Deng, Jian Xin;Li, Mei Jia;Paul, Narayan Chandra;Oo, May Moe;Lee, Hyang Burm;Oh, Sang-Keun;Yu, Seung Hun
Mycobiology
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v.46
no.2
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pp.172-176
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2018
A new species belonging to the genus Alternaria was isolated from the necrotic leaf spots of Brassica rapa subsp. pekinensis in Yuseong district, Daejeon, Korea. It is an occasional isolate, not an etiological agent, which is morphologically similar to A. broccoli-italicae, but differs in conidial size and conidiophore shape. Phylogenetic analysis using the sequence datasets of the internal transcribed spacer (ITS) region of the rDNA, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (gpd), and plasma membrane ATPase genes showed that it is distantly related to A. broccoli-italicae and closely related to Alternaria species in the section Pseudoalternaria, which belonged to a clade basal to the section Infectoriae. Morphologically, the species is unique because it produces solitary conidia or conidial chains (two units), unlike the four members in the section Pseudoalternaria that produce conidia as short branched chains. It exhibits weak pathogenicity in the host plant. This report includes the description and illustration of A. brassicifolii as a new species.
Kim, Yoon-Young;Oh, Sang Heon;Pang, Wenxing;Li, Xiaonan;Ji, Seong-Jin;Son, Eunho;Han, Saehee;Park, Suhyoung;Soh, Eeunhe;Kim, Hoil;Lim, Yong Pyo
Horticultural Science & Technology
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v.35
no.2
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pp.165-169
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2017
We organized the scientific names of Chinese cabbage according to the International Code of Nomenclature for algae, fungi, and plants (ICN) and the International Code of Nomenclature for Cultivated Plants (ICNCP). We found that the subspecies name 'Brassica rapa subsp. pekinensis (Lour.) Rupr.' was suitable as the scientific name for Chinese cabbage, and we classified B. rapa var. glabra Regel. as its synonym. In addition, B. petsai Bailey is an 'unrecorded name' not found in the original description, and therefore is not suitable for use. We conclude that all names based on this name are 'invalid names', and should not be used.
Phenylalanine ammonia-lyase (PAL; EC 4.3.1.5), the first enzyme in the phenylpropanoid biosynthesis, catalyzes the elimination reaction of ammonium ion from L-phenylalanine. PAL was purified from the cytosolic fraction of Chinese cabbage (Brassica campestris ssp. napus var. pekinensis) through ammonium sulfate fractionation, DEAE-cellulose chromatography, Sephadex G-200 chromatography, and Q-Sepharose chromatography. It consists of four identical subunits, the molecular mass of which was estimated to be about 38,000 daltons on SDS-PAGE. The optimal pH and temperature of the purified enzyme are 8~9 and $45^{\circ}C$, respectively. Its activity is greatly inhibited by $Zn^{2+}$ ion, and strongly activated by caffeic acid. The purified PAL has some different characteristics compared to those obtained with other PALs.
Homology-specific transcriptional and post-transcriptional silencing, an intrinsic mechanism of gene regulation in most eukaryotes, can be induced by anti-sense, co-suppression, or hairpin-based double-stranded RNA. Hairpin-based RNA interference (RNAi) has been applied to analyze gene function and genetically modify crops. However, RNAi vector construction usually requires high-cost cloning steps and large amounts of time, or involves methods that are protected by intellectual property rights. We describe a more effective method for generating intron-spliced RNAi constructs. To produce intron-spliced hairpin RNA, an RNAi cassette was ligated with the first intron and splicing sequences of the Brassica rapa ssp. pekinensis histone deacetylase 1 gene. This method requires a single ligation of the PCR-amplified target gene to SpeI-NcoI and SacI-BglII enzyme sites to create a gene-specific silencing construct. We named the resulting binary vector system pKHi and verified its functionality by constructing a vector to silence DIHYDROFLAVONOL 4-REDUCTASE (DFR), transforming it into tobacco plants, and confirming DFR gene-silencing via PCR, RT-qPCR, and analysis of the accumulation of small interfering RNAs. Reduction of anthocyanin biosynthesis was also confirmed by analyzing flower color of the transgenic tobacco plants. This study demonstrates that small interfering RNAs generated through the pKHi vector system can efficiently silence target genes and could be used in developing genetically modified crops.
Kyoung-Taek Park;Soo-Min Hong;Chang-Gi Back;Young-Je Cho;Seung-Yeol Lee;Leonid N. Ten;Hee-Young Jung
Research in Plant Disease
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v.29
no.1
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pp.72-78
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2023
In September 2021, gray-to-brown discoloration and expanding water-soaked lesions were observed on the outer and inner layers and the core of kimchi cabbage (Brassica rapa subsp. pekinensis) in fields located in Samcheok, Gangwondo, Korea. A bacterial strain designated as KNUB-02-21 was isolated from infected cabbage samples. Phylogenetic analysis based on the sequences of the 16S rRNA region and the dnaX, leuS, and recA genes confirmed that the strain was affiliated with Pectobacterium versatile. Additionally, the biochemical and morphological profiles of the isolate were similar to those of P. versatile. Based on these results, the isolate was identified as a novel strain of P. versatile. Healthy kimchi cabbage slices developed soft rot upon inoculation with P. versatile KNUB-02-21 and exhibited symptoms similar to those observed in the diseased plants in fields. The re-isolated strains were similar to those of P. versatile. Prior to our study, P. versatile as the causative pathogen of kimchi cabbage soft rot had not been reported in Korea.
Insertional mutagenesis induced by T-DNA or transposon tagging offers possibilities for analysis of gene function. However, its potential remains limited unless good methods for detecting the target locus are developed. We describe a PCR technique for efficient identification of DNA sequences adjacent to the inserted T-DNA in a higher plant, Chinese cabbage (Brassica rapa ssp. pekinensis). This strategy, which we named variable argument thermal asymmetric interlaced PCR (VA-TAIL PCR), was designed by modifying a single-step annealing-extension PCR by including a touch-up PCR protocol and using long gene-specific primers. Amplification efficiency of this PCR program was significantly increased by employing an autosegment extension method and linked sequence strategy in nested long gene-specific primers. For this technique, arbitrary degenerate (AD) primers specific to B. rapa were designed by analyzing the Integr8 proteome database. These primers showed higher accuracy and utility in the identification of flanking DNA sequences from individual transgenic Chinese cabbages in a large T-DNA inserted population. The VA-TAIL PCR method described in this study allows the identification of DNA regions flanking known DNA fragments. This method has potential biotechnological applications, being highly suitable for identification of target genomic loci in insertional mutagenesis screens.
To develop a selection system for regenerating plants from transformed tissues, effects of four antibiotics (kanamycin, hygromycin, carbenicillin, cefotaxime) and herbicide (phosphinotricin) on shoot regeneration from cotyledon and hypocotyl explants of Chinese cabbage (Brassica campestris L. ssp. pekinensis) were studied. For cotyledon, shoot induction was not significantly affected by kanamycin at $1mg{\cdot}L^{-1}$, but the number of shoots formed was significantly reduced at $2mg{\cdot}L^{-1}$, and no shoots were regenerated from any explants at $6mg{\cdot}L^{-1}$ or higher. Hypocotyl explants showed similar result as cotyledon. Kanamycin at $7mg{\cdot}L^{-1}$ may be adequate for selecting Chinese cabbage transformants. Hygromycin at $4mg{\cdot}L^{-1}$ or higher completely inhibited the growth and shoot regeneration of Chinese cabbage explants. Therefore, resistance gene to hygromycin may also be used as a selective marker for Chinese cabbage transformation. Carbenicillin and cefotaxime, the cephalosporin type of antibiotics, had little effect on shoot regeneration of Chinese cabbage explants. Since carbenicillin and cefotaxime have low toxicity to Chinese cabbage, they are suitable for use in tissue culture to eliminate Agrobacterium in transformation experiments after co-cultivation. Shoot regeneration from cotyledon and hypocotyl explants was significantly reduced in presence of $1mg{\cdot}L^{-1}$ phosphinotricin (PPT) and completely inhibited by $2mg{\cdot}L^{-1}$ or higher. PPT, same as antibiotics, may also be used to select transformed cells. Since Chinese cabbage is known to be recalcitrant to in vitro shoot regeneration compared to other Brassica species, even though lower levels of selectable markers result in more transformants but simultaneously allow more untransformed escapes to develop, lower levels of antibiotics and herbicides could be successfully used as a selectable marker to reduce selection pressure.
Two individuals of intergeneric hybrids in the crossing of Brassica pekinensis ♀$\times$Raphanus sativus ♂ were obtained, and among the three kinds of plants, Brassica, Raphanus, and F1, comparison on the mega- and microsporogenesis, megagammetophyte formation, and morphological changes in the developing sporangia, etc., were made. Differences between Brassica and Raphanus were observed in the shape of mega- and microsporangia, their changes in development, and the formation of megagametophyte. Sporangia of the F1 plants, until pre-meiotic stage, show intermediate, maternal, paternal, or vigorous inclination, and the difference of these characteristics when compared with those of the parent is slight. Meiotic irregularity resulted from the intergeneric hybridity of F1 plant gives rise to the abnormal mega- and microspore and accompanied abortive female and male gametophytes, bringing about the remarkable differences from its parent in the morphological changes of the developing mega- and microsporangia.
We present a highly effective T-DNA inserted gene screening method as part of a reverse genetics model system using the Chinese cabbage (Brassica rapa L. spp. pekinensis). Three-step two-dimensional (2D) matrix strategies are potentially accurate and useful for the identification of specific T-DNA inserted mutants from a large population. To construct our Chinese cabbage model, we utilized a forward genetics screening approach for the abnormal phenotypes that were obtained from transgenic plants of Brassica rapa generated with Agrobacteria tumefaciens containing the pRCV2 vector. From one transgenic plant with an abnormal phenotype, we observed that the st1 gene (which is related to senescence-associated process proteins) contained a T-DNA fragment, and that its expression level was decreased. This T-DNA insert was then used as a control to construct an effective screening pool. As a result, the optimum template concentration was found to be 0.1-1 ng in our PCR strategy. For other conditions, positive changes to the Gibbs free energy prevented the formation of oligo dimers and hairpin loop structures, and autosegment extension gave better results for long fragment amplification. Using this effective reverse genetics screening method, only 23 PCR reactions were necessary to select a target gene from a pool of 100 individual DNAs. Finally, we also confirmed that the sequence we obtained from the above method was identical to the flanking sequence isolated by rescue cloning.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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