Background: Peroxidases (Prx) of the peroxiredoxin family reduce hydrogen peroxide and alkyl hydroperoxides to water and alcohol respectively. Hydrogen peroxide is implicated as an intracellular messenger in various cellular responses such as proliferation and differentiation. And Prx I activity is regulated by Cdc-2 mediated phosphorylation. This work was undertaken to investigate the proliferation role of peroxiredoxin III as a member of Prx family in Prx III overexpressed HeLa cell line. Methods: To provide further evidence of proliferation, we selected Prx III stably expressed HeLa Tet-off cell lines. Cell proliferation was examined by using proliferation reagent WST-1 in the presence or absence of doxycycline. Prx III, 2-cys Prx enzymes exist as homodimer. The activation of Prx III heterodimer with induced and endogenous Prx III was examined by immunoprecipitation. Results: Immunoprecipitation analysis of the induced and endogenous Prx III with anti-myc showed that the induced wild type (WT) and dominant negative (DN) Prx III from HeLa Prx III Tet-off stable cell heterodimerized with endogenous Prx III each other. And the expression level of induced Prx III was examined after addition of doxycycline. By 72 hr, the expression level of induced Prx III was diminished gradually and the half-life of the induced wild type Prx III was approximately 17 hr. The proliferation experiment demonstrated that the relative proliferation value of induced and endogenous WT Prx III stable cell has no changes but the DN Prx III induced HeLa Tet-off stable cells were lower than endogenous Prx III. Conclusion: In conclusion, the HeLa dominant negative Prx III Tet-off stable cells were decreased the proliferation.
Thi, Van Anh Do;Jeon, Hyung Min;Park, Sang Min;Lee, Hayyoung;Kim, Young Sang
Molecules and Cells
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v.42
no.12
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pp.869-883
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2019
Interleukin (IL)-15 is an essential immune-modulator with high potential for use in cancer treatment. Natural IL-15 has a low biological potency because of its short half-life and difficulties in mass-production. IL-15Rα, a member of the IL-15 receptor complex, is famous for its high affinity to IL-15 and its ability to lengthen the half-life of IL-15. We have double-transfected IL-15 and its truncated receptor IL-15Rα into CT26 colon cancer cells to target them for intracellular assembly. The secreted IL-15:IL-15Rα complexes were confirmed in ELISA and Co-IP experiments. IL-15:IL-15Rα secreting clones showed a higher anti-tumor effect than IL-15 secreting clones. Furthermore, we also evaluated the vaccine and therapeutic efficacy of the whole cancer-cell vaccine using mitomycin C (MMC)-treated IL-15:IL-15Rα secreting CT26 clones. Three sets of experiments were evaluated; (1) therapeutics, (2) vaccination, and (3) long-term protection. Wild-type CT26-bearing mice treated with a single dose of MMC-inactivated secreted IL-15:IL-15Rα clones prolonged survival compared to the control group. Survival of MMC-inactivated IL-15:IL-15Rα clone-vaccinated mice (without any further adjuvant) exceeded up to 100%. This protection effect even lasted for at least three months after the immunization. Secreted IL-15:IL-15Rα clones challenging trigger anti-tumor response via CD4+ T, CD8+ T, and natural killer (NK) cell-dependent cytotoxicity. Our result suggested that cell-based vaccine secreting IL-15:IL-15Rα, may offer the new tools for immunotherapy to treat cancer.
Sit to stand(STS) movement is one of the most common activity in daily life. In addition, Korean traditionally stand up from various sitting heights in one's daily life compared to other foreigners. As Korea enter rapidly to the aging society, needs of the elderly's independent life are increasing. Therefore the importance of research about the analysis of elderly's activity in daily life is rapidly increasing. In this study, we analyzed joint movements and changes of muscle length during STS(sit-to-stand) at various sitting heights(table seat, bath seat, bottom) in the Korean elderly's daily life by using the motion analysis and musculoskeletal modeling. Ten Korean elderly and young were participated in this experiment. Three heights of sitting posture which could represent typical sitting in Korean daily life were chosen as table seat(42cm), bath seat(21cm) and bottom(0cm). As the results, the elderly showed both smaller knee/hip flexion and larger trunk flexion relatively in comparison to the young during table seat STS. The elderly also showed larger dorsiflexion and smaller ROM of knee, hip, trunk compared to the young during bath seat STS. Additionally, the elderly showed larger plantarflexion, hip flexion, smaller knee flexion and trunk flexion during the first half of bottom STS and larger knee flexion, hip flexion and trunk flexion during the second half of bottom STS. In addition, we could know contraction and relaxation characters of major muscles in lower limb during various STS through the analysis of changes in muscle length by musculoskeltal modeling.
The functional stability of mRNA is one of the crucial factors affecting the efficiency of in vitro translation. As the rapid degradation of mRNA in the cell extract (S30 extract) causes early termination of the translational reactions, extending the mRNA half-life will improve the productivity of the in vitro protein synthesis. Thus, a simple PCR-based method is introduced to increase the stability of mRNA in an S30 extract. The target genes are PCR-amplified with primers designed to make the ends of the transcribed mRNA molecule anneal to each other. When compared with normal mRNA, the mRNA with the annealing sequences resulted in an approximately 2-fold increase of protein synthesis in an in vitro translation reaction. In addition, sequential transcription and translation reactions in a single tube enabled direct protein expression from the PCR-amplified genes without any separate purification of the mRNA.
In glycoprotein, Terminal sialic acid residues of N-linked glycan are imperative things because they prevent the recognition from asialoglycoprotein-receptor that affect the half-life of glycoproteins. So establishment of culture process for enhancing sialic acid is important to maximize sialic acid contents of glycoprotein. In this study, we investigated effects of biphasic culture of Chinese hamster ovary (CHO) cells producing albumin-erythropoietin to increase sialylation. Biphasic cultures were performed with shift of $CO_2$ concentrations and temperatures at day 5 when viable cell density was decreased and sialidase was started to be released by cell lysis. The examined temperature set points were 33, 35 and $37^{\circ}C$ respectively and the $CO_2$ concentration was 1, 5, 10 and 15%. We confirmed that sialidase activity was the lowest in biphasic culture that was shifted from normal culture condition to 1% of $CO_2$ and $33^{\circ}C$ on day 5. However, the temperature and concentration of $CO_2$ have little effect on activity of ${\alpha}2,3$-sialyltransferase. Also, sialic acid contents were enhanced 1.13-fold higher than that in control culture. In conclusion, Biphasic cultivation in CHO cells led to inhibition of sialidase activity and increases of sialylated glycan.
Residue monitoring of propiconazole (PCZ) in cabbage, shallot, and spinach was conducted under multi-trial greenhouse conditions. This study aimed to understand the fate of the applied fungicide in these vegetables. Furthermore, the associated health risk of PCZ in leafy vegetables was assessed through dietary risk assessment. Commercially available PCZ (22% suspension concentrate) was administered thrice according to the OECD fungicide application interval guideline. The plant samples were extracted using a slightly modified QuEChERS technique and analyzed using gas chromatography-tandem mass spectrometry. The average PCZ recovery was between 84.5% and 117.6%, with a <5% coefficient of variance. The dissipation of PCZ residue in cabbage, shallot, and spinach after 14 days was 96%, 90%, and 99%, respectively, with half-lives of <5 days. Meanwhile, dietary risk assessments of PCZ residues in the studied vegetables using the risk quotient (RQ) were significant < 100 (RQ < 100). Thus, the population groups considered in this study were not at substantial risk from consuming leafy vegetables sprayed with PCZ following critical, good agricultural practices.
The present paper is concerned with the development of the computational biology in the past half century and its relationship with combustion. The modem computational biology is considered to be initiated by the work of Alan Turing on the morphogenesis in 1952. This paper first touches the life and scientific achievement of Alan Turing and his theory on the morphogenesis based on the reactive-diffusive instability, called the Turing instability. The theory of Turing instability was later extended to the nonlinear realm of the reactive-diffusive systems, which is discussed in the framework of the excitable media by using the Oregonator model. Then, combustion analogies of the Turing instability and excitable media are discussed for the cellular instability, pattern forming combustion phenomena and flame edge. Finally, the recent efforts on numerical simulations of biological systems, employing the detailed bio-chemical knietic mechanism is discussed along with the possibility of applying the numerical combustion techniques to the computational cell biology.
Mulletts, Mugil cephalus were exposed to artificial sea water containing $50{\mu}g/\iota\;of\;^{14}C-la-belled$ di-2-ethylhexyl phthalate(DEHP) during 15 days and returned to the DEHP free sea water in order to know bioconcentration and depuration of DEHP in the fish. Bioaccumulative process of DEHP in the fish was rather fast, and bioconcentration level of $9.7\~14{\mu}g/g$ and a bioconcentration factor of $220\~270$ were reached after one any of exposure. The biological half-life of DEHP in fish was 1.8 days. Five intermediate metabolites of DEHP were detected in the benzene and ethyl acetate fraction of fish by TLC.
Kim, In-Sook;Choi, Han-Gon;Choi, Hee-Sung;Kim, Bak-Kwang;Kim, Chong-Kook
Archives of Pharmacal Research
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v.21
no.3
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pp.248-252
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1998
To prolong the biological half-life of streptokinase, a thrombolytic agent, streptokinase-bearing liposome with and distearolyphosphatidyl ethanolamine-N-poly (ethylene glycol) 2000 (DSPEPEG 2000) was prepared and evaluated. Streptokinase-bearing liposomes composed of distearolyphosphatidylcholine (DSPC), cholesterol and cholesterol-3-sulfate with DSPE-PEG 2000 was prepared by the freeze-thawing method and administered via femoral vein to rats (15000 IU/kg). The activity of streptokinase in plasma was determined by the method based on the amidolytic activity of streptokinase-plasminogen complex. Pharmacokinetic parameters of streptokinase incorporated in liposomes were compared with those of streptokinase alone. The $T_{1/2}$ and $AUC_\infty$ streptokinase incorporated in DSPC-PEG liposome increased 16.3- and 6.1-fold, respectively, compared with those of streptokinase alone. Streptokinase-bearing long-circulating liposome could increase the circulation time of streptokinase in blood and expect longer thrombolytic activity compared with streptokinase alone.
This study was attempted to investigate the dissolution rate and the bioavailability after oral administration of commercially available norfloxacin tablets in rabbits. The dissolution test was conducted in artificial gastric juice using basket method with for norfloxacin preparations (A, B, C and D) which were chemically equivalent. The results were as follows ; The dissolution rate was increased in the order of four different brand A>D>B>C. Area under the plasma concentration curve and peak plasma concentration were increased in the order of brand A>D>B>C. Absorption rate constant and peak time were increased in the order of brand B>A>C>D, and there was a little difference in elimination rate constant and biological half-life. The correlation of the dissolution rate and relative bioavailability showed significant linear relationship. From the results of this experiment, the bioavailability of norfloxacin tablets in rabbits may be predicted from the results of dissolution rate studies.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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