• 한국균학회지
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• 제49권2호
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• pp.199-209
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• 2021

본 연구는 양송이 배지의 관행 발효기술을 개선하고자 실험을 실시하였다. 양송이 볏짚 배지 발효단계에서 우점하는 Bacillus strain CY-24 균주를 순수분리하여 16S rDNA 염기서열을 통한 동정 결과 Bacillus licheniformis로 밝혀졌다. B. licheniformis 최적 생육 온도는 30℃, 최적 생육 pH는 6.0에서 가장 생육이 활발한 것을 확인하였으며, B. licheniformis CY-24 균주는 glycerol, glycogen, L-arabinose, D-ribose, D-xylose, D-galactose, D-glucose, D-fructose, D-mannose 등의 탄소원을 잘 활용하였고, 효소활성 측정 결과 esterase, leucine arylamidase, acid phosphatase, β-glucosidase 등에서 양성반응을 나타내었다. CMCase 활성 온도는 50℃, PGase는 60℃에서 가장 효과가 극대화되었으며, CMCase, PGase 두 효소는 60℃ 이상에서도 안정성이 유지되는 것을 확인하였다. 금속이온의 촉매 효과는 CoCl₂ 1mM에서 가장 활성이 높은 것으로 나타났다. B. licheniformis CY-24의 효소학적 특성은 매우 우수하였으며, 양송이 재배에 사용되는 배지를 생산하는 과정에 효소의 작용은 볏짚의 발효 촉진과 연화 작용에 밀접한 관계가 있으므로 유용생물자원으로써 발효기술에 대한 기초자료로 이용될 수 있을 것으로 판단된다. 추후 다양한 미생물과 버섯균의 상호작용에 대한 면밀한 연구가 이루어진다면 유용한 자원으로 이용 될 수 있을 것으로 생각된다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제5권1호
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• pp.18-21
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• 1995

Endoglucanase gene of Pseudomonas sp. LBC505 was previously cloned in pUCl9 to yield plasmid pLC1. overproduction of endoglucanase was attempted by following ways. First, the endoglucanase gene of Pseudomonas sp. LBC505 cloned in pUCl9(pLC1) was tandemly inserted, step by step, into a expression vector pKK223-3 in a directly repeated form to enhance productivity of endoglucanase. Escherichia coli containing pKCC30 among the resulting plasm ids showed the higher yield of the endoglucanase. Ecoli harboring pKCC30 which had three inserted endoglucanase genes expressed about 12.3 times as much CMCase activity as Ecoli harboring pLCl. Second, the endoglucanase gene was subcloned into Bacillus subtilis expression vector pgnt41 for both overproduction and extracellular secretion of the endoglucanase. A resulting plasmid pgntc15 in Bacillus subtilis expressed 4.3-fold higher levels of CMCase activity than that of E.coli harboring pLCl and the endoglucanase produced was entirely secreted into the culture medium.

• 생명과학회지
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• 제23권6호
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• pp.757-769
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• 2013

섬유소 분해효소(carbxymethylcellulase)를 생산하는 미생물을 해수에서 분리하여 16S rDNA 및 gyrase 유전자의 염기서열을 분석하여 동정한 결과, Bcaillus velezensis로 확인되었으며 B. velezensis A-68로 명명하였다. 이 균주가 생산하는 섬유소 분해효소의 생산 조건을 최적화하기 위하여 통계학적 방법인 response surface method (RSM)를 사용하였다. 이 균주의 생육에 최적인 왕겨, 효모 추출물 및 배지의 초기 pH는 60.2 g/l, 7.38 g/l 및 7.18이었으나, 섬유소 분해효소 생산에 최적인 왕겨, 효모 추출물 및 배지의 초기 pH는 50.0 g/l, 5.99 g/l 및 7.30이었다. 통계학적인 분석 결과, 균주의 생육 및 균주의 섬유소 분해효소 생산에 가장 큰 영향을 미치는 것은 효모 추출물이었다. 이 균주의 생육과 섬유소 분해 효소의 생산에 최적인 $K_2HPO_4$, NaCl, $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ 및 $(NH_4)_2SO_4$의 농도는 각각 7.50, 1.00, 0.10, and 0.80 g/l이었다. 이 균주의 생육 및 섬유소 분해효소 생산에 최적인 온도는 각각 $30^{\circ}C$ 및 $35^{\circ}C$로 생육에 최적인 조건과 섬유소 분해효소 생산에 최적인 조건이 다름을 알 수 있었다. 이 균주가 생산하는 섬유소 분해효소의 생산성은 83.8 m/l이며, 이는 최적화하기 전의 생산성에 비하여 3.3배 증가한 것이다. 이 연구를 통하여 농업 부산물인 왕겨를 섬유소 분해효소 생산을 위한 기질로 개발하였으며, 해수에서 분리한 미생물을 사용함으로써 섬유소 분해효소의 생산기간을 3일로 단축할 수 있었다.

• 한국식품과학회지
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• 제23권1호
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• pp.31-36
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• 1991

고온, 알칼리성 Bacillus sp. F204의 CMCase 유전자를 pUC19의 HindIII부위에 연결하여 전이된 E.coli 형질전환체 중 2개의 재조합 플라스미드 즉, pBC191과 pBC192를 선발하였는데, 이들은4.6 Kb와 5.8 Kb HindIII 절편을 각각 함유하고 있었다. pBC191의 4.6 Kb HindIII 절편을 BamHI, EcoRI, KpnI, PvuII 부위가 각각 1개씩 존재하였다. Dioxigenin-labeled deoxyuridin-triphosphate에 4.6 Kb 절편을 표식한 것을 probe로 하여 상동성을 검정한 결과 모균주와 강한상동성이 없었고, 면역학적 실험에서도 Bacillus sp. F204 유래임이 인정되었다. pBC191의 4.6 Kb 절편을 E.coli의 발현 벡타인 pKK223-3과 Bacillus vector인 pGR71에 연결시켜 구축한 pKC231과 pGC711은 각각 pBC191에 비하여 효소활성이 3.2배와 2.8배정도 증가되었으며, 그리고 E.coli에서는 대부분 세포내와 periplasmic 분획에서 검출되었다. 기질 특이성을 조사한 결과에 의하면 pBC191과 pBC192는 CMCase gene을 코딩하고 있는 것으로 나타났다.

• 생명과학회지
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• 제14권1호
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• pp.193-197
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• 2004

A continuous enrichment culture procedure was used to isolate bacteria from various soil sources capable of suppressing large patch disease of turfgrass. Six isolates consistently suppressed large patch in turfgrass, and ranged in the spectrum of extracellular enzymes that they expressed. The best disease- suppressing isolate, TBM912, expressed protease, CMCase, and pectinase activity and inhibited the growth of Rhizectonin solani and Betrytis cinerea in vitro. Here we show that this strain also produces an antibiotic that was identified by TLC, SDS-PACE and HPLC analysis as lipopeptide.

• 생명과학회지
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• 제22권6호
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• pp.799-806
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• 2012

발효된 버섯배지 및 부엽토 등으로부터 80여 종의 균주를 1차 분리하여 CMCase, amylase 및 protease활성이 높고 버섯질병균주에 대한 항균활성이 높으면서 표고버섯 및 팽이버섯의 생육에는 전혀 영향을 미치지 않는 HJ-57 항균미생물을 최종 분리균주로 선정하였다. 최종 선정한 HJ-57 항균미생물을 동정한 결과 Bacillus sp. HJ-57로 밝혀졌으며, 배양을 위한 배지의 초기 pH는 pH 7, 배양온도는 $35^{\circ}C$가 최적인 것으로 나타났다. Bacillus sp. HJ-57균주는 12 hr 배양하였을 때는 약간의 항균활성을 나타내었지만, 배양 36~48 hr 배양하였을 때는 비교적 높은 항균활성을 나타내었다. Bacillus sp. HJ-57 항균미생물은 팽이버섯 재배농가에서 사용하는 콘코프 함유배지상에서도 버섯질병균주인 세균 및 곰팡이에 대하여 매우 높은 항균활성을 나타내었다.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제50권5호
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• pp.713-720
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• 2008

본 연구는 톱밥주원료 버섯부산물의 효과적 사료화를 위한 균주개발을 목적으로 버섯부산물로부터 섬유소분해력이 높은 고온성 균주를 분리 동정하고 균주생산을 위한 배지의 최적화 조건을 도출하고자 실시하였다. Xylanase와 CMCase 활력이 상대적으로 우수한 것으로 선발된 고온성 균은 3, 201-7번으로서 동정한 결과 Bacillus spp.에 속하는 균주로 B. subtilis KU3, B. subtilis KU201-7로 각각 명명하였다. 균주생산을 위한 최적 액상배양조건에 있어서 B. subtilis KU3은 질소원으로 yeast extract 3%(w/v)에서, 탄소원으로 maltose 1%(w/v)에서 성장이 가장 좋았다. B. subtilis KU201-7은 질소원으로 yeast extract 0.5%(w/v)에서, 탄소원으로 CMC 0.5%(w/v)에서 성장이 가장 좋았다.

• 생명과학회지
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• 제22권2호
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• pp.142-147
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• 2012

효모 Saccharomyces diastaticus가 포자형성기에 세포질에서 생산된다고 알려진 포자형성 특이 glucoamylase (SGA)가 세포 외로 분비되는 단백질임을 증명하고자 S. dastaticus의 SGA promoter와 예상되는 분비신호서열 다음에 reporter gene으로 사용한 고초균의 CMCase 구조유전자를 융합한 재조합 플라스미드 pYSC25를 제작하고 수주세포인 S. diastaticus YIY345에 형질전환 하였다. 형질전환체를 1% CMC를 포함하는 최소한천배지에서 배양한 후 Congo red 염료로 염색하여 생성된 투명환으로부터 SGA의 분비서열에 의해 세균의 CMCase가 효모세포외로 분비되는 것을 확인하였다. 효모세포부위 별 CMCase의 활성분포를 측정하여 SGA 분비서열의 분비효율을 추정하기 위해 효모세포 배양액을 배양상등액, periplasmic 및 세포질 분획으로 나눈 다음 효소활성을 측정한 결과 CMCase 활성의 76%가 배양상등액과 periplasmic 부위에 존재하였으며 N-연결형 당쇄가 일어났으므로 SGA 분비서열은 효과적으로 작용함을 알 수 있었다. 대조균인 고초균에서 생산된 CMCase에서는 당쇄가 일어나지 않은 것을 확인하였다. 이상의 결과로부터 SGA는 아미노 말단에 존재하는, 24개의 아미노산으로 구성된 분비서열을 보유한 분비성 단백질임을 확인하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제2권1호
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• pp.7-13
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• 1992

A moderately thermophilic, alkalophlic and powerful crystalline cellulose-digesting bacterium, Bacillus K-12, was isolated from filter paper wastes and found to be similar to Bacillus circulans or Bacillus pumilis, except for its ability to grow at a moderately high pH and temperature. The isolate grew at a pH ranging from 6 to 10 and at a temperature ranging from 35 to $65^{\circ}C$ and produced a large amount of cellulase components containing avicelase, xylanase, CMCase, and FPase when grown in avicel medium for 5 to 7 days at $50^{\circ}C$. The crude enzyme preparation from the culture broth hydrolyzed xylan, raw starch, pullulan and ${\beta}-1,3$ glucan such as laminarin. Furthermore, the enzyme hydrolyzed crystalline cellulose to cellobiose and glucose and had a broad pH activity curve (pH 6~9). The enzyme was stable up to $70^{\circ}C$.

• 한국식품영양학회지
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• 제6권4호
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• pp.314-321
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• 1993

We have cloned the Bacillus cellulyticus K-12 avicelase (Avi, E.C.3.2.1.4) gene (ace A) In E. coli. This was accompanied by using the vector PT7T3U 19 and Hind W -Hind m libraries of Bacillus cellulyticus K-12 chromosomal inserts created in 5.cofi. The Libraries were screened for the expression of avicelase by monitoring the immunoreaction of the anti-avicelase (immunoscreening). Positive clones (Ac-3, Ac-5, and Ac-7) contained the identical 3.5kb Hind III fragment as determined by restriction mapping and Southern hybridization, and expressed avicelase efficiently and constituvely using its own promoter in the heterologous host. From the immunoblotting analysis, a polypeptide which showed a CMCase activity with an Mr of 54000 was detected.