The effect of dietary iodine and selenium supplementation, alone or in combination, on peripheral blood lymphocyte function was determined in laying hens. Eight-hundred-and-sixty-four New-Loman laying hens were randomly allotted into 12 dietary treatments with different inclusion levels of iodine (0, 0.1 and 0.2 mg/kg), selenium (0, 0.05, 0.1 and 0.2 mg/kg) or their combinations for 24 weeks. The lipopolysaccharide (LPS) stimulation index, concanavalin A (ConA) stimulation index, peroxide enzyme activity and phagocytosis to neutral red particles were tested. There were significant differences in LPS stimulation index, ConA stimulation index, peroxide enzyme activity and phagocytosis to neutral red particles in different iodine or selenium supplementation levels (p<0.05). The highest iodine and selenium supplementation both resulted in highest LPS-/ConA-stimulation indices (p<0.05). However, when iodine was lower than 0.2 mg/kg, the additional effect of different levels of selenium did not always result in significant differences in these indices. The results indicated that iodine and selenium may affect immunity in laying hens and, when the iodine level in the laying hen is lower than 0.2 mg/kg, a selenium allowance higher than 0.1 mg/kg may be necessary to improve immunity.
The effect of captopril on the lung angiotensin converting enzyme (ACE) was investigated after 3 weeks oral administration (120~160 mg/kg/day) through drinking water in SpragueDawley rats. On the $^{125}$I-351A, an ACE inhibitor, binding assay in the isolated perpused lungs, the number of ACE molecules at the intrapulmonary endothelial cell surface was significantly decreased (p<0.001), and recovered to the normal level 7 days after discontinuation of captopril treatment. Intrapulmonary conversion ratio of Al to All was also significantly decreased (p<0.05) in the isolated perpused lungs. Bolus intravenous injection of angiotensin I did not showed pressor response in the both of systemic and pulmonary blood pressure of the anesthetized rats. ACE activity of the lung homogenates was also significantly reduced. These data consistently indicate the decrease of functionally active ACE molecule at the pulmonary artery after chronic captopril treatment. However, serum ACE activity was increased three fold in captopril treated rats compared to the normal rats. So, these results suggest that the functionally active ACE molecule at the pulmonary artery was still inhibited, which is directly associated with the antihypertensive effects, even if the total angiotensn converting enzyme induction was resulted after chronic captopril treatment.
The present study was undertaken to investigate an effect of ginseng butanol fraction(total saponin) on the hepatic ethanol metabolism, we used experimental animals for the subject of study. When, in case of ADH and MEOS, ginseng butanol fraction was added, enzyme activity was increased in a small dose, and on the contrary, in a large dose, showed inhibitory effect. in catalase, the activity showed no significant effect by adding ginseng butanol fraction. In the light of kinetic aspect, when, in reaction mixture, ethanol and ginseng butanol fraction were concurrently added and reacted, Km value of ADH and MEOS was decreased. After pretreated with ginseng butanol fraction and inducement of acute toxic state by ethanol, the activities of ADH and MEOS were increased to an extent of about 25% compared to controls. But catalase activity was not significantly affected. In case that ginseng butanol fraction was given to mice fed with 5% ethanol instead of water for 60 days, the activities of ADH and MEOS were increased about 20% to 50% compared to ethanol-treated group. On the contrary, catalase activity was not affected. But blood concentrations of ethanol were decreased due to ginseng butanol fraction treatment. All these observations suggested that reduction of ethanol blood concentration should be dependent upon increased activities of ADH and MEOS. Thereby it suggests the recovery from alcohol intoxication can be prompted by treatment with ginseng.
To elucidate the relationship among body mass index, nutrient intake and blood antioxidant capacity in the postmenopausal period, 60 women residing in Iksan area were recruited. Body mass index (BMI) was calculated base on height and weight, and food and nutrient intakes were estimated by 24-hour recalls of 3 non-consecutive days. Parameters of antioxidant capacity including the activities of superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx), catalase (CAT) and total antioxidant capacity (TA) were measured in fasting blood samples from the subjects. The average age, height, weight and BMI of the subjects were 65 years, 151.1cm, 59.5 kg and 26.0 m/kg$^2$, respectively. The macronutrient intake rate of carbohydrate : protein : fat were 65:17.5:17.5; the mean intakes of energy and protein were 1532.7 kcal (86.3% of RDA) and 67.1 g (122.0% of RDA) respectively. The mean intakes of phosphorus, vitamin A, niacin and vitamin C were higher than Recommended Daily Allowance (RDA) for Koreans. On the other hand, calcium and riboflavin intakes were only 84.6% and 70.4% of RDA. Among the parameters of antioxidant capacity, SOD activity was significantly lower in lean subjects (BMI<20) than in the normal or overweight subjects (BMI${\geq}$20) (p<0.05). TAs of the subjects with the highest intakes of vegetables and fruits were significantly higher than those of subjects with lower intakes (p<0.05). Antioxidant capacity was compared among subjects according to 3 different nutrient intake levels according percentage of RDA for Koreans for selected nutrients with the following results: The high protein and niacin groups exhibited significantly lower TA status than those of the other intake groups (p<0.05). In conclusion, the low BMI was associated with lower SOD activity in postmenopausal women. Higher consumption of fruits and vegetables was associated with higher TA. When protein and niacin intakes were excessive, SOD activity and TA tended to be low. SOD and TA, among antioxidant indexes, seemed to be mostly influenced by other factors. Therefore, more studies on the effects of nutritional intake and the activity of antioxidant enzyme should be conducted.
본 연구의 목적은 5% 녹두(Phaseolus aureus L.)의 급여가 고지혈증 유발 Sprague-Dawley(SD)계 흰쥐의 혈청 blood urea nitrogen(BUN), creatinine 및 요산(uric acid)의 농도와 aspartate aminotransferase(AST), alanine aminotransferase(ALT), alkaline phosphatase(ALP), lactate dehydrogenase(LDH), amylase, lipase 및 catalase 활성에 미치는 영향을 규명하고자 시행하였다. 연구결과 녹두는 고지혈증으로 유발된 흰쥐의 혈청 BUN, creatinine, 요산 농도 및 AST, ALT, ALP, LDH, amylase, lipase의 활성 감소와 catalase 활성을 증가시키는 것으로 나타났다. 따라서 녹두는 신장과 간 등의 기능 개선과 예방에 효과적일 것으로 판단되어 기능성 소재로서의 이용 가능성이 있을 것으로 기대된다.
흑두청국으로부터 분리된 혈전용해력이 우수한 Bacillus subtilis BB-1(KFCC 11344P)으로부터 혈전용해효소 유전자를 PCR법에 의해 크로닝하였고 이를 BCF-1으로 명명하였다. BCF-1의 DNA 염기서열결정 결과 1,145 bp 크기의 혈전용해 효소로, 일본의 natto로부터 분리된 nattokinase 유전자와 99%의 상동성을 보임을 확인하였다. 혈전용해효소 유전자의 발현을 위하여 Bacillus 발현계인 Bacillus-E. coli의 shuttle vector인 pEB vector에 크로닝 하고 host로서 B. subtilis 168에 형질전환시켜 대량 발현시켰다. 생산된 혈전용해효소의 최 적활성 pH와 온도는 7.0과 $35^{\circ}C$로 확인되었다, 기질에 대한 분해양상을 조사한 결과 fibrin에서만 특이적으로 강한 분해가 일어났으며, skim milk에서 아주 약한 분해능을 보였으나 blood agar, gelatin, casein에서는 전혀 분해능을 보이지 않았다. 특히 blood agar plate에서 분해능이 없는 것으로 보아 혈액 내에서의 적혈구 파괴현상과 같은 부작용에 대한 위험을 배제할 수 있을 것으로 사료된다. BCF-1에 의해 생산된 혈전용해효소는 fibrin 특이적으로 활성을 나타냄을 확인할 수 있으며, 이는 임상적이나 산업적으로 적용하였을 때 부작용에 대한 위험적인 문제는 배제될 수 있으리라 생각된다.
To investigate the ultrastructural changes of kidney and clarify to a cause of its changes in lead intoxicated rats, the 0.5% lead acetate administed orally to the rats and those were sacrifled at 2 day, 1, 2, 4, 6 and 8 week after the treatment of lead acetate. Each extirpated kidney was histopathologically examined under the electron microscopy and histochemical examination was also carried out. Concomitantly, the activity of free radical metabolizing enzyme was determined. The blood levels of lead concentration showed a gradual increase from the first group reaching the plateau at the one or two week group with the slightly decreasing value throughout the whole course of the experiment. And the urinary ALA concentration showed a gradual increase from the first group to the 8 week group. In the kidney tissue of rat sacrified at 6 week, the proximal tubular cells showed dilatation of endoplasmic reticulum, mitochondrial swelling, increased numbers of secondary lysosomes and myelin figure-like residual bodies on electron microscope and oxygen free radicals are identified by histochemistry on light microscope whereas there were no differences in the activity of catalase and glutathione peroxidase between the lead acetate treated group and control group. But the activity of xanthine oxidase was more increased in lead acetate treated rats than control group. Furthermore, the superoxide dismutase activity was significantly increased in the experimental group than the control group. In conclusion, it is assumed the kidney damage in lead intoxicated rat may be induced by free radicals.
The role of vascular NAD(P)H oxidase in subarachnoid hemorrhage (SAH)-induced vasospasm in the basilar artery was examined in a rat model. Arterial vasospasm characterized by increased wall thickness and decreased lumen size was observed at 5 to 7 days after $2^{nd}$ injection of blood into cisterna magna, and these changes were significantly ameliorated by pretreatment of diphenyleneiodonium $(DPI,\;25\;{\mu}l\;of\;100\;{\mu}M),$ an inhibitor of NAD(P)H oxidase. To determine the time course of changes in the vascular NAD(P)H oxidase activity, cerebral vasculature was isolated at different time intervals from 12 hrs to 14 days after injection of autologous blood. At 24 hrs after the second injection of blood, the NAD(P)H oxidase activity was markedly increased with an enhanced membrane translocation of p47phox, but by 48 hours both the enzyme activity and p47phox translocation regained normal values, and were remained unchanged up to 14 days after SAH. However, no significant changes in the expression of p22phox mRNA was observed throughout the experiments. These findings suggest that the activation of NAD(P)H oxidase by which assembly of the oxidase components enhanced and subsequent production of superoxide in the early stages of SAH might contribute to the delayed cerebral vasospasm in SAH rats.
Effects on thrombin by an amphipathic cation, dequalinium, which has been recognized as an anticarcinoma agent were investigated with small chromogenic substrates such as Na-benzoyl-DL-argininep-nitroanilide (BApNA), H-D-phenylalanyl-L-pipecoyl-L-arginine-p-nitroanilide (S-2238), and Na-p-tosyl-L-arginine methyl ester (TAME). Among them, only TAME hydrolysis due to an esterase activity of the enzyme was significantly activated to 81% at 20 ${\mu}M$ dequalinium in the absence of NaCl. This stimulation became even higher in the presence of 0.2 M NaCl to 3.5-fold at 60 ${\mu}M$ dequalinium. This specific activation of thrombin was well correlated with the results of in vitro coagulation tests measuring the activated partial thromboplastin time (APTT) and the prothrombin time (PT) It is pertinent. therefore, to suggest that the esterase activity should be examined in addition to the effects on 5-2238 hydrolysis when especially any regulators not directed to an active site of thrombin need to be studied. We also expect that dequalinium could be a useful tool for studying structure-function relationship of thrombin and blood coagulation.
A membrane-bound phosphatidylinositol 4-kinase (PI 4-kinase) was separated in a sucrose gradient and solubilized with 1% Triton X-100 from mouse brain. The enzyme was purified 2,952-fold by various chromatographic techniques including DEAE-cellulose, PI-Sepharose and Sephacryl S-200 gel filtration. The molecular weight of PI 4-kinase was approximately 76 kDa by gel filtration and 70.8 kDa by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The purified enzyme exhibited specific activity of 11.2 nmol/min/mg protein and pi value of 4.7. Kinetic analysis of the PI 4-kinase indicated apparent $K_m$, values of 190 ${\mu}M$ and 120 ${\mu}M$ for phosphatidylinositol and ATP, respectively. The maximal activity of this purified enzyme was observed at pH 7.4 at an incubation temperature of $37^{\circ}C$. The enzyme activity was significantly activated by $Mg^{2+}$, $Mn^{2+}$ and $Fe^{2+}$, and inhibited severely by $Ca^{2+}$. PI 4-kinase was proved to be pure in its immunoblot test by polyclonal antibody prepared from immunized rabbit sera. By this test, we were able to detect the existence of the same type of PI 4-kinase from other mouse organ tissues, such as liver, heart, kidney and spleen. Furthermore, similar immunoblot analysis with the same antisera recognized the different epitopes of PI 4-kinase proteins from various organs of rabbit, chinese hamster and rat.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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