Objective of this study was to examine the effect of sodium nitroprusside (SNP), a nitric oxide (NO) donor on steroid synthesis, growth and apoptosis of buffalo granulosa cells (GCs) in vitro. Follicular fluid of antral follicles (3-5 mm diameter) was aspirated and GCs were cultured in 0 (control), $10^{-3}$, $10^{-5}$, $10^{-7}$, $10^{-9}\;M$ of SNP for 48 h. To evaluate whether this effect was reversible, GCs were cultured in presence of $10^{-5}\;M$ SNP+1.0 mM $N^{\omega}$-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) a NO synthase (NOS) inhibitor or hemoglobin (Hb, $1.0{\mu}g$) as NO scavenger. Nitrate/nitrite concentration was evaluated by Griess method, progesterone and estradiol concentrations by RIA and apoptosis by TUNEL assay. SNP ($10^{-3}$, $10^{-5}$, $10^{-7}\;M$) significantly (p<0.05) inhibited estradiol and progesterone synthesis, growth, disorganized GCs aggregates and induced apoptosis in a dose dependent manner. However, $10^{-9}\;M$ SNP induced the progesterone synthesis and stimulated GCs to develop into a uniform monolayer. Combination of SNP $10^{-5}$ M+L-NAME strengthened the inhibitory effect while, SNP+Hb together reversed these inhibitory effects. In conclusion, SNP at greater concentrations ($10^{-3}$, $10^{-5}$ and $10^{-7}\;M$) has a cytotoxic effect and it may lead to cell death whereas, at a lower concentration ($10^{-9}\;M$) induced progesterone synthesis and growth of GCs. These findings have important implications that NOS derived NO are involved at physiological level during growth and development of buffalo GCs which regulates the steroidogenesis, growth and apoptosis.
Granum, G.;Wanapat, Metha;Pakdee, P.;Wachirapakorn, C.;Toburan, W.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제20권9호
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pp.1389-1396
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2007
Twelve swamp buffaloes and Brahman cattle heifers (6 animals each) were randomly assigned to two treatments, control (grazing only) and supplementation of cassava hay (CH) at 1-kg dry matter per head per day (DM/hd/d), in a $2{\times}2$ factorial arrangement according to a cross-over design. The cassava hay contained a high level of protein (19.5% of DM) and a strategic amount of condensed tannins (4.0% of DM). As a result it was revealed that supplementation of CH at 1-kg DM/hd/d significantly (p<0.05) improved the nutrition of both swamp buffaloes and Brahman cattle in terms of DM, organic matter (OM), protein and energy intake and digestibility, ruminal NH3-N and rumen ecology. Supplementation significantly (p<0.05) reduced weight losses in both species and improved the health, in terms of reduced number of parasite eggs in feces (p<0.05), of both buffaloes and cattle. There tended to be a difference in term of response to CH between the two species. The DM, OM, protein intake and digestibility and total digestible energy intake tended to be higher for buffaloes as compared to cattle. Moreover, the percentage reduction of parasite eggs tended to be higher for buffaloes as compared to cattle (57.6 and 45.0%, respectively). However, there were no significant interactions between species and treatments.
Akshey, Y.S.;Palta, P.;Manik, R.S.;Vivekananad, Vivekananad;Chauhan, M.S.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제18권5호
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pp.632-636
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2005
This study was conducted to investigate the effects of removal of all ovarian follicles through repeated transvaginal follicle aspiration (TVFA) on the subsequent follicular populations in buffaloes. This information is crucial for determining the optimum time interval between successive aspirations for recovering oocytes from live buffaloes through Transvaginal Oocyte Retrieval (TVOR). The oestrus of cycling buffaloes (n=5) were synchronized by a single PGF injection schedule. All the ovarian follicles were removed once every 7 days for 6 weeks through TVFA, starting from Day 7 of the oestrous cycle (Day 0 = day of oestrus). The number and size of individual ovarian follicles was recorded at Day 3 and Day 5 (Day 0 = day of TVFA) through transrectal ultrasonography. The follicles were classified on the basis of their diameter as small (3-5 mm), medium (6-9 mm) and large ($\geq$10 mm). There was no difference in the number of small and medium follicles, and the number of total follicles between Day 3 and Day 5. However, the number of large follicles was significantly higher (p<0.05) at Day 5 than that at Day 3. There was a significant (p<0.05) decrease in the proportion of small follicles and an increase (p<0.05) in the proportion of large follicles from Day 3 to Day 5, with no change in the proportion of medium follicles. The number of total follicles at Day 3 or Day 5 did not differ during the 6 TVFA sessions. It can be concluded that an interval of 3 days is more suitable than that of 5 days between successive aspirations for recovering oocytes through TVOR in a twice weekly schedule and that repeated removal of follicles through TVFA does not adversely affect the number of total follicles 3 or 5 days after TVFA.
Little is known about the origin and genetic diversity of swamp buffaloes in China. To obtain more knowledge on genetics of the water buffalo in China, the complete mitochondrial D-loop sequences of 30 samples from 6 native types were investigated. The results revealed 12 mitochondrial haplotypes with 50 polymorphic sites. Among these polymorphic sites, there were 49 transitions and 1 transversion. The average nucleotide diversity and haplotype diversity estimated from mtDNA D-loop region in 6 Chinese water buffalo types were 0.00684 and 0.798, respectively, showing rather abundant mitochondrial genetic diversity. The Neighbor-Joining (NJ) tree of mtDNA of Chinese water buffaloes was constructed according to the 12 haplotypes. The NJ tree indicated two lineages being designated lineage A and lineage B, in which lineage A was predominant, and lineage B was at low frequency. The new lineage B was first discovered and defined in 6 Chinese water buffalo types. These results showed that two different maternal lineages were involved in the origin of domestic swamp buffaloes in China and the lineage B was probably an introgression from Southeast Asian buffaloes.
Touqir, N.A.;Khan, M. Ajmal;Sarwar, M.;Mahr-un-Nisa, Mahr-un-Nisa;Ali, C.S.;Lee, W.S.;Lee, H.J.;Kim, H.S.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제20권4호
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pp.523-528
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2007
This study was conducted to evaluate the feeding value of jambo grass (Sorghum $bicolour{\times}Sorghum$ sudanefe) silage and mott grass (Pennisetum purpureum) silage as a replacement of conventional fodder (jambo grass) in the diet of lactating Nili buffaloes (Bubalus bubalis). Thirty early-lactating ($45{\pm}4$ days), multi-parous Nili buffaloes, ten in each group, were allotted to three experimental diets. Jambo grass and mott grass were ensiled with molasses (at 2% of fodder DM) in two trench silos for 30 days. The control diet (JG) contained 75% jambo grass while the other two diets contained 75% jambo grass silage (JGS) and 75% mott grass silage (MGS). The remaining 25% DM in each diet was supplied by concentrates. Diets were mixed daily and fed twice a day ad libitum for 120 days. Dry matter intake (DMI) was higher with the JG diet compared with JGS and MGS diets. However, DMI as % body weight did not differ significantly in buffaloes fed either fodder or silage based diets. Crude protein (CP), digestible CP and NDF intakes were significantly higher on JG compared with silage-based diets. Apparent total tract digestibilities of DM, CP and NDF were similar in buffaloes fed JG, JGS and MGS diets. Milk yield (4% FCM) was similar in buffaloes fed JG and silage based diets. Fat, total solids, solid not fat, CP, true protein and non-protein nitrogen content of milk were similar in buffaloes fed fodder or silage based diets. The present results indicated that jambo grass and mott grass ensiled with 2% molasses for 30 days could safely replace the conventional fresh grass fodder (75% DM) in the diet of lactating Nili buffaloes without affecting their milk yield.
Mastitis is a highly morbid disease that requires detection at the subclinical stage. Tropical countries like India mainly depend on milch buffaloes for milk. The present study was conducted to investigate whether the trace minerals viz. copper (Cu), iron (Fe), zinc (Zn), cobalt (Co) and manganese (Mn) and enzyme activity of lactate dehydrogenase (LDH), alkaline phosphatase (ALP) and aspartate aminotransferase (AST) in riverine buffalo milk can be used as an indicator of subclinical mastitis (SCM) with the aim of developing suitable diagnostic kit for SCM. Trace elements and enzyme activity in milk were estimated with Atomic absorption Spectrophotometer, GBC 932 plus and biochemical methods, respectively. Somatic cell count (SCC) was done microscopically. The cultural examination revealed Gram positive bacteria as the most prevalent etiological agent. A statistically significant (p<0.01) increase in SCC, Fe, Zn, Co and LDH occurred in SCM milk containing gram positive bacterial agents only. ALP was found to be elevated in milk infected by both gram positive and negative bacteria. The percent sensitivity, specificity and accuracy, predictive values and likelihood ratios were calculated taking bacterial culture examination and $SCC\geq2{\times}10^5$ cells/ml of milk as the benchmark. Only ALP and Zn, the former being superior, were found to be suitable for diagnosis of SCM irrespective of etiological agents. LDH, Co and Fe can be introduced in the screening programs where Gram positive bacteria are omnipresent. It is recommended that both ALP and Zn be measured together in milk to diagnose buffalo SCM, irrespective of etiology.
Insulin-like growth factor binding protein-3 (IGFBP-3) gene is a structural gene associated with the growth and development of the animals. The present investigation was carried out to unravel nucleotide sequence and polymerase chain reactionrestriction fragment polymorphism (PCR-RFLP) of IGFBP-3 gene in buffalo. Genomic DNA was isolated from a total of 157 animals belonging to Murrah, Surti, Jaffarabadi and Nagpuri breeds of Indian riverine buffalo. A 655 bp of IGFBP-3 gene was amplified in all the breeds and amplicons were digested with Hae III, Taq I and Msp I restriction enzymes. On digestion with Hae III yielded single restriction pattern of 8 fragments of sizes 201, 165, 154, 56, 36, 19, 16 and 8 bp in all the animals studied. Similarly Taq I and Msp I also revealed single restriction pattern yielding fragments of sizes 240 and 415 bp and 145 and 510 bp, respectively. This shows nonpolymorphic nature of restriction sites in buffalo. Nucleotide sequencing of 587 bp of IGFBP-3 gene in Murrah buffalo was done and submitted to the GenBank (Accession No. AY304829). Nucleotide sequencing revealed an addition of 4 bases in the intronic region as compared to cattle.
Randomly Amplified Polymorphic DNA-Polymerase Chain Reaction (RAPD-PCR) analysis was carried out with a battery of 11 random decamer primers to study band frequency (BF), genetic identity index (I) and mean average percentage difference (MAPD) between Bhadawari and Murrah breeds of buffalo. The primers OPA04 and BG15 resolved a band of 460 bp, which was present only in animals of Bhadawari breed. Whereas, the primers OPA14, BG27 and BG28 produced Murrah specific fragments of sizes 730 bp and 1,230 bp, respectively. The estimate of genetic identity index was highest (0.845) with the primer OPA01 and the lowest (0.479) with the primer BG27. The genetic identity index pooled over the primers was 0.596${\pm}$0.037 between these two breeds. The highest MAPD estimate (53.9) between the two breeds was obtained with the primer BG27 and the lowest (14.3) with the primer OPA01. It might be concluded that the genetic identity index between these two breeds calculated on the basis of BF showed moderate level of genetic identity with the primers employed. MAPD calculated on the basis of uncommon bands also demonstrated lower to medium level of genetic difference between Bhadawari and Murrah breeds of buffalo.
Ultrasonographic study was undertaken to establish the echogenecity and size of reproductive organs of 18 cycling buffaloes of different parities and compared with the sizes measured by palpation per rectum at estrus (day 0), met estrus (day 2), mid diestrus (day 10) and late diestrus (day 16). The overall mean size of cervix, uterine body, right horn, left horn, right ovary and left ovary measured by palpation per rectum were 2.70$\pm$0.43, 2.36$\pm$0.36, 2.17$\pm$0.37, 2.12$\pm$0.38, 2.63$\pm$0.41 and 2.72$\pm$0.37 cm, respectively. The corresponding ultrasonographic observations were 2.10$\pm$0.40, 1.85$\pm$0.30, 1.73$\pm$0.36, 1.64$\pm$0.37, 2.16$\pm$0.36 and 2.29$\pm$0.38 cm respectively. Variations in the size of genitalia due to stages of estrous cycle were non-significant. The size of genitalia measured by palpation per rectum was significantly higher (p<0.05) than by ultrasonography. However, there was linear positive correlation (r=+0.87) in the measurements by the two techniques. The ultrasonographic characteristics of tubular genitalia revealed different echogenic gray shades around the nonechogenic (black) central area of lumen depending upon the stage of cycle. The ovarian stroma appeared as hyperechoic (white) area with nonechogenic (black) follicle. The corpus luteum (CL) exhibited different echogenic texture viz. grayish black, grayish granular and grayish white at met estrus, mid diestrus and late diestrus, respectively. Therefore, ltrasonography can be effectively employed to record the exact size and echotexture of the buffalo genitalia during different stages of estrous cycle.
This study was initiated in an effort to determine the normal mean and variations of the somatic cell count (SCC) in milk of buffaloes as influenced by the milking time, stage of lactation, parity and season. The buffaloes were hand milked at 13 and 11 h. interval during evening and morning respectively. On the day of milk sampling the udders were tested for mastitis by California Mastitis Test (CMT). Only those buffaloes, which were found negative in the CMT, were included in the sampling plan. The mean values for morning and evening were 1.09 (range 0.39-1.76) and $0.97(range\;0.57-2.46){\times}10^5cells/ml$, respectively which did not differ significantly. When data of the morning and evening values was compared on the basis of total cell secretion in milk, even then there was no statistical difference between the morning and the evening values, thereby suggesting that no diurnal variation existed in SCC of milk. Paritywise differences were not significant between the 1st to 5th lactation and above. Similarly stage of lactation effect, when tested at 30 day intervals, did not differ significantly. Significant (p<0.05) correlation coefficients (r) between SCC and milk yield during different stages of lactation and parity suggested that SCC per ml of milk was higher during the later stages of lactation. SCC was higher in primiparous than in multiparous buffaloes. On an average the SCC recorded was $1.0{\times}10^5cells/ml$ of milk irrespective of time of milking, parity and stages of lactation. The SCC was low during cold and hot-dry season but were high during the hot-humid season (p<0.05), the respective values being 0.76, 1.08 and $1.35{\times}10^5cells/ml$. These values were lower than the SCC already reported in cows suggesting less stressful condition of the udder of buffaloes in this study.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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