ}C$ and pH 8.5. The S2 lipase showed the property of cold-adaptation, with activation energy of 6.52 kcal/mol. In contrast, S11 lipase's activation energy, at 21 kcal/mol, was more characteristic of mesophilic lipases. S2 lipase was stable up to $45^{\circ}C$ and within the pH range from 5 to 9, whereas S11 lipase was stable up to $50^{\circ}C$ and from pH 6 to 10. Both enzymes had high activity against tributyrin, waste soybean oil, and fish oil. Sequence analysis of the S2 lipase gene showed an open reading frame of 2,067 bp encoding a signal peptide (35 aa), a pro-peptide (267 aa), and a mature enzyme (386 aa); the S11 lipase gene, at 2,076 bp, also encoded a signal peptide (37 aa), pro-peptide (255 aa), and mature enzyme (399 aa). The two enzymes maintained amino acid sequence identity of 98-99% with other similar staphylococcal lipases. Their microbial origins and biochemical properties may make these staphylococcal lipases isolated from facial sebaceous skin suitable for use as catalysts in the cosmetic, medicinal, food, or detergent industries.
The strain S4-14 which produced alkaline lipase and had resistance against linear alkylbenzene sulfonate was isolated from soil or water samples. The isolated strain S4-14 was identified a species belong to Pseudomonas. Alkalin lipase secreted by Pseudomonas sp. S4-14 was purified by ammonium sulfate precipitation procedure follwed by DEAE-Cellulose, DEAE-Sepharose and gel filtration chromatohraphies with 995.15 U/mg protein and 16.1% yield. The molecular weight of the enzyme was estimated to be 65,000 dalton by SDS-PAGE. The optimum pH and temperature of the purified enzyme was 10.5 and 45$\circ $C, respectively. The emzyme was stable at 45$\circ $C for 1 hr and in a pH range from 8.0 to 12.0 for 24 hr at 4$\circ $C. The activity of lipase was enhanced by Ca$^{2+}$ while inhibited strongly by Pb$^{2+}$, Zn$^{2+}$ or Fe$^{3+}$. The activity of lipase was inactivated about 50~60% in the presence of 50 mg/l linear alkylbenzene sulfonate, $\alpha $-olefin sulfonate, alcohol ethoxylate or perborate.
The synthesis of lauryl palmitate from palmitic acid and lauryl alcohol was investigated in organic solvents using lipase. Water-immiscible organic solvent such as hexane, toluenem cyclohexane, and isooctane were found to be suitable of ester synthesis . The effect of water content on the initial rate of conversion was examined . As the content increased, the reaction rate increased. But addition of water in organic solvent decreased therostability of enzyme . The best lauryl palmitate synthesis was achieved with water content of 0.2-0.4% reaction temperature of 4$0^{\circ}C$ and 45$^{\circ}C$ for Candida cylindracea lipase porcine, pancreatic lipase, respectively. when ester synthesis was carried out under the optimum conditions, the conversion yield of palmitate into lauryl palmitate after 70hrs reached 85% and 69 % for the Candida cylindracea lipase and porcine opancreatic lipase, respectivley.
A lipase from Aeromonas sp. LPB 4, a psychrotophile isolated from a sea sediment was purified and characterized. The lipase was purified 53.5 fold to a homogeneous state by acetone precipitation and QAE sephadex column chromatography and its molecular weight was determined to be 50 kDa by SDS-PAGE. The enzyme exhibited maximum activity at 10$^{\circ}C$ and was stable at temperatures lower than 50$^{\circ}C$. This lipase favored substrates containing medium carbon chain of acyl group, while too low and high carbon chain decreased its activity. The lipolytic activity of purified lipase was slightly increased by the addition of 0.1% detergent, but decreased by 1% of detergent. Butanol severely decreased the lipase activity while methanol increased the activity about 15%.
각거 시요로부터 분이된 215주의 Rhizopus 속중 lipase생성자이 강한 1 주를 선정하여 균학적 성질 및 lipase생성 조건을 검토한 결과는 다음과 같다. (1) 우수균주 strain K52는 균학적 제성질을 살펴본 결과 Rhizopus delemar에 유사하였다. (2) 배양기간은 밀기울 고예배양의 경우 48시간, 액면배양의 경우는 96시간, 진악배양의 경우는 72시간 경과후 최고의 역가를 나타 내었다. (3) 진종배양시보다 액면배양시에 lipase의 생성이 더욱 양호하였다. (4) 밀기울 고예배양시에도 효소의 생성이 양호하였으며 배양 48시간후 3.800(u/g)의 활성을 나타내었다. (5) 배양최적온도는 액체배양시나 국체배양시 모두 3$0^{\circ}C$가 가장 양호하였다.
Industrial development has increase consumption of crude oil and environmental pollution. A large number of microbial lipolytic enzymes have been identified and characterized to date. To development for a new lipase with catalytic activity in degradation of crude oil as a microbial enzyme, Acinetobactor sp. B2 was isolated from soil samples that were contaminated with oil in Daejon area. Acinetobactor sp. B2 showed high resistance up to 10 mg/mL unit to heavy metals such as Ba, Li, Al, Cr, Pb and Mn. Optimal growth condition of Acinetobactor sp. B2 was confirmed $30^{\circ}C$. Lipase was purified from the supernatant by Acinetobactor sp. B2. Its molecular mass was determined to the 60 kDa and the optimal activity was shown at $40^{\circ}C$ and pH 10. The activation energies for the hydrolysis of p-nitrophenyl palmitate were determined to be 2.7 kcal/mol in the temperature range 4 to $37^{\circ}C$. The enzyme was unstable at temperatures higher than $60^{\circ}C$. The Michaelis constant $(K_{m})\;and\;V_{max}$ for p-nitrophenyl palmitate were $21.8{\mu}M\;and\;270.3{\mu}M\;min^{-1}mg\;of\;protein^{-1}$, respectively. The enzyme was strongly inhibited by $Cd{2+},\;Co^{2+},\;Fe^{2+},\;Hg^{2+},\;EDTA$, 2-Mercaptoethalol. From these results, we suggested that lipase purified from Acinetobactor sp. B2 should be able to be used as a new enzyme for degradation of crude oil, one of the environmental contaminants.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.