Bacillus stearothermophilus No.239 isolated from soil was mutated with N-methyl-N'nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) to yield a series of mutants with increasing levels of cyclomalto-dextrin glucanotransferase (EC 2.4.1.19` CGTase) production. After five consecutive mautation steps, a mutant MNNG 8 with about 14 times of CGTase activity than the parent strain was obtained.
고온 호알카리성 Bacillus K-17의 xylanase유전자의 구조해명과 대량 생산 균주를 개발하기 위채 Bacillus K-17의 염색체를 pER 322를 사용하여 E. coli에 형질전환시켜 xylanase 활성을 나타내는 형질전환체를 얻었다. 이 형질전환체에서 hybrid plasmid를 분리하여 제한효소로 mapping하였고 이 유전자가 Bacillus K-17유래인가를 hybridization에 의해 확인하였다. Recombinant plasmid pAX 1113은 5.1kb HindIII 절편을 가졌으며 BgIII site가 두곳, ECoRI과 pst site가 한곳이었으며 효소를 정제한 결과 Bacillus K-17이 생산하는 두 가지 xylanase중에서 xylanase I과 동일하였다.
고온 호알카리성 Bacillus K-17의 Protease gene의 구조해명과 성질을 알기 위해서, E. coli HB101에 pER 322를 Vector로 하여 Protease gene을 Cloning하여 형질전환 된 균주를 선정하였다. 선정균주의 pretense activity를 Bacillus K-17의 상대활성도와 매우 유사하였으며 균체외에 보다 많은 효소 활성도를 지니고 있었다. 제한효소 Hind III로 절단하면 약 1.8kb와 0.4kb의 2개의 fragments 가 생성되었으며 Southern hybridization 결과 Cloning 된 gene이 Bacillus K-17에서 유래된 것임이 확인되었다.
1. Cooked soybean was fermented for about a week by Bacillus megatherium 88-3, D-28 and D-28a; and compared with the cooked soybean which was not fermented, this fermented soybean showed much increase in vitamin $B_{12}$ and $B_2$, while vitamin $B_1$ decreased. 2. In the process of fermenting the cooked soybean, Bacillus megatherium, 88-3 is the bacteria which produces brown pigment; and Bacillus megatherium D-28 and D-28a is the bacteria which produces yellow pigment. 3. In weight, fermented soybean-fed rat showed more increase than the unfermented soybean-fed rat. But the growth of the rat fed with Bacillus megatherium 88-3 fermented soybean was not good. Probably, this phenomenon came from the trouble in rat's metabolism by brown pigment. 4. In food efficiency, Bacillus megatherium D-28a is 4.3% lower than Bacillus megatherium B-938, but it is 17.l% higher than the unfermented cooked soybean. Bacillus megatherium 88-3, which is 47.1% lower in food efficiency than the unfermented cooked soybean, has been found "not good" in the growth of rat.th of rat.
알카리 내성 Bacillus sp. YA-14의 chromosomal DNA로 부터 유래된 promoter를 subcloning하여 그 생화학적 특성과 포자형성과의 관계를 조사하였다. 알카리내성 Bacillus sp.와 B.subtilis에서 promoter의 활성은 포자가 형성되기 시작하는 단계에서 증가하기 시작했다. 또한 배지내 glucose가 1.0(w/v) 첨가시 promoter 활성이 억제되었다. 5가지의 spoO 유전자 중에서 3가지 유전자 (spoOB, spoOH, spoOJ) 산물이 promoter 활성에 필요하다.
토양에서 분리한 알카리 내성 Bacillus sp. YA-14 의 promoter를 Bacillus promoter probe vector인 pPL703을 이용하여 Bacillus subtilis내에 cloning 하였다. 얻어진 형질전환체 중 promoter 활성이 가장 높은 균주의 CAT 비활성은 8.07로 expression vector인 pPL708의 CAT 비활성보다 2.5배 이상 높았으며 대수 증식기가 끝난 이후에 그 활성이 급격하게 증가하였다. 재조합 plasmid내의 삽입 DNA 단편은 그 크기가 2.8kb이고 제한효소 BamHI, Sal I 인식부위가 각각 한군데 존재하였다.
The production and the characteristics of protease produced by Bacillus sp. SH-8 and Bacillus sp. SH-8M were investigated under the different pH conditions. Bacillus sp. SH-8 and Bacillus sp. SH-8M showed the maximum activity of protease at 60 hours(70 units/ml) AND 96 houre(50 units/ml) cultivation, respectively, under the alkaline condition(pH 10.2). However, Bacillus sp. SH-8M exhibited the maximum activities in 8 days cultivation at pH 6.9 and in 6 days cultivation at pH 7.7 Bacillus sp. SH-8M showed the protease activity at the pH change from alkaline to neutral condition, whereas Bacillus sp. SH-8 did not. In addition. all the enzymatic characteristics of protease produced by Bacillus sp. SH-8 and Bacillus sp. SH-8M were similar with the regardless of different pH conditions.
본 연구에서는 가지과 작물의 근권에서 유용한 균주를 분리하고 근권ㆍ길항ㆍ생육촉진미생물을 선별ㆍ제제화하고 상토에 첨가하여 미생물제제 혼입 상토를 제조한 후 고추 플러그묘의 초기 생장에 미치는 영향을 조사하였다. 근권미생물로는 가지과 작물의 뿌리 및 재배 토양 등 385점의 균원시료로부터 540여점을 분리한 후, 가지과 작물에 공통적으로 발생되는 Alternaria solani, Botrytis cinerea, Fusarium oxysporium, Phytophthora capsici, Sclerotinia sclerotiorum 등의 병원균에 높은 길항력을 가진 미생물 20여종을 선발하고, 이들 길항미생물 중에서 고추의 초기 생육을 촉진시키는 MJ-3균주를 최종 선발하였다. 근권ㆍ길항ㆍ생육촉진미생물인 분리주 MJ-3은 Bergey's manual of systematic bacteriology의 방법과 16S rDNA sequence법 등으로 조사하여 Bacillus amyloliquefaciens동정하였다. 제제화한 B. amyloliquefaciens를 상토에 첨하여 미생물 혼입 상토를 제조하였고, 이를 이용하여 재배한 고추 플러그 묘는 초장과 경경, 뿌리길이, 생체중량 등이 모두 대조구에 비해 소량 증가되었으나, 특히 뿌리의 생체중량이 대조구가 0.61g/plant인데 비해 시험구는 0.88g/plant로 44.3% 증가하였다. 미생물제제 첨가 상토에서 재배한 고추의 gib-berellin (GA$_1$) 함량은 0.559ng/g(건조중량)이었다.
채소류 모잘록병균인 Pythium ultimun에 길항하는 미생물을 분리하기 위해 체소류 뿌리를 균원시료로 하여 약600여종의 근권미생물을 분리하였고, 그중 5종의 근권미생물이 길항력을 나타내어 가장 높은 길항력 높은 Yl-37 균주를 최종 선별하였다. 분리한 길항균 YJ-37을 Bergey's Mannual of Systematic Bacteriology의 방법에 준하여 미생물의 형태학적, 배양학적, 생리·생화학적 특성을 조사 하였으며, 미생물의 세포벽의 지방산의 조성으로 자동 동정하는 Sherlock system을 이용하는 방법과 16S rDNA의 부분염기서열을 결정하여 동정하는 방법 등 3가지 방법으로 조사한 결과, 근권 길항미생물인 YJ-37 균주는 Bacillus ehimensis로 동정되었다. 채소류 모잘록병균 Pythium ultimun과 Rhizoctonia solani AG-4 이외에도 B. ehimensis YJ-37에 의한 병원성 진균의 길항력을 조사한 결과, Alternaria altrata, Collectotrichum gloeosporioides, Didymella bryoniae, Fu-sarium moniliforme, F oxysporum, F. oxysporum cucumerinum, F. oxysporum niveum, Gloeosporium sp., Glomerella sp., G. cingulata, G. lagenaria, Penicillium digitatum, P. itazicum, Phytophthora capsici, Sclerotinia sclerotiorum, Stemprhyzium solani등 대부분의 병원균에 대해서 항진균 활성을 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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