• 제목/요약/키워드: Blocker process

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Effect of Various Divalent Ions on the Calcium Current of Adrenal Medullary Chromaffin Cells in the Rat

  • Kim, Jun;Leem, Chae-Hun;Kim, Sang-Jeong
    • The Korean Journal of Physiology
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    • 제26권2호
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    • pp.113-122
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    • 1992
  • It is well known that chromaffin cells of adrenal medulla secrete catecholamine in response to sympathetic nerve activation and the influx of $Ca^{2+}$ through the voltage dependent $Ca^{2+}$ channels (VDCC) in the cell membrane do a major role in this secretory process. In this study, we explored the effect of divalent cations on VDCC of rat chromaffin cells. Rat (Sprague-Dawley rat, 150-250 gm) chromaffin cells were isolated and cultured. Standard giga seal, whole cell recording techniques were employed to study $Ca^{2+}$ current with external and internal solutions that could effectively isolate VDCC currents $(NMG\;in\;external\;and\;TEA\;and\;Cs^{2+}\;in\;internal\;solution)$. The voltage dependence and the inactivation time course of VDCC in our cells were identical to those of bovine chromaffin cells. A persistent inward current was first activated by depolarizing step pulse from the holding potential (H.P.) of -80 mV to -40 mV, increased to maximum amplitude at around +10 mV, and became smaller with progressively higher depolarizing pulses to reverse at around +60 mV. The inactivation time constant $(\tau)$, fitted from the long duration test potential (2 sec) was $1295.2{\pm}126.8$ msec $(n=20,\;1\;day\;of\;culture,\;mean\;{\pm}S.E.M.)$ and the kinetic parameters were not altered along the culture duration. Nicardipine $(10\;{\mu}M)$ blocked the current almost completely. Among treated divalent cations such as $Cd^{2+},\;Co^{2+},\;Ni^{2+},\;Zn^{2+}\;and\;,Mn^{2+},\;Cd^{2+}$ was the most potent blocker on VDCC. When the depolarizing step pulse from -80 mV to 10 mV was applied, the equilibrium dissociation constant $(K_d)$ of $Cd^{2+}\;was\;39\;{\mu}M,\;K_d\;of\;Co^{2+}\;was\;100\;{\mu}M\;and\;K_d\;of\;Ni^{2+}];was];780{\mu}M.$ The principal findings of this study are as follows. First, the majority of $Ca^{2+}$ channels in rat chromaffin cells are well classified to L-type $Ca^{2+}$ channel in the view of kinetics and pharmacology. Second, all divalent cations tested could block the $Ca^{2+}$ current and the most potent blocker among the tested was $Cd^{2+}$.

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Intracellular Mechanisms of Growth Hormone Action on Apoptosis in Cultured Porcine Ovarian Granulosa Cells

  • Sirotkin, A.V.;Makarevich, A.V.;Pivko, J.;Genieser, H.G.
    • Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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    • 제15권7호
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    • pp.1045-1050
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    • 2002
  • The aims of this study were to detect spontaneously occurring apoptosis in cultured porcine ovarian cells, to examine the role of growth hormone (GH), tyrosine kinase (TK), protein kinase G (PKG) and cyclin-dependent kinase (CDK) in the control of this process, and to determine whether the effect of GH on apoptosis is mediated by TK-, PKG- and cdc2-dependent intracellular mechanisms. We studied the action of pGH (10 ng/ml), blockers of TK (genistein, lavendustin, both 100 ng/ml), PKG (Rp-Br-PET-cGMPS, 50 nM; KT5823, 100 ng/ml) and CDK (olomoucine, $1{\mu}g/ml$), as well as combinations of GH with these blockers, on the onset of apoptosis in cultured granulosa cells isolated from antral (3-6 mm) porcine follicles. The functional characteristics of an early apoptotic event, DNA fragmentation, were determined using terminal deoxynucleotidyltransferase (TdT)-mediated dUTP nick end labelling (TUNEL), whilst morphological signs of advanced apoptosis such as pyknosis, chromatin marginalization, shrinkage and fragmentation of nucleus, were detected using routine light microscopy. After culture, some ovarian granulosa cells exhibited DNA fragmentation, which in some cases was associated with morphological apoptosis-related changes (pyknosis, shrinkage and fragmentation of the nucleus). GH significantly reduced the proportion of TUNEL-positive cells. Neither TK nor CDK blockers when given alone, significantly affected the percentage of TUNEL-positive cells although both PKG blockers significantly increased this index. Furthermore, TK and PKG blockers given together with GH, prevented or reversed the inhibitory effect of GH on apoptosis, whilst the CDK blocker olomoucine promoted it. These observations demonstrate apoptosis in porcine ovaries and suggest the involvement of GH, TK, PKG and CDK in the control of this process. They also suggest that the effect of GH on ovarian apoptosis is mediated or regulated by multiple signalling pathways including TK-, PKG- and CDK-dependent intracellular mechanisms.

흰쥐 해마에서 Norepinephrine 유리를 조절하는 $A_1-adenosine$ 수용체의 역할에 미치는 $K^+$ 통로 차단제의 영향 (Effect of $K^+-channel$ Blockers on the $A_1-adenosine$ Receptor-Coupled Regulation of Electrically-Evoked Norepinephrine Release in the Rat Hippocampus)

  • 최봉규;김상훈
    • 대한약리학회지
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    • 제32권3호
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    • pp.301-309
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    • 1996
  • 흰쥐 해마(hippocampus)에서 norepinephrine(NE) 유리에 미치는 $A_{1}-adenosine$ 수용체의 post-receptor 기전에 $K^+$-통로가 관여하는지에 대한 지견을 얻고자 하여 $^3H-NE$로 평형시킨 해마 절편을 사용하여 adenosine의 $^3H-NE$ 유리에 미치는 $K^+$-통로 차단제의 영향을 관찰하였다. Adenosine$(1{\sim}30{\mu}M)$은 전기자극(3 Hz, 2 ms, 5 $VCm^{-1}$, 구형파)에 의한 NE 유리를 용량 의존적으로 감소시켰다. $K^+$-통로 차단제의 하나인 4-aminopyridine(4AP, $1{\sim}30{\mu}M$)은 자극에 의한 NE 유리를 용량 의존적으로 증가시켰으며 특히 10 및 $30{\mu}M$의 투여에 의해 기저 유리 또한 증가시켰다. 또 다른 $K^+$-통로 차단제인 tetraethylammonium(TEA, $1{\sim}10mM$) 역시 자극에 의한 NE 유리를 용량 의존적으로 증가시켰으나 이때 기저 유리에는 변화를 보이지 않았다. $K^+$-통로 차단제의 adenosine 효과에 미치는 실험에서는 adenosine에 의한 NE 유리 감소효과가 4AP $3{\mu}M$ 동시 투여에 의해 억제되었으며, 또한 1 mM TEA에 의하여는 영향을 받지않았으나 3 mM TEA 동시 투여에 의하여는 억제됨을 볼 수 있었다. 한편 $30\;{\mu}M$ 4AP 에 의한 NE 유리 증가효과는 $Ca^{++}$ 제거 영양액에서는 완전히 소실되었고 영양액 내의 $Ca^{++}$을 정상 농도의 1/4로 하였을때에는 NE 유리 억제가 어느정도 회복됨을 볼 수 있었으며 이때 기저 유리 또한 증가됨을 볼 수 있었다. l/4 $Ca^{++}$ 농도시에 4AP의 NE유리에 미치는 효과는 영양액내의 $Mg^{++}$을 4mM로 올렸을때 크게 억제되었으며 $0.3\;{\mu}M$ tetrodotoxin(TTX) 동시 투여에 의해 완전히 차단됨을 볼 수 있었다. TEA 10mM에 의한 NE 유리 증가효과 역시 $Ca^{++}$ 제거 영양액에서 완전히 소실되었고 이 또한 1/4 $Ca^{++}$ 영양액에 의하여는 회복됨을 볼 수 있었으며 $Mg^{++}$ 증가 영양액에서는 억제, TTX 동시 투여시에는 완전히 소실되었다. 이상의 실험결과로 흰쥐 해마에서 $A_1-adenosine$ 수용체를 통한 adenosine의 NE 유리 감소는 TEA 및 4AP에 예민한 $K^+$-통로가 관여하고 여기에는 세포외액의 Ca^{++}의 농도가 중요한 인자의 하나로 관여 하는 것으로 사료된다.

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무 (Raphanus sativus L.) 자엽에서 산화질소 (Nitric oxide)에 의해 유도된 부정근 형성과정에 대한 칼슘의 효과 (Effects of Calcium on Nitric oxide (NO)-induced Adventitious Rooting Process in Radish (Raphanus sativus L.) Cotyledons)

  • 진창덕
    • Journal of Plant Biotechnology
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    • 제34권3호
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    • pp.213-221
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    • 2007
  • 분리된 무 자엽 조직에 산화질소 (nitric oxide: NO) 공여체인 sodium nitroprusside (SNP) 처리 시 농도 의존방식으로 부정근의 발달을 증진시켰다. 그러나 이러한 NO 증진 효과는 세포외 칼슘 chelator인 0.5 mM EGTA 또는 세포막 칼슘채널 차단제인 0.1 mM $LaCl_3$를 각각 $50\;{\mu}M$ SNP와 함께 혼합처리 시 반전되었다. 또한, 뿌리 발생에서 중심적 역할을 수행하는 것으로 알려진 guaiacol peroxidase (GPX)와 syringaldazine peroxidase (SPX)의 활성도가 SNP 단독 처리된 자엽에서 부정근이 형성되는 동안 현저히 증가하였다. 그러나, SNP와 $LaCl_3$ 혼합처리 시 SNP에 의해 유도된 GPX와 SPX 활성도 증가가 거의 증류수 대조구 수준으로 억제되었다. calmodulin의 anatagonist인 trifuoperazine 역시 SNP로 처리된 자엽에서 부정근 형성을 억제하여 발생된 뿌리의 개수와 길이를 감소시켰으며 동시에 GPX와 SPX를 불활성화 하였다. 결론적으로, 이들 결과는 칼슘이 GPX와 SPX 활성도 조절을 통해 부정근 유도를 이끄는 NO 반응에 포함되어 있음을 나타내는 것이다.

초산납이 흰쥐 synaptosome의 [$^3$H]-serotonin의 흡수에 미치는 영향 (Effects of Lead Acetate on the Uptake of [$^3$H]-serotonin by the Synaptosomes Separated from the Cerebrum and Brain Stem of the Rat)

  • 이규석;박순철
    • 환경생물
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    • 제18권2호
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    • pp.255-262
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    • 2000
  • Synaptosome에 의한 [$^3$H]-serotonin의 일반적인 흡수특성과 이 과정에 납이 미치는 영향을 in vitro와 in vitro에서 관찰하였다. 흰쥐의 대뇌와 뇌간에서 각각 분리한 synaptosome의 흡수친화력은 대뇌가 Km=0.5$\mu$M, 뇌간이 Km=0.1$\mu$M로 모두 고친화성 흡수였고 뇌간에서 더 높았다. 또한 이 흡수과정에 sodium과 potassium이온이 영향을 미치는 것으로 나타났다. Synaptosome이 [$^3$H]-serotonin을 흡수하는 과정은 납에 의해 억제되었고 이러한 납의 독성영향은 in vitro와 in vitro에서 유사한 결과를 보였다.

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소프트웨어를 이용한 이동식 저장매체 이미지 수집 절차 (Process of Collection for a Removable Storage Device Image Using a Software)

  • 백현우;전상준;이상진
    • 정보처리학회논문지:컴퓨터 및 통신 시스템
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    • 제6권1호
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    • pp.17-24
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    • 2017
  • 이동식 저장매체가 널리 보급됨에 따라 중요한 정보가 이동식 저장매체에 보관되는 경우가 많아지고 있다. 따라서 핵심적인 범죄 증거 역시 이동식 저장 매체에 존재할 가능성이 커지고 있으며 압수 수색 현장에서 이동식 저장 매체는 반드시 수집해야 할 대상이 되었다. 이동식 저장매체를 증거물로 획득한 경우 하드웨어 기반의 이미징 장비나 쓰기방지장치를 동반한 포렌식 소프트웨어를 통해 이미징 작업을 진행한다. 하지만 이런 장비의 경우 고가일 뿐만 아니라 현장에서 고장으로 인해 급하게 사용할 수 없는 경우를 배제할 수 없다. 또한 실험을 통해 확인한 결과 보안 USB 혹은 백신 USB의 경우 하드웨어 기반의 이미징 장비나 쓰기방지장치에서 인식을 할 수 없는 경우를 발견하였다. 따라서 본 논문에서는 현재의 이동식 저장매체에 맞는 디지털 증거 수집절차를 제안한다.

4-염화페닐 아세트산을 이용한 염산 아젤라스틴의 합성 (Synthesis of Azelastine.HCl from 4-Chlorophenyl Acetic Acid)

  • 지현;정노희
    • 한국응용과학기술학회지
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    • 제29권3호
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    • pp.429-434
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    • 2012
  • 본 연구에서는 H1-길항체로 알려진 항히스타민제의 일종인 염산 아젤라스틴을 합성하기 위하여 phthalic anhydride, 4-chlorophenylacetic acid, hydrazine 2HCl를 이용하여 4단계 반응을 거쳐 합성하였다. 첫 번째 반응은 카르복실기와 히드록실기가 제거되는 반응이고, 두 번째 반응은 3-(4-chlorobenzylidene)phthalide의 비누화 반응이다. 세 번째 반응은 일차아민의 친핵성 첨가반응이 일어나는 반응이며, 네 번째 반응은 N-methyl-1-aza-bicyclo[3,2,0]heptane에 세 번째 반응의 생성물을 첨가하여 반응시키면 4-(4-chlorobenzyl)-1-(2H)phthalazinone가 합성되는 반응이다. 합성한 생성물을 FT-IR, $^1H$-NMR을 이용하여 분석하였고, 80%의 수율로 합성물을 얻었다.

도핵승기탕(桃核承氣湯) 자궁경부암세포(子宮經部癌細胞)(HeLa cell)의 apoptosis에 미치는 영향(影響) (Dohaekseungkitang extract induced apoptosis in Human Cervical carcinoma HeLa cells)

  • 강용구;안규환;공복철;김송백;조한백
    • 대한한방부인과학회지
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    • 제19권2호
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    • pp.77-91
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    • 2006
  • Purpose : To address the ability of Dohaekseungkitang (DST: a commonly used herb formulation in Korea, Japan and China to have anti-cancer effect on cervical carcinoma), we investigated the effects of DST on programmed cell death (apoptosis) in HeLa human cervical carcinoma cells. Methods : We cultured HeLa cell which is human metrocarcinoma cell in D-MEM included 10% fetal bovine serum(Hyclone Laboratories) below $37^{\circ}C$, 5% CO2. Then we observed apoptosis of log phage cell which is changed cultivation liquid 24 Hours periodically. Results : After the treatment of DST for 48 hours, apoptosis occurred in a dose-dependent manner. In this study, we have shown that DST induces calpain and the associated caspase-8 and -9 activations. Apoptosis was prevented by pre-incubation of the cells with the calcium cHeLator-BAPTA-AM, calcium channel blocker-Nif edipine or Ryonidine agonist-Ryonidine peptide, implicating calcium in the apoptotic process. Ubiquitous calpains (mu- and m-calpain) have been repeatedly implicated in apoptosis, especially in calcium-related apoptosis. However this study showed 1hat either calpain inhibitor-calpastin or caspase-3 inhibitor-DEVD- did not blocked the herb formulation-induced apoptosis in HeLa human cervical carcinoma cells. D ST initiates a cell death pathway that is partially dependent of caspases. DST-induced apoptosis requires caspase-independent mechanism. Conclusion : We conclude that DST-induced calpain activation triggers the intrinsic apoptotic pathway in which caspase-independent mechanism is also involved.

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흰쥐 해마에서 Acetylcholine 유리에 관여하는 Adenosine Receptor의 Post-Receptor 기전에 관한 연구 (A Study on the Post-Receptor Mechanism of Adenosine Receptor on Acetylcholine Release in the Rat Hippocampus)

  • 최봉규;오재희
    • 대한약리학회지
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    • 제30권3호
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    • pp.263-272
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    • 1994
  • 흰쥐 해마(hippocampus)에서 acetylcholine (ACh) 유리에 미치는 $A_{1}-adenosine$ 수용체의 post-receptor 기전에 관한 지견을 얻고자 하여 $^3H-choline$으로 평형시킨 해마 slice를 사용하여 $^3H-ACh$ 유리에 미치는 여러가지 약물들의 영향을 관찰하였다. Adenosine $(0.3{\sim}300\;{\mu}M)$은 전기자극(3Hz, 2 ms, 5 $VCm^{-1}$, 구형파)에 의한 ACh 유리를 용량 의존적으로 감소 시켰으며, 이러한 효과는 $A_1-adenosine$ 수용체의 선택적 차단제인 8-cyclopentyl-1, 3-dipropylxanthine $(2\;{\mu}M)$에 의해 차단됨을 볼 수 있었다. G-단백 억제제인 N-ethylmaleimide (NEM, 10과 $30\;{\mu}M$)는 그 자체에 의하여 자극유발성 ACh 유리를 증가시켰으며, adenosine의 효과는 NEM 전처리에 의하여 완전히 소실되었다. Protein kinase C 활성화제인 $4{\beta}-phorbol$ 12, 13-dibutyrate (PDB, $1{\sim}10\;{\mu}M$)는 ACh 유리 증가를 일으켰으며 억제제인 polymyxin B (PMB, $0.03{\sim}1\;mg$)는 감소를 일으켰으나, adenosine에 의한 ACh 유리 감소효과는 PDB 및 PMB에 의해 영향을 받지 않았다. $Ca^{++}$-통로 차단제인 nifedipine $(1\;{\mu}M)$은 adenosine의 효과를 길항함을 볼 수 있었으나 $K{^+}$-통로 차단제인 glibenclamide는 adenosine의 효과에 영향을 미치지 못하였다. 8-Bromo-cAMP (100과 $300{\mu}M$) 그 자체로는 ACh 유리에 별다른 영향을 미치치 못하였으나 $300\;{\mu}M$ 8-bromo-cAMP 전처리에 의하여 $30\;{\mu}M\;adenosine$의 효과가 억제됨을 볼 수 있었다. 이상의 실험결과로 흰쥐 해마에서 $A_1-adenosine$ 수용체를 통한 adenosine의 ACh유리 감소는 G-단백에 의존적이며, 이러한 효과에 nifedipine에 예민한 $Ca^{++}$-통로와 adenylate cyclase계가 일부 관여함은 확실하나 proteinkinase C 및 glibenclamide에 예민한 $K{^+}$통로는 관여하지 않는 것으로 사료된다.

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흰쥐 해마에서 Norepinephrine 유리에 미치는 Adenosine Receptor의 Post-Receptor 기전에 관한 연구 (A Study on the Post-Receptor Mechanism of Adenosine Receptor on Norepinephrine Release in the Rat Hippocampus)

  • 최봉규;김도경;양경무
    • 대한약리학회지
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    • 제32권1호
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    • pp.1-11
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    • 1996
  • 흰쥐 해마(hippocampus)에서 norepinephrine(NE) 유리에 미치는 $A_1-adenosine$ 수용체의 post-receptor 기전에 관한 지견을 얻고자 하여 $^3H-norepinephrine$으로 평형시킨 해마 절편을 사용하여 adenosine의 $^3H-NE$ 유리에 미치는 여러가지 약물의 영향을 관찰하였다. Adenosine($1{\sim}30{\mu}M$)은 전기자극(3 Hz, 2 ms, 5 Vcm-1, 구형파)에 의한 NE 유리를 용량 의존적으로 감소시켰고, 이 효과는 선택적인 $A_1-adenosine$ 수용체 차단제인 $8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine(2{\mu}M)$에 의해 차단되었다. G-단백 억제제인 N-ethylmaleimide(NEM, 10과 $30{\mu}M$)는 그 자체로써 전기자극으로 유발시킨 NE 유리를 증가시켰으며, adenosine의 NE 유리 억제효과는 NEM 전처리에 의하여 완전히 소실되었다. Protein kinase C 활성화제인 $4{\beta}-phorbol$ 12,13-dibutyrate(PDB, $1{\mu}M$)는 NE 유리 증가를 일으켰고, 이 효소 억제제인 $4{\beta}-polymyxin$ B(PMB, 0.1 mg)는 NE 유리감소를 일으켰으며, adenosine에 의한 NE 유리 감소효과는 PDB에 의해 억제되었고, PMB 전처리하에서는 감소효과가 출현하지 않았다. $Ca^{2+}$-통로 차단제인 $nifedipine(1{\mu}M$)은 adenosine의 NE 유리 억제효과에 영향을 미치지 못하고, ATP에 의존적인 $K^+-$통로 차단제인 glibenclamide역시 adenosine의 NE 유리 억제효과에 영향을 미치지 못하였다. 그러나 delayed rectifier $K^+-$통로 차단제인 tetraethylammonium(TEA, 3 mM)은 그 자체로 NE 유리를 증가 시켰으며, adenosine의 NE 유리 억제효과를 차단함을 볼 수 있었다. 8-bromo-cAMP(100과 $300{\mu}M$) 그 자체로는 NE 유리에 별다른 영향을 미치지 못하였으나 8-bromo-cAMP 전처리에 의하여 adenosine의 NE 유리 억제효과가 억제됨을 볼 수 있었다. 이상의 실험결과로 흰쥐 해마에서 $A_1-adenosine$ 수용체를 통한 adenosine의 NE 유리 감소는 G-단백에 의존적이며, 이러한 효과에 protein kinase C, TEA에 예민한 $K^+-$통로 및 adenylate cyclase계가 복합적으로 관여하고 nifedipine에 예민한 $Ca^{2+}-$통로와 glibenclamide에 예민한 $K^+-$통로는 관여하지 않는 것으로 사료된다.

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