생물학적 방법으로 토착 미생물에 의해 벤젠과 톨루엔을 효과적으로 분해할 수 있는 토양환경인자의 조건을 조사하기 위해 16가지의 서로 다른 환경의 미소환경(microcosm)을 제작하여 벤젠과 톨루엔 분해실험을 수행하였고, 아울러 분해과정에서 토착미생물의 분포변화를 조사하였다. 그 결과 실험 조건중 토양의 수분 포화도는 30%와 60%이면서 동시에 생물들이 흡착할 수 있는 미생물 흡착제로 활성탄을 1% 첨가한 미소환경(Case 6, Case 7)에서 벤젠과 톨루엔의 분해속도가 가장 빨랐다. 토착토양미생물의 분포변화를 조사한 결과 벤젠과 톨루엔의 분해가 가장 빨리 일어나는 Case 6 와 Case 7에서는 10일 배양 후 total culturable bacteria는 초기 세균 수에 비해 각각 488배와 308배가 증가하였다. 벤젠과 톨루엔 분해세균의 증가 역시 총 세균수가 증가하는 비율로 증가하여 초기 분포를 계속 유지하였고, 벤젠과 톨루엔을 첨가한 미소환경에서 분해 미생물 종의 변화는, 첨가 전 그람음성 세균이 반응 10일 후에는 그람양성 세균이 탈이 분리되었다.
활성슬러지법에 의한 벤젠폐수 처리실험을 통하여 활성슬러지의 벤젠처리중에 실제 그에 관여하는 세균을 분리 동정하였다. 반응조에서 분리한 세균은 6종으로, Pseudomonas fluorescens, Enterobacter agglomerans, Enterobacter cloacae, Klebsiella oxytoca, Citrobacter freundii와 Klebsiella pneumoniae로 동정되었다. 벤젠 분해능을 측정한 결과는 P. fluorescenss가 55%를 18시간만에 처리했고, E. cloacae는 24%, K. oxytoca 는 32%, E. agglomerans는 41%의 분해능을 보였다. P. fluorescens의 증식 최적조건은 온도 25-31$^{\circ}C$와 pH 7.0으로 확인되었다. P. fluorescens가 우점종일때 나타나는 지로생물은 원생동물인 Aspidisca sp.였다. 벤젠 농도가 387mg/$\ell$일 때에는 Aspidisca sp.와 Litonotus sp.가 증식을 최대로 하였고, 벤젠 농도가 1,600mg/$\ell$에서는 Litonotus sp.와 Vorticella sp.는 거의 성장하지 않았다. Glucose 배지에서는 모두 성장율이 높았다.
토양 및 지하수 복원 과정에서 벤젠과 에틸렌이 혼합되어 배출될 경우 이를 biofilter에 의해 처리한 결과, 에틸렌은 생분해가 잘 되지 않는 화합물인데도 불구하고 체류시간이 10~15분에서는 96%이상 높은 생물학적 처리를 보여 biofilter운전 가능성이 제시되었다. 2~15분 체류시간에서 혼합 VOCs중 벤젠은 모든 조건에서 100% 제거되었다. 체류시간이 15분일 경우 벤젠과 에틸렌의 최대 제거능은 각각 4.3과 1.4g/$\textrm{m}^3$hr로서 벤젠이 에틸렌에 비해 3배 정도 컸다. 체류시간이 작을수록 에틸렌 분해율 감소로 인하여 이산화탄소 발생도 감소함을 발견하였으며 벤젠과 에틸렌이 모두 제거되는 운전에서 최고 이산화탄소 발생률은 3,169 [mg-$CO_2$/(g-${C_2}{H_4}$+${C_6}{H_6}$)]이었다. 벤젠 산화 미생물은 Bacillus mycoides와 Pseudomonas fluorescens로 동정되었고, 에틸렌 산화 미생물은 Pseudomonas putida와 Pseudomonas fluorescens로 각각 동정되었다.
한강 수계에서 SDBS (Sodium Dodecyl Benzene Sulfonate)를 유일한 탄소원으로 가지는 최소배지에서 서란 120 균주중 $4^{\circ}C$에서 생장이 좋은 8균주를 선택하여 동정하였으며. 이들의 온도에 따른 생장파 분해능을 흡광도 분석기를 이용하여 측정하였다. 동정 결과. Ps. fluorescens가 4균주, Ps. putida가 2균주 이었다. 이들중 Ps. fluorescens LP6, Ps. lido Lei, Ps. fluorescens LS 6의 비생장율은 모두 $25^{\circ}C$에서 가장 높은 값을 나타냈으나 정체기에서의 균체량은 $5^{\circ}C$ 에서 가장 높았다. 따라서 이들 3 균주는 faculfative psychrophilic bacteria로 사료된다. 한편 SDBS의 분해는 세포가 정체기에 들어가면서 시작되었으며, 분해능은 $25^{\circ}C$C에서 가장 좋았다.
In the current studies, we characterized the degradation of a hot mixture of benzene and toluene (BT) gases by a thermophilic biofilter using polyurethane as a packing material and high-temperature compost as a microbial source. We also examined the effect of supplementing the biofilter with yeast extract (YE). We found that YE substantially enhanced microbial activity in the thermophilic biofilter. The degrading activity of the biofilter supplied with YE was stable during long-term operation (approximately 100 d) without accumulating excess biomass. The maximum elimination capacity ($1,650\;g{\cdot} m^{-3}{\cdot} h^{-1}$) in the biofilter supplemented with YE was 3.5 times higher than that in the biofilter without YE ($470\;g{\cdot} m^{-3}{\cdot} h^{-1}$). At similar retention times, the capacity to eliminate BT for the YE-supplemented biofilter was higher than for previously reported mesophilic biofilters. Thus, thermophilic biofiltration can be used to degrade hydrophobic compounds such as a BT mixture. Finally, 168 rDNA polymerase chain reaction-DGGE (PCR-DGGE) fingerprinting revealed that the thermophilic bacteria in the biofilter included Rubrobacter sp. and Mycobacterium sp.
For the biological treatment of industrial wastewater containing high concentration of phenol, isolation and characterization of phenol - degrading bacterium were carried out. A bacterial strain P2 capable of degrading phenol was isolated from contaminated soils by enrichment culture technique and identified as the genus Rhodococcus by morphological, cultural, biochemical characteristics, and Biolog system. The optimal medium composition and cultural conditions for the growth and degradation of phenol by Rhodococcus sp. P2 were 0.1% of (NH$_4$)$_2$SO$_4$, 0.2% of KH$_2$PO$_4$, 0.25% of Na$_2$HPO$_4$ㆍ12$H_2O$, 0.2% of MgSO$_4$ㆍ7$H_2O$, and 0.008% of CaC1$_2$ㆍ2$H_2O$ along with initial pH 8.5 at 3$0^{\circ}C$. Rhodococcus sp. P2 could grow with phenol as the sole carbon source up to 1,800 ppm in batch cultures, but did not grow in medium containing above 2,000 ppm of phenol. When 800 ppm phenol was given in the optimal media, Rhodococcus sp. P2 completely degraded it within 24 h. Meanwhile, 1,800 ppm of phenol was degraded within 9 days. Rhodococcus sp. P2 could utilize toluene, n-hexane, xylene and benzene as sole carbon source .
From several industrial wastewaters, 14 bacterial strains which degrade benzene, toluene, o-xylene, m-xylene, or p-xylene (BTX) were obtained. These strains were characterized as to their species composition and the substrate range, kinetic parameters and the substrate interactions were investigated. Although BTX components have a similar chemical structure, isolated strains showed different substrate ranges and kinetic parameters. None of the strains could degrade all of BTX components and most of them showed an inhibition (Haldane) kinetics on BTX, BTX mixtures were removed under inhibitory substrate interactions with variation in the intensity of inhibition. For a complete degradation of BTX, a defined mixed culture containing three different types of patyways was constructed and all of the BTX components were simultaneously degraded with the totla removal rate of 225.69 mg/g biomass/h Judging from the results, the obtained mixed culture seems to be useful for the treatment of BTX-contaminated wastewater or groundwater as well as for the removal of BTX from the contaminated air stream.
Toluene을 유일 탄소원으로 배양한 혼합미생물 군으로부터 순수미생물을 분리배양한 후, 염기서열을 분석하여 Pseudomonas sp. TDB4 균주를 얻었다. 이 균주의 VOC 분해능을 평가하기 위해 toluene, benzene, p-xylene, styrene을 대상기질로 하여 회분식 생분해실험을 진행하였으며, 단일 기질인 경우 toluene, benzene, styrene, p-xylene의 순으로 분해능이 좋은 것으로 나타났다. 또한 VOCs 혼합물을 주입하였을 경우에는 모든 조합조건에서 styrene, toluene, benzene, pxylene의 순서로 쉽게 분해하였다. 이러한 결과로부터 VOC가 공존할 경우 toluene과 p-xylene은 다른 VOC의 분해를 촉진시키지만 styrene은 저해물질로 작용함을 알 수 있었다. 한편 연속식 계면활성제 미생물 반응기(Bioactive Foam Reactor, BFR)에 혼합미생물 배양액과 TDB4 배양액을 접종하고 장기 운전하면서 운전특성과 미생물 동적변화를 확인하였다. VOCs 혼합물질 유입농도가 250 ppm 이상에서는 처리효율이 급격히 저하되었는데, FISH 분석 결과에 따르면 동일한 시점에서 TDB4가 차지하는 비율이 전체 미생물의 20% 미만으로 감소하여 BFR의 처리효율과 미생물상은 매우 밀접한 관련이 있음을 알 수 있었다. 본 연구 결과 FISH 분석법을 계면활성제 미생물 반응기의 미생물 군집변화 해석에 유용하게 사용할 수 있음을 확인하였으며, 미생물 반응조를 장기간 운전할 때에는 안정적인 처리효율을 유지하기 위하여 주기적인 식종을 해주는 것이 적절하다고 판단된다.
원유를 분해하는 미생물을 석유화합물로 오염된 토양으로부터 분리하였고, 이들은 Acinetobacter sp. A132, Pseudomonas putida A422, Pseudomonas aeruginosa F721, F722, 그리고 Xanthomonas maltophilia B823으로 동정되었다. 이들 미생물의 유류 분해율을 조사한 결과, strain A132가 $6.04g/L{\cdot}day$로 가장 놓은 분해율을 나타내었다. 탄소수가 10개에서 32개 사이의 n-alkane 화합물을 기질로 사용하여 각각의 화합물에 대한 분해능력을 조사한 결과, strain A132와 F722는 대부분의 기질에 대하여 분해능력을 보였다. Strain A422는 n-alkane 화합물에 대한 분해능력은 높지 않았으나, benzene과 xylene을 분해하는 능력을 가지고 있었다. Strain B823은 원유에서는 조금 생장하였으나, 본 연구에서 사용한 다른 기질들에 대해서는 전혀 분해능력을 보이지 않았다. 한편, n-alkane 혼합화합물에 대한 분해율을 GC/FID로 분석한 결과, strain F722는 $nC_7{\sim}nC_{10}$에서 100%, $nC_{11}{\sim}nC_{24}$에서는 80% 이상 의 높은 분해율을 나타내었다.
This paper reported the use of real-time polymerase chain reaction (PCR), denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE), and the culture-based method in the intrinsic bioremediation study at a petroleum contaminated site. The study showed that phenol hydroxylase gene was detected in groundwater contaminated with benzene, toluene, ethylbenzene, xylene isomers (BTEX) and methyl tert-butyl ether (MTBE). This indicated that intrinsic bioremediation occurred at the site. DGGE analyses revealed that the petroleum-hydrocarbon plume caused the variation in microbial communities. MTBE degraders including Pseudomonas sp. NKNU01, Bacillus sp. NKNU01, Klebsiella sp. NKNU01, Enterobacter sp. NKNU01, and Enterobacter sp. NKNU02 were isolated from the contaminated groundwater using the cultured-based method. Among these five strains, Enterobacter sp. NKNU02 is the most effective stain at degrading MTBE without the addition of pentane. The MTBE biodegradation experiment indicated that the isolated bacteria were affected by propane. Biodegradation of MTBE was decreased but not totally inhibited in the mixtures of BTEX. Enterobacter sp. NKNU02 degraded about 60% of MTBE in the bioreactor study. Tert-butyl alcohol (TBA), acetic acid, 2-propanol, and propenoic acid were detected using gas chromatography/mass spectrometry during MTBE degraded by the rest cells of Enterobacter sp. NKNU02. The effectiveness of bioremediation of MTBE was assessed for potential field-scale application.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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