• 한국미생물·생명공학회지
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• 제10권4호
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• pp.259-265
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• 1982

Bacillus circulans F-2 $\alpha$-amylase에 의한 각종 oligosaccharide의 분해산물을 조사하고, Bacillus circulans F-2 $\alpha$-amylase, Bacillus amyloliquefaciens $\alpha$-amylase, Rhizopus niveus glucoamylase에 의한 각종 생전분의 분해율을 비교 검토한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 공시 oligosaccharide중 Bacillus circuians F-2 $\alpha$-amylase는 maltose와 maltotriose를 분해시키지 못하였으나 meltotetraose이상의 oligosaccharide는 분해시켰다. maltotetraose, maltopentaose, maltoheraose, maltoheptaose, maltooctaose중 maltotetraose의 분해가 가장 미약하였다. 2. soluble starch, amylopectin, amylose, oyster glycogen중 oyster glycogen의 분해율이 약간 낮았다. 3. corn starch의 분해율은 진탕반응이 정치반응보다 높았으나 potato starch에 대하여는 효소의 종류에 따라 일정치 않았다. 4. corn, rice, arrowroot, high amylose corn, banana, sago, yam, potato starch에 대하여 Bacillus circulans F-2 $\alpha$-amylase가 Bacillus amyloquefaciems $\alpha$-amylase, Rhizopus niveus glucoamylase보다 월등하게 높은 분해율을 나타내었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권6호
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• pp.479-485
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• 1986

Bacillus amyloliquefaciens가 생성하는 액화형 $\alpha$-amylase의 구조유전자를 클로닝하기 위하여 이 균주 염색체의 2 - 5kb 획분을 분리하여 Mbo I으로 부분분해한 후 pUB110플라스미드의 BamHI 부위에 삽입하여 hybrid vector pSKS3 를 제작하였다. 이 재조합플라스미드를 세한수식결손 세포인 Bacillus subtilis ED 107에서 subcloning한 후 당화형 $\alpha$-amylase를 생성하는 Bacillus subtilis NA 64의 $\alpha$-amylase결실변이주 Bacills subtilis KM 107 주에서 형질 발현시켰다. 이때 형질전환빈도는 $10^{-5}$ - $10^{-7}$정도였으며 그중 약 50%가 $\alpha$-amylase 분비능이 있었으나 거의 대부분이 쉽게 실활되었다. 최종선별과정에서 $\alpha$-amylase를 가장 강하게 생성하는 형질전환주 Bacillus subtilis KM213으로부터 재 추출한 재조합플라스미드 pSKS3는 5.7kb 삽입된 단편이 BamH I/Mbo I 부위에 결합되어 있었다. pSKS3에 클로닝된 유전자에 의해 발현되는 $\alpha$-amylase 활성은 B. amyloliquefaciens 활성의 약 25%였으며, 이 pSKS3에 의해 발현되는 $\alpha$-amylase 단백은 B.amyloliquefaciens의 $\alpha$-amylase와 동일한 전기영동성을 나타내었음을 볼 때 pSKS3에 클로닝된 유전자는 B. amyloliquefaciens에서 유래함을 알 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권2호
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• pp.161-168
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• 1986

E. coli-S. cerevisiae shuttle vector인 plasmid YRp7을 이용하여 B. amyloliquefaciens의 $\alpha$-amylase gene을 E. coli 내에 cloning하였다. 이때 제한 효소 Sau 3 AI에 의해 얻어진 $\alpha$-amylase gene의 크기는 약 1.95kb정도였으며 E. coli내에서 비교적 안정하게 유지되고 발현되었다. 재조합 plasmid p-EA24를 함유한 E. coli는 B. amyloliquefaciens의 약 65% 정도의 $\alpha$-amylase를 생성하였으며, 최적온도, pH, CaCl$_2$의 영향등 $\alpha$-amylase의 효소학적인 성질을 비교 조사해 본 결과 B. amyloliquefaciens의 $\alpha$-amylase와 동일하였다. 또한 E. coli에서 생성된 $\alpha$-amylase로 70% 정도가 periplasmic space에 존재하였으며 나머지는 세포 내부에 존재함을 알았다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제40권4호
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• pp.296-302
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• 2012

국내 사찰에서 제조된 된장으로부터 내열성 ${\alpha}$-amylase 생산균으로 분리된 YB-1234는 형태적 특성, 생화학적 성질 및 16S rRNA 유전자 염기서열에 근거하여 Bacillus licheniformis로 동정되었다. B. licheniformis YB-1234의 ${\alpha}$-amylase 유전자를 클로닝하여 그 염기서열을 결정하였으며 그로부터 유추된 ${\alpha}$-amylase의 아미노산 서열은 glycosyl hydrolase family 13에 속하는 B. licheniformis의 내열성 ${\alpha}$-amylases와 매우 높은 상동성을 보였다. ${\alpha}$-Aamylase 유전자를 함유한 재조합 대장균과 B. licheniformis에 의해 각각 생산된 ${\alpha}$-amylase는 pH 6.0에서 최대활성을 보였으나, 최적 반응온도는 약간의 차이가 있었다. 또한 B. licheniformis로부터 ${\alpha}$-amylase는 재조합 대장균에서 생산된 효소보다 열안정성이 매우 높았다. 이들 효소에 의한 maltotetraose와 maltohexaose의 주된 가수분해산물로는 glucose, maltose 및 maltotriose가 관찰되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권2호
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• pp.122-127
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• 1991

A bacterial strain NO. 32 which produced thermostable ${\alpha}$-amylase was isolated from soil and identified to genus of Bacillus. To enhance ${\alpha}$-amylase productivity, a successive mutation of Bacillus sp. No. 32 was attempted with treatment of N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG). The resulting mutant, Bacillus sp. No. 32H417, which is risistant to refampicin and deficient in spore formation, produced about 90-fold high level of ${\alpha}$-amylase when compared with parental strain. The properties of the enzyme for thermostability were investigated. The optimal temperature and pH for enzyme reaction were 95$^{\circ}C$ and pH6.5, respectively, in the presence of 0.3mM $Ca^{2+}$ as an effective stabilizer.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제2권2호
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• pp.115-121
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• 1992

In order to broaden the spectrum of substrate utilization of a Gram negative bacterium Zymomonas mobilis which has a great potential as an industrial ethanol producing microorganism, cloning of $\alpha$-amylase gene into Z. mobilis ZM4 was tried. The $\alpha$-amylase gene was isolated from Bacillus stearothermophilus. By Southern blot analysis, it was proven that the $\alpha$-amylase gene fragment was originated from a naturally occuring plasmid of B. stearothermophilus ATCC 31195. To place $\alpha$-amylase gene under the control of Z. mobilis promoter, two different Z. mobilis expression vectors, pZA26 and pLOI204, were used. The truncated $\alpha$-amylase gene was then introduced into these vectors. Both qualitative and quantitative activities of $\alpha$-amylase were observed in Z. mobilis cells harboring these plasmids with the $\alpha$-amylase gene inserted. Gas chromatographic analysis of ethanol showed that one of the Z. mobilis transconjugants was capable of producing 67 mM ethanol from rich medium(RM) containing 5% soluble starch as a sole carbon source.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권5호
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• pp.464-469
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• 1991

$\alpha$-Amylase를 생산하는 Bacillus sp. 2B를 토양에서 분리하였으며 이 균주에 반복적으로 돌연변이원인 NTG를 처리하여 효소생산성이 증대된 변이주를 유도하였다. $\alpha$-Amylase 고 생산성 균주의 효율적인 획득방법으로 glucose에 의한 $\alpha$-amylase의 생성억제를 받지않는 변이주를 분리한 결과, 효소생산성이 약 30배 향상된 변이주 Bacillus sp. HG4를 획득하였다. 이 균주는 lactose를 탄소원으로 하여 최대 효소생성능을 나타내었으며 빠른 균체성장 및 최대 효소생성시기에 균체 lysis가 적은 점 등 산업적으로 사용하기에 유리한 특성을 가진 것으로 판단된다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제41권1호
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• pp.18-22
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• 1998

Bacillus licheniformis를 화학적 돌연변이를 시켜 내열성 ${\alpha}-amylase$ 고생산성 변이주 SK-5를 얻었다. 변이주는 모균에 비하여 약 50배 정도의 ${\alpha}-amylase$를 생산하였으며, 그 모양이 가늘고 길이가 길어졌고, 성장속도가 감소되었다. 이 효소의 유전적 변화를 분석하기 위하여 변이주 SK-5로부터 ${\alpha}-amylase$ 유전자 염기배열을 결정한 결과 구조유전자의 염기배열은 동일하였으나 promoter 지역에서 일부 변이가 일어난 것이 확인되어 이것이 부분적으로 효소생산성 증가에 영향을 미칠 것으로 여겨진다. SK-5의 ${\alpha}-amylase$ 생산성이 높기 때문에 이의 배양상층액으로부터 열처리와 황산암모늄 침전 후 한 단계의 hydroxyapatite 컬럼을 사용하여 순수하게 정제된 ${\alpha}-amylase$를 얻을 수 있었다. 변이에 따른 세포외 단백질분해효소의 영향을 검증하기 위하여 SK-5 배양액을 시간별로 준비하여 Western blot으로 분석한 결과 변이주에서 분비되는 ${\alpha}-amylase$의 구조에 변화가 없음을 확인하였다.

• 미생물학회지
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• 제31권2호
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• pp.175-178
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• 1993

Alkaline .alpha.-amylase expressed in the transformant, Baciollus subtills MB809, containing alkaline amylase gene cloned from alkalophilic Bacillus sp. AL-8, was purified through for step separation processes. The purified alkaline .alpha.-amylase had molecular weight of app[roximately 59, 000 daltons on SDS-PAGE and Sephaex G-100 gel filtration. Amino acid sequence of terminal portion of the enzyme was analyzed with pure amylase eluted form the SDS-PAGE gel. N-terminal amino acid sequence of .alpha.-amylase was determined by the Edman degradation method and resulted in $NH_{2}$-ser-thr-ala-pro-ser-(ile)-lys-ala-gly-thr-(ile)-leu. For C-terminal amino acid sequencing, purified .alpha.-amylase was digested with carboxypuptidase A and B, and reverse-phase HPLC gradient elution system resulted in -thr-trp-pro-lys-COOH.

• 미생물학회지
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• 제38권1호
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• pp.1-6
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• 2002

전분가공폐수처리장 활성슬러지와 논, 밭 토양에서 전분성분을 분해하는 $\alpha$-amylase를 생성하는 균주들을 분리 선별하였다. 이중 효소활성이 우수한 AIV 19를 형태학적 분석 및 API system 과 지방산분석(MIDI) 방법을 이용한 결과 Bacillus 속으로동정되었다. $\alpha$-amylase 생성능을 향상시키기 위해 nitrosoguanidine (NTG)처리를 한 균주 중 선별된 AIV 1940균주의 효소활성능이 원 균주에 비해 1.8배 향상되었다. 분리균주는 그람양성가균으로 길이가 2.3-5 $\mu$ m폭이 0.8-1$\mu$m이었고, Bioscreen C 시스템을 이용한 균주성장능 평가에서는 전분이 3 g/ι농도에서 성장능이 증가되었다. 전분합성폐수를 이용한 유기물제거실험에서는 초기 CODcr가 4,455 mg/ι인 고농도 합성폐수를 1일 3일 반응 후 각각 40.2% 72.3%의 유기물 제거율을 나타내었다.