본 연구에서는 프로바이오틱스로 사용하는 유용 미생물과 식용으로 안전하게 사용 가능한 미생물 자원을 이용하여 배당체의 전환 연구를 실시하여 전환체의 새로운 생리활성 작용에 대하여 연구하였다. 연구에 사용한 주요 소재로는 인삼의 사포닌 배당체, 길경의 platycodin 배당체, 호로파의 사포닌 배당체, 칡과 두유의 이소플라본 배당체 등이었다. 사용 균주로는 bifidobacteria, lactobacilli, leuconostocs, yeasts, aspergilli 등이었다. 유산균 중에는 Bifidobacterium sp. Int-57의 전환능이 우수하였고 식용 곰팡이 중에는A. niger의 전환능이 우수하였다. 다양한 미생물 또는 효소를 이용한 전환체에 대하여 아질산 소거능, 항산화능, a-glucosidase와 a-amylase 저해능 등을 조사하였을 때 일반적으로 전환 후의 활성이 중가하였다. 길경 사포닌은 전환 후에 세포 독성이 줄어들었으며 관능성이 유의적으로 개선되었다. 결론적으로, 프로바이오틱스와 식용 미생물을 이용하여 천연물 중에 존재하는 배당체의 생리활성 및 관능성을 증가시킬 수 있어 새로운 기능성 식품의 개발에 활용할 수 있을 것이다.
In this study, the poor electro-transformant yield of large DNA in bifidobacteria was improved by increasing the DNA concentration, which was amplified by enhancing electroporation conditions: treating the cell wall weakening agent and cell membrane permeabilizing molecule as well as changing the electrical parameter. In the enhanced conditions, the electroporation frequency increased from 15 to 71 times compared to the initial conditions at the same DNA concentration. As the DNA concentration increased, the difference in the electroporation frequency between the two conditions became greater, and the curve of the enhanced conditions seemed to be saturated with a DNA concentration over $4{\mu}g$. The present study provided a clue to the recovery of the electroporation frequency with large DNA and formulated the relationship between the DNA concentration, the DNA size and the electroporation frequency in bifidobacteria. Therefore, this study will contribute to the expansion of molecular genetic studies of bifidobacteria.
Kim, Byoung-Kook;Choi, In Suk;Kim, Jihee;Han, Sung Hee;Suh, Hyung Joo;Hwang, Jae-Kwan
한국축산식품학회지
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제37권6호
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pp.906-916
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2017
To investigate the effects of a single bacterium and a mixture of bacteria as probiotics in loperamide-treated animal models, loperamide (3 mg/kg) was administered to SD rats to induce constipation. The individual lactic acid bacterial doses, Enterococcus faecium (EF), Lactobacillus acidophilus (LA), Streptococcus thermophilus (ST), Bifidobacterium bifidum (BB), Bifidobacterium lactis (BL), Pediococcus pentosaceus (PP), and a mixture of the bacteria were orally administered to loperamide-induced constipated rats at a concentration of $10^8CFU/kg$ for 14 days. The weights and water contents of their stools were found to be significantly higher in PP, CKDB (mixture of 5 strains except PP), and CKDBP (CKDB+PP) groups than in the normal (constipation not induced) and the control (constipation-induced) groups (p<0.05). The intestinal transit ratio was significantly higher in all probiotic-treated groups than in the control group, and was the highest in the CKDBP group (p<0.05). The mucosal length and mucus secretion were significantly improved in all probiotic-treated-groups, as compared to that in the control group, and the CKDBP group was found to be the most effective according to immunohistochemistry (IHC) staining and total short chain fatty acid content analysis (p<0.05). Lastly, PP, CKDB, and CKDBP showed relatively higher Lactobacillus sp. ratios of 61.94%, 60.31% and 51.94%, respectively, compared to the other groups, based on metagenomic analysis.
섬유질이 풍부하고 enthocyanin색소가 풍부한 자색 고구마를 이용하기 위하여 탈지유와 설탕이 들어있는 기본배지에 증자, 박피한 고구마를 첨가한 후 5종(Lactebacillus bulgaricis, Lactobacillus delbruchii sub. sp. lactis, Streptococcus lactis, Bifidobacterium bifidum, Leuconostoc lactis) 의 젖산균주를 배양, 접종하여 호상 요쿠르트를 만들고 자색고구마가 젖산균의 생육과산 생성, 색도에 미치는 영향 및 저장성 등을 조사한 결과 L. bulgaricus균을 배양한 경우가 젖산균의 증식과 산 생성이 가장 빨라 발효개시 12시간만에 1.04 $\times$$10^{9}$CFU/$m\ell$의 생균수와 pH 4.22를 나타냈고 B. bifidum균은 발효개시 24시간까지는 젖산균의 증식이 느리게 이루어져 발효개시 36시간에 달할 때 3.3 $\times$$10^{8}$ CFU/$m\ell$의 생균수와 pH 5.1을 나타냈다. 발효종료 후 자색고구마를 첨가한 요쿠르트의 자색은 B. bifdum균에 의한 요쿠르트제조시 색도가 가장 안정하였고 Leuc. lactis, L. delbruechii sub. sp. lactis, L bulgaricus순으로 안정하였으며 St. lactis균에 의한 요쿠르트는 자색의 색소 소실이 가장 많았다. 2~3$^{\circ}C$에서 저장시 저장 2주까지 pH의 변화는 거의 없었고 생균수의 변화는 L. bulgaricus와 L. delbruechii sub. sp. lactis균에 의해 제조된 요쿠르트는 저장 1주까지는 변화가 없었으나 그 이후는 약간 감소하였으며 St. lactis균과 B. bifidum 균은 저장 1주까지 저온에서도 생균수가 소량 증가함을 보여주었다. 색도는 저장 2주 후 B. bifidum균에 의한 요쿠르트 제조시 자색도가 많이 소실되었고 L. delbruechii sub. sp. lactis균에 의한 요쿠르트가 가장 안정하였다.
The effect of Bacillus subtilis natto on hindgut fermentation and microbiota of early lactation Holstein dairy cows was investigated in this study. Thirty-six Holstein dairy cows in early lactation were randomly allocated to three groups: no B. subtilis natto as the control group, B. subtilis natto with $0.5{\times}10^{11}cfu$ as DMF1 group and B. subtilis natto with $1.0{\times}10^{11}cfu$ as DMF2 group. After 14 days of adaptation period, the formal experiment was started and lasted for 63 days. Fecal samples were collected directly from the rectum of each animal on the morning at the end of eighth week and placed into sterile plastic bags. The pH, $NH_3$-N and VFA concentration were determined and fecal bacteria DNA was extracted and analyzed by DGGE. The results showed that the addition of B. subtilus natto at either treatment level resulted in a decrease in fecal $NH_3$-N concentration but had no effect on fecal pH and VFA. The DGGE profile revealed that B. subtilis natto affected the population of fecal bacteria. The diversity index of Shannon-Wiener in DFM1 decreased significantly compared to the control. Fecal Alistipes sp., Clostridium sp., Roseospira sp., beta proteobacterium were decreased and Bifidobacterium was increased after supplementing with B. subtilis natto. This study demonstrated that B. subtilis natto had a tendency to change fecal microbiota balance.
The rational approach to antimicrobial therapy of infected root canals is based on accurate identification of the infecting organism and on the organism's susceptibility to antimicrobial agents as measured by standardized techniques. In establishing criteria for the selection of antibiotics, a susceptibility test should be performed. The purpose of this study was to investigate the susceptibility of 224 aerobic and anaerobic microbial strains isolated from infected root canals to various antibiotics. This was performed by using 7 antibiotic sensi-disc: Penicillin (10 units), Ampicillin (10 mcg), Tetracycline (30 mcg), Streptomycin (10 mcg), Kanamycin (30 mcg), Lincomycin (2 mcg), and Clindamycin (2 mcg). The results were as follows; 1. Strains isolated from infected root canals was shown to be most susceptible to Clindamycin, while Streptomycin exhibited least antibacterial properties. 2. Anaerobes were found to be susceptible to Penicillin, Ampicillin, and Clindamycin. 3. Streptomycin and Kanamycin were shown to be effective against Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermis, however, unidentified G(+) cocci organisms were found to be resistant to these agents. 4. Bifidobacterium sp. was susceptible to Lincomycin while G(+) rods were resistant to it. 5. Staphylococcus aureus, Micrococcus sp., and anaerobes were highly susceptible to Clindamycin. 6. All of the antibiotics tested were shown to be very effective against Eubacterium sp.
When ginseng water extract was incubated at $60^{\circ}C$ in acidic conditions, its protopanaxadiol ginsenosides were transformed to ginsenoside $Rg_3$ and ${\Delta}^{20}$-ginsenoside $Rg_3$. However, protopanaxadiol glycoside ginsenosides $Rb_1, Rb_2$ and Rc isolated from ginseng were mostly not transformed to ginsenoside $Rg_3$ by the incubation in neutral condition. The transformation of these ginsenosides to ginsenoside $Rg_3$ and ${\Delta}^{20}$-ginsenoside $Rg_3$ was increased by increasing incubation temperature and time in acidic condition: the optimal incubation time and temperature for this transformation was 5 h and $60^{\circ}C$ resepectively. The transformed ginsenoside $Rg_3$ and ${\Delta}^{20}$-ginsenoside $Rg_3$ were metabolized to ginsenoside $Rh_2$ and $\Delta^{20}$--ginsenoside $Rh_2$, respectively, by human fecal microflora. Among the bacteria isolated from human fecal microflora, Bacteroides sp., and Bifidobacterium sp. and Fusobacterium sp. potently transformed ginsenoside $Rg_3$ to ginsenoside $Rh_2$. Acid-treated ginseng (AG) extract, fermented AG extract, ginsenoside $Rh_2$ and protopanaxadiol showed potent cytotoxicity against tumor cell lines. AG extract, fermented AG extract and protopanaxadiol potently inhibited the growth of Helicobacter pylori.
녹농균과 아시네토박터 바우마니는 병원에서 중요한 기회감염 균주이며 대부분의 항생제에 내성이다. 다제내성 녹농균(MDRPA)과 아시네토박터 바우마니(MDRAB)는 심각한 원내 감염을 일으키고 메티실린 내성 황색포도상구균(MRSA) 보다 치료가 어렵다. 비피도박테리아는 많은 유익한 프로바이틱스 중 하나로 그들의 항균활성에 대한 많은 연구가 이루어져 왔다. 본 연구에서는 한국인으로부터 분리한 비피도박테리움 속 균주들의 MDRPA와 MDRAB에 대한 항균활성을 조사하였다. 시프로플록사신, 토브라마이신, 겐타마이신, 메로페넴과 세프타지딤에 내성을 보이는 MDRPA와 MDRAB에 대한 비피도박테리움 속 균주들의 항균활성은 흡광도를 이용한 액체배지희석법에 의해 측정되었다. 모든 비피도박테리아 분리균주(비피도박테리움 어돌레센티스 9균주, 비피도박테리움 롱검 3균주와 비피도박테리움 슈도카테눌라툼 2균주) 중 비피도박테리움 슈도카테눌라툼 SPM1309의 배양 상등액은 MDRPA와 MDRAB에 대한 강한 증식 억제 효과를 보여주었다. 배양 시간 동안 혼합액의 탁도는 변화되지 않았으며, 이 억제 효과는 정균 작용이었다. 게다가 항균활성은 분자량 10 kDa 미만의 분획물에서 나타났으며, $70^{\circ}C$에서 10분간 열처리 한 후에서 항균활성이 유지되었기 때문에 활성물질은 열에 안정하였다. 본 연구결과는 MDRPA와 MDRAB 감염증의 대체치료법을 위한 비피도박테리움 슈토카테눌라툼 SPM1309의 잠재적인 가능성을 보여준다.
DEAE sephacel anion chromatography 및 SP sepharose cation chromatography에 의해 Streptomyces violaceoruber 유래 alginate lyase의 정제를 수행하여 비활성 14.59 units/mL 정제배율 40.64배를 나타내었다. Tricine SDS-PAGE에 의한 단일밴드를 확인하였고, 분자량은 23.3 kDa으로 결정되었다. 정제효소에 의해 sodium alginate를 가수분해하여 1차 activated carbon column chromatography와 2차 bio gel P-2 gel filtration에 의해 당가수분해물을 분리 회수하여 TLC와 FACE를 통해 중합도를 확인하고 Timell's method에 의해 hetero type M/G-oligosaccharide 중합도 6, 8로 결정되었다. B. animalis, B. bifidum, B. breve, B. infantis, B. longum와 L. acidophilus, L. casei, L. reuteri에 생육활성에 대한 중합도 6, 8의 영향을 검토하기 위하여 modified-MRS media에 탄소원으로 중합도 6, 8를 대체하여 생육활성을 비교한 결과 B. longum에서는 D.P. 6 M/G-oligosaccharide를 탄소원으로 대체한 경우 표준 MRS배지와 비교하여 4.25배, D.P. 8에서 6.44배의 상대활성을 나타내어 가장 우수한 생육활성을 나타내었으며, B. bifidum의 경우에서도 D.P. 6에서 3.27배, D.P. 8에서 5.4배의 상대활성을 나타내었다. 이외에도 B. animalis, B. breve그리고 L. casei에 있어서도 D.P. 8의 경우 3배의 상대활성을 나타내었으나, L. reuteri에 대한 D.P. 8의 경우에서는 표준 MRS media와 비교하여 0.29배로 감소하였다. 결과적으로 D.P. 8의 올리고당이 D.P. 6의 올리고당보다 생육활성에 크게 기여하는 것으로 나타났다.
본 연구에서 생강과 계피 추출물 및 복합물의 장내 개선 효능을 조사하였다. 생강계피 복합물을 Modified EG 액체배지에 처리하고 대표적인 유익균인 B. longum, Lactobacillus sp.와 L. acidophilus 균주를 접종하여 생육 활성을 관찰하였다. 그리고 사람의 장상피세포인 Caco-2 cell과 마우스의 대식세포인 RAW 264.7을 co-culture한 model에서 생강계피 복합물을 처리한 후 lipopolysaccharide (LPS)로 자극시켜 Transepithelial electrical resistance (TEER), permeability 그리고 nitrite 생성량을 확인하였다. 그 결과, 생강계피 복합물을 생강 : 계피 1:5로 처리 시, B. longum, Lactobacillus sp. 및 L. acidophilus 세 가지 균주의 성장을 모두 최대로 상승시켜 생육 활성 효과가 우수하였다. 특히 생강계피 복합물은 대조군에 비해 Lactobacillus sp. 균주의 가장 높은 생육 상승을 나타내어 생강계피 복합물에 젖산균의 생육인자를 함유할 것으로 추정된다. 반면 장 염증활성 조절을 확인하기 위한 co-culture model에서는, LPS 처리군과 비교하여, 생강계피 복합물 처리군 중 생강 : 계피 1 : 1, 1 : 3, 1 : 5와 1 : 7 복합물이 대조군과 비슷하거나 더 높게 증가하였고, tight junction(TJ) permeability는 생강 : 계피 3 : 1, 1 : 1, 1 : 3과 1 : 5 복합물에서 대조군과 비슷하게 감소하였다. 또한, 생강: 계피 1 : 1, 1 : 5와 1 : 7 복합물은 nitrite의 수준을 감소시켰다. 장내 유익균의 생육 및 장 염증 억제 활성 결과를 종합하여 볼 때 생강계피 복합물 중 생강 : 계피 1 : 5 복합물이 장내 유익균과 염증 조절에 좋은 효과를 나타내는 최적 복합비율이라고 판단할 수 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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