• 한국식물병리학회지
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• 제11권4호
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• pp.353-360
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• 1995

Tests were performed on 232 bacterial strains (71 strains of Pseudomonas tolaasii and 161 white line reacting organisms, WLRO) isolated from cultivated mushrooms. As results, P. tolaasii was divided into 5 groups on the basis of the phenotypical characteristics for the strains, and group 3 was the major one including 48 (62%) out of the total 71 strains. WLRO were classified into 23 groups, and group 10 was the major group (65 strains, 30% of the total WLRO tested). A white line was well formed at 22$^{\circ}C$ and at 4 mm distance between P. tolaasii and WLRO colonies in their dual culture on Pseudomonas agar F medium within 36-hr incubation, but not formed at $25^{\circ}C$ even for 72-hr incubation. The morphological, cultural and biological properties of P. tolaasii group 3, and the main group of WLRO, group 10, were different only in the light of pathogenicity. Also group 2 of P. tolaasii had the characteristics similar to group 24 of WLRO which was pathogenic to cultivated mushrooms, suggesting the P. tollaasiii and WLRO strains may be the same species although their white line forming ability and pathogenicity were more or less different from one another. Subculture of the strains in P. tolaasii group 1 induced the variation of their pathogenicity, white line forming ability and utilization of sodium benzoate and sodium tartrate, and thus it can be inferred that they were converted to strains having the characteristics of group 3 or WLRO groups.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제28권12호
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• pp.2064-2070
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• 2018

Pseudomonas tolaasii 6264 is a representative strain that causes bacterial blotch disease on the cultivated oyster mushroom, Pleurotus ostreatus. Bacteriophages are able to sterilize the pathogenic P. tolaasii strains, and therefore, they can be applied in creating disease-free mushroom cultivation farms, through a method known as "phage therapy". For successful phage therapy, the characterization of phage-resistant strains is necessary, since they are frequently induced from the original pathogenic bacteria in the presence of phages. When 10 different phages were incubated with P. tolaasii 6264, their corresponding phage-resistant strains were obtained. In this study, changes in pathogenic, genetic, and biochemical characteristics as well as the acquired phage resistance of these strains were investigated. In the phylogenetic analyses, all phage-resistant strains were identical to the original parent strain based on the sequence comparison of 16S rRNA genes. When various phage-resistant strains were examined by three different methods, pitting test, white line test, and hemolytic activity, they were divided into three groups: strains showing all positive results in three tests, two positive in the first two tests, and all negative. Nevertheless, all phage-resistant strains showed that their pathogenic activities were reduced or completely lost.

• 한국균학회지
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• 제27권2호통권89호
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• pp.164-169
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• 1999

팽이버섯 재배에 있어 가장 문제되는 병해 중의 하나인 팽이버섯 세균성갈색무늬병(세균성갈반병)의 방제약제를 선발하기 위해 제오라이트입제, 키토산, 목초액, $Ca(OCl)_2$, NaOCl 등 5종의 약제를 공시하여 기내와 버섯재배사에서 시험을 수행한 결과, 목초액과 $Ca(OCl)_2$는 0.5% 농도에서 F. velutipes의 균사생장 억제력은 낮았으나, 병원세균인 P. tolaasii에 대해서는 현저한 생장억제력을 보여 팽이버섯 세균성갈색무늬병의 방제약제로 이용가능성이 있는 것으로 나타났다. 발병율은 무처리구에서 43.8%로 매우 높게 나타났으나, $Ca(OCl)_2$ 0.5% 처리구의 경우 14.6%로 가장 낮은 발병율을 보였고, 목초액 0.5% 처리구 및 $Ca(OCl)_2$ 1.0% 처리구에서 20% 내외, 그리고 목초액 1.0% 처리구에서 26.1%의 매우 낮은 발병율을 보였다. 또한 약제 처리농도의 경우 1.0% 보다는 오히려 0.5%의 저농도에서 억제효과가 높은 것으로 나타났다. 무처리구에 비해 처리구에서 품질이 현저히 향상되었으며, 수량도 30% 정도 증수되었고, 특히 $Ca(OCl)_2$ 1.0% 처리구의 경우 35.6%로 가장 높은 증수효과를 나타냈다. 그러나 발병억제율, 품질, 수량 등 전체적인 처리효과를 볼 때, 목초액보다는 $Ca(OCl)_2$가 상대적으로 더 유효하고, 약제별 사용농도는 $Ca(OCl)_2$ $0.5{\sim}1.0%$, 목초액은 0.5%의 농도가 본 병의 억제에 가장 유효한 것으로 나타났다.

• 한국균학회지
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• 제27권2호통권89호
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• pp.132-137
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• 1999

본 연구는 느타리버섯 갈반병 병원균인 pseudomonas tolaasii의 진단을 위한 분자 marker를 개발하기 위해 수행되었다. 세균의 반복염기서열과 펙틴 분해효소 유전자로부터 제작된 여러개의 primer들을 이용해 식용버섯으로부터 분리된 Pseudomonas종들로부터 DNA 다형성을 유도한 바펙틴 분해 효소로부터 제작된 PEU1 primer는 다른 Pseudomonas종들로부터 P. tolaasii를 구분시키는 다형성 밴드를 생성하였다. P. tolaasii 6균주에 공통적으로 나타나는 1.0kb와 0.4kb의 두 가지 밴드를 pGEM-T에 클로닝하고 이들을 각기 pPTOP1과 pPTOP2로 명명하고 probe로 이용하였다. 0.4kb 크기의 pPTOP2의 삽입 DNA는 P. tolaasii 6균주와 hybridization이 이루어진 반면 다른 Pseudomonas종과는 반응하지 않았다. 0.4kb크기의 pPTOP2의 삽입 DNA를 probe로 이용해 dot blot hybridization한 결과 P. tolaasii는 $1.5{\times}10^3\;cfu$까지 검출이 가능함을 확인하였다.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제24권1호
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• pp.37-40
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• 2012

The apidaecins are highly active against Gram-negative bacteria. Here, we show the expression and antibacterial activity of the bumblebee, Bombus ignitus, apidaecin. We PCR-amplified 51 bp of the active domain sequence of the B. ignitus apidaecin gene and expressed the recombinant B. ignitus apidaecin active domain in baculovirus-infected insect cells. The recombinant B. ignitus apidaecin active domain shows bactericidal activity against Gram-negative bacteria, including Pseudomonas tolaasii, a serious pathogen in cultivated mushrooms, but not Gram-positive bacteria. This result suggests that the active domain of the B. ignitus apidaecin is a potential antibacterial agent for the control of bacterial brown blotch diseases.

• 한국버섯학회지
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• 제22권2호
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• pp.37-47
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• 2024

Fluorescent bacteria were isolated from sporocarps that browned into various mushrooms during survey at places of the production in Korea. We examined the pathogenicity, biodiversity, and genetic characteristics of the 19 strains identified as Pseudomonas tolaasii by sequence analysis of 16S rRNA and White Line Assay. The results emphasize the importance of rpoB gene system, fatty acid profiles, specific and sensitive PCR assays, and lipopeptide detection for the identification of P. tolaasii. As a result of these various analyses, 17 strains (CHM03~CHM19) were identified as P. tolaasii. The phylogenetic analysis based on the 16S rRNA gene showed that all strains were clustered closest to P. tolaasii lineage, two strains (CHM01, CHM02) were not identified as P. tolaasii and have completely different genetic characteristics as a result of fatty acids profile, specific and sensitive PCR, lipopetide detection, rpoB sequence and REP-PCR analysis. Pathogenicity tests showed 17 strains produce severe brown discolouration symptoms to button mushrooms and watersoaking of sporophore tissue within three days after inoculation. But two strains did not produce discolouration symptoms. Therefore, these two strains will be further investigated for correct species identification by different biological and molecular characteristics.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제59권4호
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• pp.351-356
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• 2016

세균성 갈반병은 느타리버섯(Pleurotus ostreatus)의 주된 병중의 하나이다. 박테리오파지를 이용한 파지테라피 방법은 병원균의 농도를 감소시켜 병없는 재배사를 만드는데 성공적이었다. 병원균 사멸을 위한 파지의 이용은 숙주균의 특이성 때문에 매우 제한적 효과를 보이며, 이것은 병원균의 작은 변이에도 파지의 민감성은 크게 감소할 수 있기 때문이다. 본 연구에서는 파지테라피의 효용성을 높이기 위하여 갈반병의 원인균인 P. tolaasii 균주로부터 파지-저항성 변이주를 분리하였고 병원성 특성을 조사하였다. 16S rRNA 유전자의 염기서열 분석을 통한 근연관계 분석에서 파지저항성 균주들은 모두 원래의 숙주균과 일치하였고, 용혈활성이나 갈반형성 능력 등 병원성은 파지저항성 획득과 관련이 없는 것으로 확인되었다. 그럼에도 불구하고, 파지저항성 균주의 다양한 병원성은 균의 종류에 따라 증감이 다르게 나타났다. 따라서, 성공적인 파지테라피를 위해서는 넓은 숙주 범위를 갖는 파지의 분리가 필요하다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제26권3호
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• pp.238-243
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• 1998

느타리버섯의 세균성갈반병균인 P. tolaasii(PT)를 신속 간편하게 검출할 수 있는 효소면역측정법 (ELISA)을 개발하였다. 특이항체를 생산하기 위하여 PT($5{\times}10^7$ cfu)를 Freund's adjuvant와 함께 토끼에 수차례 면역하였으며, 가장 높은 역가를 나타낸 항혈청을 이용하여 비경합 ELISA 및 경합 ELISA를 각각 확립하였다. 표준곡선으로부터 PT의 그 검출한계는 각각 $2{\times}10^2$cfu/ml 및 $3{\times}10^2$cfu/ml가량으로 나타났다. 교차반응은 비경합 ELISA의 경우 P. agarici, P. reactans 및 비병원성 Pseudomonas속 균주와 1/$10^3$이하의 매우 미약한 반응을 보였으나 P. solanacearum, Erwinia chrysanthemi, Streptococcus mutans, Xanthomonas citri 및 곰팡이인 Fusarium oxysporum등 다른 균주와의 반응성이 거의 없었으며, 경합 ELISA의 경우 PT이외에는 같은 속 균주에 대하여도 반응성이 거의 없었다. ELISA를 이용하여 버섯으로부터 분리된 18균주에 대하여 PT의 여부를 조사하였을 때 병원성과 white line 반응성을 동시에 나타내었던 11균주에 대하여만 명확한 양성으로 나타나, 본 연구에서 확립한 ELISA는 간편하고 정확한 PT검출법 임이 확인되었다.

• BMB Reports
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• 제40권1호
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• pp.113-118
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• 2007

Tolaasin, a pore-forming peptide toxin, is produced by Pseudomonas tolaasii and causes brown blotch disease of the cultivated mushrooms. P. tolaasii 6264 was isolated from the oyster mushroom damaged by the disease in Korean. In order to isolate tolaasin molecules, the supernatant of bacterial culture was harvested at the stationary phase of growth. Tolaasin was prepared by ammonium sulfate precipitation and three steps of chromatograpies, including a gel permeation and two ion exchange chromatographies. Specific hemolytic activity of tolaasin was increased from 1.7 to 162.0 HU $mg^{-1}$ protein, a 98-fold increase, and the purification yield was 16.3%. Tolaasin preparation obtained at each purification step was analyzed by HPLC and SDS-PAGE. Two major peptides were detected from all chromatographic preparations. Their molecular masses were analyzed by MALDI-TOF mass spectrometry and they were identified as tolaasin I and tolaasin II. These results demonstrate that the method used in this study is simple, time-saving, and successful for the preparation of tolaasin.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제52권1호
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• pp.28-32
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• 2009

세균독소인 톨라신은 재배버섯에서 버섯균사 및 자실체의 구조를 파괴하여 갈반병을 일으킨다. 톨라신의 세포독성은 톨라신이 적혈구의 세포막에 pore를 형성하여 세포구조를 파괴하기 때문에 용혈활성을 측정하여 평가한다. 저자들은 $Zn^{2+}$와 $Cd^{2+}$에 의한 톨라신의 용혈활성 저해효과를 측정하는 중에 $Ni^{2+}$이 또 다른 저해제로 톨라신의 독성을 억제하는 것을 발견하였다. $Ni^{2+}$에 의한 톨라신 용혈활성의 저해는 농도의존적이었으며, Ki 값은 대략 10mM이었고, 이것은 $Ni^{2+}$이 $Cd^{2+}$에 비하여 저해효과가 높음을 의미한다. 용혈활성은 50mM 이상의 $Ni^{2+}$농도에서 완전히 제거되었으며, $Ni^{2+}$의 효과는 EDTA 첨가에 의해 가역적임을 확인하였다. 톨라신에 의한 용혈활성이 20mM $Ni^{2+}$에 의해서 완전히 억제된 상태에서 EDTA를 가하면 즉각 용혈활성이 나타났다. $Ni^{2+}$에 의한 톨라신 독성의 저해기작은 알 수 없지만, $Ni^{2+}$은 톨라신의 독성과정인 막결합, 분자중합체 형성, pore 형성, pore를 통한 막대한 양의 이온이동 등에 작용할 수 있을 것이다. 된 연구의 결과는 $Ni^{2+}$이 독성과정의 마지막 단계인 pore를 통한 이온이동 과정을 저해함을 보여준다.