콩 탄저병의 생물학적 방제를 위하여 병원균 Colletotrichum truncatum과 C. gloeosporioieds에 대한 길항세균 Pseudomonas sp.를 분리 동정하였다. Pseudomonas sp.의 균사생장 억제효과는 탄저병 살균제 benomyl, fluazinam과 비슷하였으며, 콩에 대한 병원성은 거의 없었다. Pseudomonas sp. 의 종자처리는 C. truncatum 을 접종한 콩 종자의 출현율을 현저히 증가시켰고, 경엽처리한 경우 잔효성은 낮았지만 처리 2주 후의 방제효과는 benomyl, fluazinam과 비슷하게 높았다.
Kim Soon Kee;Shim Hee Jin;Roh Jong Yul;Li Ming Shun;Choi Jae Young;Jin Byung Rae;Boo Kyung Saeng;Je Yeon Ho
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제11권1호
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pp.37-42
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2005
We cloned the $\beta$-tubulin genes from the wild type strain and two benomyl-resistant mutants of Metahizium anisopliae and determined their nucleotide sequences. A $\beta$-tubulin encoding 448-residue protein from wild type M. anisopliae shows strong homology to other $\beta$-tubulins. The coding region is interrupted by four introns. Comparisons of intron position between the M. anisopliae gene and other fungal $\beta$-tubulin genes show considerable positional conservation. The mutations responsible for benomyl resistance were determined in two spontaneous mutants, 8-18 and 819. One mutant 8-18 substituted glutamate for asparagine at position 33 and lysine for glutamine at position 134. The other mutant 8-19 showed alterations at three positions of $\beta$-tubulin arginine for tryptophan at position 21, lysine for asparagine at position 33, and phenylalanine for leucine at position 240. These data suggest that regions of $\beta$-tubulin containing amino acids 21, 33,134, and 240 interact to form the binding site of benomyl.
작물 병해충에 대한 무공해 미생물 농약 개발의 일환으로 곤충 병원성 곰팡이 Metarhizium anisopliae의 분자생물학적 육종을 위해 이 균주의 형질전환계를 확립하였다. M. anisopliae의 원형질체를 제작하여 benomyl 약제에 대하여 저항성을 나타내는 Aspergillus flavus 유래의 ${\beta}-tubulin$ 유전자를 갖는 pBRG-4 plasmid DNA를 polyethylene glycol 방법으로 형질 전환하였다. 이 형질전환은 pBRG-4 DNA $50\;{\mu}g$당 10개의 효율로 이루어졌으며, 그 결과 야생형 균주들의 $2.5\;{\mu}g/ml$ 농도의 benomyl 존재 하에서도 성장이 억제되는데 반하여 선발된 형질전환체들은 $5.0\;{\mu}g/ml$ 농도의 benomyl 함유 배지에서도 잘 성장하였다. 또한 이 형질전환체들의 chromosomal DNA를 분리하여 Southern 분석한 결과 ${\beta}-tubulin$ 유전자가 homologous recombination에 의하여 M. anisopliae의 genome속에 삽입 되었음을 확인하였다.
변색된 종자에서 분리된 P. wasabiae에 접종된 종자는 평균 52.4%의 낮은 발아율을 보였으나 benomyl 침지처리에 의해 발아율이 83.3%로 향상되었다. 멸균 토양에 파종된 접종종자는 28.0%의 먹들이병, 12.7%의 모잘록병 발병률을 보였으나, benomyl로 침지처리된 종자는 먹들이병 6.0%, 모잘록병 4.7%의 낮은 발병률을 나타냈다. P. wasabiae가 접종된 토양에 공시 약제로 처리된 종자를 파종한 결과 먹들이병 발병률은 약제를 처리하지 않은 종자의 32.0%에 비해 benomyl 침지처리에서 12.0%로 발병이 억제되었고, 모잘록병은 10.7%의 가장 낮은 발병률을 보였다.
1980년경부터 Botryosphaeria dothidea에 의한 사과겹무늬썩음병이 전국적으로 만연하였는데 그 동안 화학적 방제를 하였으나 병해는 감소되지 않고 현재도 그 피해손실이 극심하다. 본 병의 주요 방제제인 benomyl에 대한 본 병원균의 저항성을 조사한 결과는 다음과 같다. 1. 감수성균은 $150\;{\mu}g/ml$에서 균사생장을 할 수 없었으나, 저항성균은 $300\;{\mu}g/ml$에서 7-l3mm, $2,400\;{\mu}g/ml$에서도 균총직경 6-8mm의 균사생장을 보였다. 후자의 고농도에서 저항성균은 5-9%의 포자발아를 보였으나 감수성균은 포자발아가 없었다. 2. $20-2,400\;{\mu}g/ml$의 모든 공시농도에서 감수성균은 병자각을 형성할 수 없었는데 반하여 저항성균은 저농도에서는 많은 병자각을 형성하였으나 약제농도가 높아질수록 적게 형성하였다.
The egg bags of Korean salamander(Hynobius leechii) were collected from farmlands in Gyeongsangnam-do area. The assumed breeding time, numerical variation of embryos in each egg bag, mortality and the rates of abnormalities were investigated. The toxicity of benomyl, the metabolite carbendazim and BIC which were frequently spread in agricultural area and caused spontaneous embryonic malformation was investigated. The assumed breeding time between the end of February and the end of March has the difference about a month because of a habitat and it takes about 2 or 3 weeks from laying eggs to hatching. The length of each egg bag and the number of embryos were very varied in each area. It is due to geographical variation. Among egg bags in total study area, only 406 of egg bags(17.70% of total egg bags) developed all of embryos to normal larvae, and 78.49% of total embryos were normally developed. The patterns of spontaneous embryonic malformation were 26 species from A to Z and the abnormal patterns in individual were 8 species and above. the geographical differences about the abnormal pattern were identified and 11 habitats categorized 4 groups. The most frequent abnormality in Gyeongsangnam-do area is the dysplasia of external gill. The caudal dysplasia, abdominal blister and dysplasia of fin were also frequently observed. Individuals showing severe external defect were histologically studied and they showed retinal hypo-pigmentation, thyroid carcinoma, somatic muscular dysplasia, degeneration of cephalic neuron and various organ dysplasia. Benomyl and carbendazim were treated by 10pM$^{\sim}$10uM and BIC was treated by 1$^{\sim}$40ppm to know the effect of toxicity about toxic substance of salamander. After benomyl was treated, a survival rate was sharply dropped from 2 to 8 days. $LC_{100}$ identified in $1{\mu}M$, $LC_{50}$ identified between 100nM and $1{\mu}M$. $EC_{50}$ was assumed between 10nM and 100nM. The prevalent external malformation was abdomen swelled abnormally and histo-pathological effects were abdomen, neural tube and lens hernia. This suggests that benomyl is the toxicitic substance which inhibits the development of digestive system and nervous system. The result of treated carbendazim was similar to that of the treated benomyl. The survival rate is sharply dropped between 2 and 6 days. $LC_{100}$ was identified $1{\mu}M$ and $LC_{50}$ was identified between 10nM and 100nM. This shows that cabendazim has stronger lethal toxicity than benomyl. Ventral blister, eye dysplasia and cephalic dysplasia in the individual of external malformation mean that cabendazim affected nervous system much more than benomyl. Because the toxicity of BIC affected less in the beginning but affected more in the near hatching period, the period causing toxicity is somewhat different. $LC_{100}$ identified near 40ppm and $LC_{50}$ identified near 25ppm. The external defect shows mainly ventral blister and histo-pathological results show intestinal deformities. This result suggests the BIC inhibited strongly the development of digestive system. These abnormal developments may be caused by antimitotic action, inhibition of tubulin complex, destruction of microtubule, inhibitions of neurulation and closing of neural fold, and by the inhibition of movement of neural crest cells of benomyl. These abnormal developments may be caused by the rupture of epithelium, the loss of microtubule, the reduction of spindle size, the inhibition of spindle assembly formation, the destruction of spindle poles of carbendazim. These abnormal developments may be caused cytotoxicity by inhibition of the synthesis of a number of macromolecules and similar reaction the inhibition of benomyl.
Monilina fructicola, the brown rot fungus of stone fruits, was isolated from overwintering mummies and peduncles on peach trees from February to March, 1998. The resistant population of these isolates to benzimidazole (benomyl, carbendazim and thiophanate-methyl) and dicarboximide (iprodione, vinclozolin and procymidone) was examined. Among 417 isolates, the incidence of isolates resistant to benomyl, carbendazim, and thiophanate-methyl were 45 (10.8%), 47 (11.3%), and 46 (11.0%), respectively. Forty two (10.0%) isolates showed cross-resistance to benzimidazole fungicides. On the other hand, the resistant isolates against iprodione, vinclozolin and procymidone were 186 (44.6%), 1 (0.2%) and 150 (36.0%), respectively. Among the isolates, 116 (27.8%) showed cross-resistance to iprodione and procymidone. Moreover, 27 (6.5%) of 417 isolates showed double-resistance to both benzimidazole (benomyl) and dicarboximide (iprodione).
Prochloraz of fungicide was applied on Mycogone perniciosa causing wet bubble in cultivated mushroom, Agaricus bisporus. In vitro, Prochloraz was an excellent fungicide on two strains of Mycogone, tolerant and non-tolerant to Benomyl, respectively. At the low dosage, Prochloraz more inhibited mycelial growth of mushrooms than Benomyl. At the higher dosage, Benomyl more inhibited the mycelial growth than prochloraz. The higher yield of sporophore of the mushroom with low inferction rate was abtained from several trial of Prochloraz. Prochloroz was concluded to be effective fungicide on Mycogone perniciosa on Agaricus cultivation.
한국독성학회 2002년도 Molecular and Cellular Response to Toxic Substances
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pp.165-165
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2002
These experiments tested whether exposure to benomyl (BN) or lindane (LD) during late pregnancy affect the development of reproductive tract in adult offspring. Timed pregnant Sprague Dawley rats (N=7∼8/treatment) were gavaged with LD (1, 5, or 10 mg/kg), BN (50, 250, or 500 mg/kg), or com oil on gestation days 15∼19.(omitted)
Benzimidazole계 살균제의 세포독성을 평가하기 위하여 CHL(chinese hamster lung) 세포를 이용한 Giemsa stain assay, Lactic dehydrogenase(LDH) activity, MTT assay, DNA synthesis inhibition test 및 Sulforhodamin B(SRB) assay를 수행하여 benzimidazole 계 살균제에 대한 약제별 세포독성을 평가하고 위해도 평가를 위한 자료로 사용하고자 하였다. 시험결과 LDH 활성은 carbendazim 4.0, 16.0 및 $32.0{\mu}g/mL$을 24 시간 처리하였을 때 음성대조군에 비해 농도별로 세포독성이 각각 2.16, 2.94 및 2.64배 강하게 나타났다. DNA 합성시험에서는 carbendazim $2.0{\mu}g/mL$ 농도에서 약 45% DNA 합성을 저해하였으며, Giemsa assay와 MTT assay에서도 세포와 mitochondria에 독성을 일으키는 것으로 나타났다. Giemsa assay의 $IC_{50}$은 thiophanate-methyl, benomyl, carbendazim 및 양성대조 약제인 captafol에서 각각 >125, 1.2, 30.0 및 $0.3{\mu}g/mL$ 이었고, MTT assay의 $IC_{50}$은 thiophanate-methyl, benomyl, carbendazim 및 captafol에서 각각 >125, 18.7, 20.4 및 $2.6{\mu}g/mL$이었다. 그리고 세포 증식에 대한 영향을 조사하기 위하여 수행된 SRB assay 의 $IP_{50}$(반수세포증 식억제농도)에서도 thiophanate-methyl, carbendazim, benomyl 및 captafol이 각각 17.4, 5.3, 1.5, 및 $0.5{\mu}g/mL$으로 관찰되었다. 이상의 결과는 급성독성이 낮은 benzimidazole계 살균제가 유전독성 등 특수독성이 강하게 나타나는 원인일 것으로 판단되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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