양송이 수확후 배지로부터 lipase 생산균을 분리하여 16S rDNA 유전자 분석을 통해 동정한 결과, Burkholderia cepacia ATCC와 99.8% 상동성을 나타냈다. 분리균 B. cepacia 배양여액 중에 함유된 효소단백질을 70% 황산암모늄으로 침전시켜 crude lipase를 회수하였다. 고정화 효소를 제조하기 위하여 crude lipase(CL)과 Novozyme lipase(NL)을 cross-linking 법에 의해 Silane화된 Silicagel에 고정화 시킨 결과, immobilized CL(ICL)은 61%, immobilized NL(INL)은 72%의 잔존활성을 유지하였다. 중성지방 Canola oil을 알칼리(NaOH) 촉매와 효소(CL 및 ICL) 촉매를 이용하여 지방산(fatty acid)으로 분해한 후, methanolysis에 의한 에스터전이반응(trans-esterification)을 통해 지방산으로부터 전환된 바이오디젤(fatty acid methyl ester, FAME)의 종류와 수율을 비교 하였다. 생성된 총 FAME 함량은 NaOH $781mg\;L^{-1}$, free lipase $681mg\;L^{-1}$, 고정화 lipase $598mg\;L^{-1}$순으로 높았으며, 지방산 조성별 FAME 함량은 linoleic acid(C18:1)가 약 50%로 가장 높았으며, stearic acid(C18:0)가 22%정도의 높은 수준이었다. 또한 반응시간이 증가함에 따라 CL과 ICL 모두 불포화지방산 FAME의 조성비는 감소하고, 상대적으로 포화지방산 FAME의 조성비는 증가하는 경향을 보여 lipase 효소가 transesterification 활성과 interesterification 활성을 동시에 가지는 것으로 여겨진다. 고정화효소의 잔여활성은 반복회수가 증가함에 따라 서서히 감소하여 4회 반복 후, 초기 활성도에 비해 ICL은 34% 와 INL은 21%까지 감소하였다.
As a step towards discovering novel pathogenesis-related proteins, we performed a genome scale computational identification and characterization of secreted and transmembrane (TM) proteins, which are mainly responsible for bacteria-host interactions and interactions with other bacteria, in the genomes of six representative Burkholderia species. The species comprised plant pathogens (B. glumae BGR1, B. gladioli BSR3), human pathogens (B. pseudomallei K96243, B. cepacia LO6), and plant-growth promoting endophytes (Burkholderia sp. KJ006, B. phytofirmans PsJN). The proportions of putative classically secreted proteins (CSPs) and TM proteins among the species were relatively high, up to approximately 20%. Lower proportions of putative type 3 non-classically secreted proteins (T3NCSPs) (~10%) and unclassified non-classically secreted proteins (NCSPs) (~5%) were observed. The numbers of TM proteins among the three clusters (plant pathogens, human pathogens, and endophytes) were different, while the distribution of these proteins according to the number of TM domains was conserved in which TM proteins possessing 1, 2, 4, or 12 TM domains were the dominant groups in all species. In addition, we observed conservation in the protein size distribution of the secreted protein groups among the species. There were species-specific differences in the functional characteristics of these proteins in the various groups of CSPs, T3NCSPs, and unclassified NCSPs. Furthermore, we assigned the complete sets of the conserved and unique NCSP candidates of the collected Burkholderia species using sequence similarity searching. This study could provide new insights into the relationship among plant-pathogenic, humanpathogenic, and endophytic bacteria.
4품종(남도마늘, 고흥마늘, 단양마늘, 중국산 수입마늘)의 마늘추출액의 식물병원세균과 진균에 대한 항균효과를 조사하였다. 실내실험에서 마늘추출액은 그람양성세균, 그람음성세균, 진균 모두에 좋은 항균효과를 나타내었다. 본 연구에 사용된 4품종의 마늘추출액 중 남도마늘과 중국산 수입마늘이 보다 좋은 항균효과를 나타내었다. 그람양성세균인 Clavibacter michiganensis가 마늘추출액에 가장 민감하였으며, Burkholderia cepacia가 가장 저항성이 컸다. 마늘추출액을 이용한 오이 흰가루병에 대한 항균효과 포장실험에서는 59.7${\sim}$61.9%의 방제가를 보여주었다.
Ahn, Youngbeom;Kim, Jeong Myeong;Lee, Yong-Jin;LiPuma, John J.;Hussong, David;Marasa, Bernard S.;Cerniglia, Carl E.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제27권12호
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pp.2211-2220
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2017
Chlorhexidine gluconate (CHX) and benzalkonium chloride (BZK) formulations are frequently used as antiseptics in healthcare and consumer products. Burkholderia cepacia complex (BCC) contamination of pharmaceutical products could be due to the use of contaminated water in the manufacturing process, over-diluted antiseptic solutions in the product, and the use of outdated products, which in turn reduces the antimicrobial activity of CHX and BZK. To establish a "afe use" period following opening containers of CHX and BZK, we measured the antimicrobial effects of CHX ($2-10{\mu}g/ml$) and BZK ($10-50{\mu}g/ml$) at sublethal concentrations on six strains of Burkholderia cenocepacia using chemical and microbiological assays. CHX (2, 4, and $10{\mu}g/ml$) and BZK (10, 20, and $50{\mu}g/ml$) stored for 42 days at $23^{\circ}C$ showed almost the same concentration and toxicity compared with freshly prepared CHX and BZK on B. cenocepacia strains. When $5{\mu}g/ml$ CHX and $20{\mu}g/ml$ BZK were spiked to six B. cenocepacia strains with different inoculum sizes ($10^0-10^5CFU/ml$), their toxic effects were not changed for 28 days. B. cenocepacia strains in diluted CHX and BZK were detectable at concentrations up to $10^2CFU/ml$ after incubation for 28 days at $23^{\circ}C$. Although abiotic and biotic changes in the toxicity of both antiseptics were not observed, our results indicate that B. cenocepacia strains could remain viable in CHX and BZK for 28 days, which in turn, indicates the importance of control measures to monitor BCC contamination in pharmaceutical products.
A bacterial strain CH-67 which exhibits antagonism towards several plant pathogenic fungi such as Botrytis cinerea, Fulvia fulva, Rhizoctonia solani, Sclerotinia sclerotiorum, Colletotrichum sp. and Phytophthora sp. was isolated from forest soil by a chitin-baiting method. This strain was identified as Burkholderia cepacia complex (Bcc) and belonging to genomovar IX (Burkholderia pyrrocinia) by colony morphology, biochemical traits and molecular method like 16S rRNA and recA gene analysis. This strain was used to develop a bio-fungicide for the control of tomato leaf mold caused by Fulvia fulva. Various formulations of B. pyrrocinia CH-67 were prepared using fermentation cultures of the bacterium in rice oil medium. The result of pot experiments led to selection of the wettable powder formulation CH67-C containing modified starch as the best formulation for the control of tomato leaf mold. CH67-C, at 100-fold dilution, showed a control value of 85% against tomato leaf mold. Its disease control efficacy was not significantly different from that of the chemical fungicide triflumidazole. B. pyrrocinia CH-67 was also effective in controlling damping-off caused by Rhizoctonia solani PY-1 in crisphead lettuce and tomato plants. CH67-C formulation was recognized as a cell-free formulation since B. pyrrocinia CH-67 was all lethal during formulation process. This study provides an effective biocontrol formulation of biofungicide using B. pyrrocinia CH-67 to control tomato leaf mold and damping-off crisphead lettuce and tomato.
Treatment with antagonistic rhizobactera Burkholderia cepacia strain N9523 or an inducer of resistance DL-$\beta$-amino-n-butyric acid (BABA) effectively inhibited Phytophthora capsici infection on pepper plants in artificially infested pots. Treatment with BABA alone at $1,000\mu\textrm{g}$/ml or together with B. cepacia in combination induced a strong protection from the Phytophthora disease in the greenhouse. In artificially infested field, protection of pepper plants against the Phytophthora epidemic by BABA treatment was maintained at a considerable level. In contrast, soil drench with the antagonist B. cepacia alone, or in combination with BABA did not suppress the Phytophthora epidemic in the field. Mortality of pepper plants caused by P. capsici infection was significantly reduced by treatment with the antagonist Pseudomonas aeruginosa strain 950923-29 and BABA (12-29% plants diseased) relative to the untreated control (41-91% plants diseased) in the naturally infested field. Treatment with the antagonist Ps. aeruginosa strain 950923-29 and BABA also resulted in high levels of protection against Phytophthora blight in pepper plants. In the plastic filmhouse test, the average percentage of plants diseased was significantly low relative to the naturally infested field. Treatment with the antagonist Ps. aeruginosa strain 950923-29 and BABA in combination was most effective in suppressing the Phytophthora disease in field and plastic filmhouse.
One of the most promising TCE treatment systems is trickling biofilter (TBF), in which monooxygenase, the corresponding enzyme for initiating growth substrate oxidation, fortuitously transforms TCE via cometabolism. TCE. however. is not easily treated by simple cometabolic biotransformation. This is mainly due to the toxicity of TCE to microbial cell and monooxygenase. In this study, we cleveloped and operated a two-stage CSTR/TBF system for the long-term continuous treatment of TCE. In the two-stage biotransfon11ation system, CSTR with cell recycle from TBR was coupled to the TBR for the reactivation of the cells deactivated during TCE degradation.
Stimulatory effects of three different intermediate metabolites (1-hydroxy-2-naphthoate, salicylate, and catechol) as potential inducers on phenanthrene degradation were investigated using two different bacteria (Pseudomonas putida ATCC 17484 and Burkholderia cepacia PB12). The relative induction capacity was high in the sequence of 1-hydroxy-2-naphthoate, salicylate, and catechol in both strains. The highest of up to 12 times increase of the induction was obtained by the addition of 1-hydroxy-2-naphthoate in the strain PB12, compared with the control where no exogenous inducer was added. The induction capacity of the potential inducers was closely related with the number of oxygenations required per electron equivalents in one mole of the inducer.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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