• 한국응용곤충학회지
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• 제35권1호
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• pp.66-73
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• 1996

Bacillus thuringiensis subsp. morrisoni PG-14의 cryIVD 유전자를 포함하고 있는 발현벡터 pCYASK5-1을 제작하여 Synechocystis PCCC6803에 형질전환시킨 후, 학질모기(Anopheles sinensis)유충에 대한 독성을 검정하였다. Kanamycin이 포함된 BG-11배지에서 선발된 형질전환체의 cryIVD 유전자 발현은 SDS-PAGE와 West-ern blot분석으로 확인하였다. 형질전환체는 A. sinensis 유충에 대해 높은 독성을 나타내었으며, 성장은 야생주인 Synechocystis Pccc6803과 유사하였다. 또 수심에 따른 형질전환체의 분포도 조사에서 전체적으로 살충농도의 세포수로 분포함을 확인하였다. 이러한 결과들은 B. thuringiensis subsp. morrisoni PG-14의 cryIVD 유전자로 형질전환된 Synechocystis PCCC6803이 모기유충 방제에 효율적으로 이용될 수 있음을 나타내었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제24권2호
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• pp.173-177
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• 1996

Bacillus thuringiensis subsp. morrisoni PG-14 is a gram-positive soil bacterium producing mosquitocidal parasporal inclusions composed of several crystal proteins. Among these crystal protein genes, cryIVD gene is one of major component which has 72 kDa in size. However, these parasporal inclusions sink quickly from the surface of water where mosquito larval feeding occurred. To develope mosquitocidal cyanobacterium, therefore, we constructed the expression vector, pCYASK 5-1 harboring cryIVD gene. The expression vector, pCYASK5-1 was transformed into the cyanobacterium Syne- chocystis PCC6803 reported as a natural mosquito larval food source and the transformants were selected with kanamycin. Expression of IVD gene in transformant was characterized by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and immunoblot analysis. The mosquitocidal activity of a transformant was determined with Culex tritaeniorhynchus. The results showed that, the transformed cyanobacterium is toxic to mosquito larvae and will be expected as a potential agent that is used for mosquito control.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제21권5호
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• pp.428-434
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• 1993

Cloning and expression of two different crystal protein genes from transformed Bacillus thuringiensis were investigated. B. thuringiensis NT0423 is toxic to both Lepidopterous and Dipte-rous larvae. The pCG5 vector carrying crystal protein genes (mosquitocidal and hemolytic activity) of B. thurigiensis subsp. morrisoni PG-14 was transformed into B. thurigiensis NT0423. Transformant has expressed two type crystals of bipyramid from NT0423 and ovoid from pCG5 in one cell.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제40권2호
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• pp.126-130
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• 1998

A noninsecticidal strain, Bacillus thuringiensis NTB-88, isolated from Korean soil, had a typical bipyramidal parasporal inclusion and its serotype is identical to B. thuringiensis subspmorrisoni (H8a8b). To elucidate differences between insecticidal and noninsecticidal strains, we compared strain NTB-88 to other toxic B. thuringiensis subsp. morrisoni strains (HD-12 and PG-14). Restriction endonucleases digested plasmid DNA patterns showed that strain NTB-88 was different from lepidopteran-toxic strain, HD-12, but it was similar to dipteran-toxic strain, PG-14. The gene type of strain NTB-88 was different from those of other insecticidal strains, Furthermore, the NH2-terminal amino acid sequence of crystal protein of strain NTB-88 had no relation to those of the previously known $\delta$-endotoxins in other toxic strains as well as HD-12 and PG-14 strains. Therefore, the noninsecticidal crystal protein in strain NTB-88 is novel and its property is different from insecticidal ones.

• 한국응용곤충학회지
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• 제35권1호
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• pp.85-90
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• 1996

국내에서 분리된 Bacillus thuringiensis NT0423은 나비목과 파리목 곤충에 독성을 보이는 130 kDa의 전형적인 다이아몬드형 내독소 단백질을 생성한다. 이 균주의 파리목에 대한 독성을 강화하기 위하여, B. thuringeinsis NT0423에 모기 유충에 강한 독성을 보이는 B. thuringiensis subsp. morrisoni PG-14의 cryVID유전자를 가지고 있는 pCG10 플라스미드를 electroporation 방법을 이용하여 형질전환하였다. 형질전환체인 B. thuringiensis PT1227내에서 cryIVD와 숙주가 생성하는 원래의 다이아몬드형 130kDa 내독소 단백질 유전자는 그 자신의 형태로 잘 발현되었다. 형질전환체의 모기 유충에 대한 독성은 원래 숙주의 내 독소 단백질과ㅏ 도입된 CryIVD의 상승효과에 의해 현저히 증가하였다.

• 농약과학회지
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• 제2권1호
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• pp.91-96
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• 1998

모기에 독성을 보이는 cry11Aa 유전자를 발현시키기 위해 cyanobacteria와 E. coli에서 발현 될 수 있는 두 가지 상이한 벡터 (pCYASK5-1, pCYASK5-2)를 제작하였다. 구축한 두 벡터를 E. coli에 형질전환하여 cry11Aa 유전자의 발현을 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE)와 Western blot analysis을 통해 조사한 결과, pCYASK5-1와 pCYASK5-2으로 형질전환된 E. coli는 각각 72kDa과 64kDa 크기의 cry11Aa 유전자를 발현하였다. 형질전환체의 모기살충성을 조사한 결과, pCYASK5-1과 pCYASK5-2을 가지는 형질전환체는 빨간집 모기유충(Culex pipiens)에 대해 각각 93%, 89%의 치사율을 보였다.