식물생육을 촉진하고 고추역병균을 방제하는 다기능 PGPR 균주 Bacillus subtilis AH18 항진균성 cellulase 유전자를 PCR을 이용해 pUC18과 재조합 후 E. coli DH5$\alpha$에 cloning하여 E. coli내에 발현시켰으며, 그 형질전환 균주를 E. coli DH5$\alpha$(pCM 41)이라 명명하였고, 발현된 cellulase를 ce/H라 하였다. E. coli DH5$\alpha$(pCM 41)의 inset 부위는 B. subtilis AH18의 1,582 bp 유전자를 포함하며 cellulase의 유전자는 1,524 bp로 508개의 amino acid가 암호화된 것으로 추정되었고, CMC를 함유한 SDS-PAGE의 방법으로 약 55 kDa의 분자량을 확인하였다. B. subtilis AH18이 가지는 ce/H는 3종의 대표적인 Bacillus spp.들의 cellulase 유전자의 DNA와 아미노산 배열이 98% 이상 유사하였으며, CMC(carboxymethyl-cellulose) 뿐만 아니라, 불용성 섬유소인 Avicel, filter paper(Whatman No. 1) 특히 고추역병균인 Phytophthora capsici의 건조 cell wall도 분해하였다. 또한 colH의 cellulase는 $50^{\circ}C$에서 효소활성이 가장 높았으며, 최적 pH는 pH 6.0이었다. 그리고 $AgNO_3$ 또는 $CoCl_2$ 첨가시 활성이 1.7배, 2배 정도 증가하였고 $HgC1_2$ 첨가시는 활성이 20%까지 떨어졌다. 또한 여러 화학 저해제들 중 Sodium azide 또는 Hydroxy urea는 효소 활성을 증가시켰으며, CDTA 또는 EDIA는 섬유소분해능을 감소시켰다. 이들의 결과는 고추역병균 P. capsici의 생육을 억제하는 B. subtilis AM18의 진균세포벽 용해성 cellula의 효소학적 특성을 구명한 것이라고 할 수 있다.
전통 장류 제품 내 유해한 biogenic amines 양을 감소하기 위해, 83종의 전통 장류에서 biogenic amines을 분해할 수 있는 5종의 균주들을 분리하였다. 이들 균주들을 histamine, tyramine, putrescine, cadaverine이 각각 5.3% 함유된 삶은 콩에 접종하여 10일 간 발효시킨 결과 biogenic amines 함량을 27-92% 수준으로 감소시켰다. 선발한 균주들의 형태 및 생화학적 특성, 16S rRNA 유전자 서열 해독 결과 5종의 균주들은 Bacillus subtilis 또는 B. amyloliquefaciens에 속했다. 이 선발 균주들을 사용함으로서 biogenic amines 수준을 제어하기 힘든 전통 장류의 제조에 이 선발 균주들의 사용은 이들 함량을 줄일 수 있는 효과적 방안이 될 수 있다.
가정에서 제조된 된장으로부터 cellulase 생산균으로 분리된 고온성 WL-12는 형태적 특성, 생화학적 성질 및 16S rRNA의 염기서열에 근거하여 Bacillus licheniformis로 동정되었다. B. licheniformis WL-12의 cellulase 유전자를 클로닝하여 그 염기서열을 결정한 결과 cellulase 유전자(celA)는 517 아미노산으로 구성된 단백질을 코드하며 1,551 뉴클레오티드로 이루어졌다. 아미노산 잔기배열을 분석한 결과 WL-12의 cellulase는 활성영역과 cellulose 결합영역으로 구성되어 있었으며, glycosyl hydrolase (GH) family 5에 속하는 B. licheniformis, B. subtilis와 B. amyloliquefaciens의 cellulase와 높은 상동성을 보였다. 클론된 celA를 발현용 vector에 도입하여 B. subtilis에서 발현시켜 cellulase 최대생산성이 7.0 units/ml에 이르렀다.
가축 사료첨가용 probiotics용 균주를 얻기 위해 특히 내열성이 높아 가공사료에 적합한 Bacillus sp.를 위주로 하여 가축에게 유용한 효소인 phytase를 비롯하여 protease, cellulase, xylanase, amylase의 활성을 모두 나타내는 4-3 균주를 얻어 동정한 결과 Bacillus subtilis로 밝혀졌으며, 이를 B. subtilis 4-3으로 명명하였다. 본 균주를 원료사료에 순수배양하여 사료의 항영양인자인 phytic acid 분해율을 검토한 결과 대두박 및 쌀겨에 있어서는 phytic acid 분해율이 낮았으나, 밀기울의 경우 80.63%로 상대적으로 높은 phytic acid 분해율을 나타내었다. 원료 사료를 이용한 균주의 생산 조건은 대두박 1%(w/v)와 당밀 2%(w/v)가 가장 적합한 균주 생산을 위한 배지조성으로 검토되었다.
Soybean seeds were fermented by Bacillus subtilis and/or Lactobacillus bulgaricus to improve solubility, viscosity, water holding capacity and oil holding capacity of soybean proteins in Chongkukjang. The maximum colony forming unit and protease activity of B. subtilis or L bulgaricus were observed after 60 hours of fermentation, and those of the mixed fermentation by two microorganisms were steadily increased during the fermentation periods. Solubilities of soybean proteins by B. subtilis or L bulgaricus were steadily increased before the values were considerably increased to 60 hours of fermentation, whereas water holding capacities of the proteins were decreased by B. subtilis or L. bulgaricus and those of the mixed fermentation were decreased progressively. Viscosities of soybean proteins by B. subtilis and/or L. bulgaricus were decreased progressively during the fermentation. Viscosities of soybean proteins by B. subtilis and/or L. bulgaricus were decreased progressively during the fermentation. Oil holding capacities of soybeans by B. subtilis or L. bulgaricus were maximum at 20 or 80 hours of fermentation and those of the mixed fermentation were decreased after 10 hours of the fermentation.
A strain producing soybean paste flavor was isolated from traditional Korean soybean paste. The isolate was identified as Bacillus subtilis PM3. The neutral fraction representing the traditional soybean paste aroma was obtained from the whole volatile components produced by B. subtilis PM3 in cooked soybean. Each separated peak from the neutral fraction of gas chromatogram was identified by gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS) and Kovat's retention index, and the aromas of each peak were investigated by a sniffing test with the exercise panel. The twenty-nine components, including six character impact compounds and twelve components of flavors of Korean soybean paste, were confirmed. Some regions of gas chromatogram represented the soybean paste odor. It has been confirmed that traditional Korean soybean paste can be manufactured with the strain B. subtilis PM3.
A DNA fragment containing the gene for cell wall hydrolase of alkalophilic Bacillus subtilis BL-29 was cloned into E. coli JM109 using pUC18 as a vector. A recombinant plasmid, designated pCWL45B, was contained in the fragment originating from the alkalophilic B. subtilis BL-29 chromosomal DNA by Southern hybridization analysis. The nucleotide sequence of a 1.6-kb HindIII fragment containing a cell wall hydrolase-encoding gene was determined. The nucleotide sequence revealed an open reading frame (ORF) of 900 bp with a concensus ribosome-binding site located 6 nucleotide upstream from the ATG start codon. The primary amino acid sequence deduced from the nucleotide sequence revealed a putative protein of 299 amino acid residues with an M.W. of 33, 206. Based on comparison of the amino acid sequence of the ORF with amino acid sequences in the GenBank data, it showed significant homology to the sequence of cell wall amidase of the PBSX bacteriophage of B. subtilis.
Park Shin-Young;Heo Yun-Jeong;Choi Young-Seok;Deziel Eric;Cho You-Hee
Journal of Microbiology
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제43권5호
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pp.443-450
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2005
The multi-host pathogen, Pseudomonas aeruginosa, possesses an extraordinary versatility which makes it capable of surviving the adverse conditions provided by environmental, host, and, presumably, competing microbial factors in its natural habitats. Here, we investigated the P. aeruginosa-Bacillus subtilis interaction in laboratory conditions and found that some P. aeruginosa strains can outcompete B. subtilis in mixed planktonic cultures. This is accompanied by the loss of B. subtilis viability. The bactericidal activity of P. aeruginosa is measured on B. subtilis plate cultures. The bactericidal activity is attenuated in pqsA, mvfR, lasR, pilB, gacA, dsbA, rpoS, and phnAB mutants. These results suggest that P. aeruginosa utilizes a subset of conserved virulence pathways in order to survive the conditions provided by its bacterial neighbors.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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