1. 연구배경 최근 놀라운 과학기술의 발전에 힘입어 난치병이라고 생각되어 오던 질환들이 하나씩 정복되어 가고 있으나 평균수명의 연장, 생활수준 향상으로 인한 고지방식, 스트레스 및 과학기술발전의 부작용 등을 이유로 새로운 질환들이 나타나고 있는 실정이다. 종양도 이런 대표적인 질환중 하나로 최근 경제적, 시간적으로 많은 투자를 해왔으나 아직까지 그 발생원인이나 성장기전 등이 자세히 밝혀지지 않았다. 이에 본 연구는 효후(哮吼)를 치료하는 청상보하환(淸上補下丸)을 이용하여 흑색종의 폐전이 억제능과 이에 의한 면역증강에 관하여 연구하고자 하였다. 2. 연구결과 B-16 세포를 이용한 C57BL/6계 마우스에 있어서의 폐전이 억제능을 측정한 결과 청상보하환(淸上補下丸) 투여군이 대조군에 비해 검액처리 7일후에는 52.70%, 14일후에는 19.43%의 유의성있는 억제율을 보였으며, 청상보하환(淸上補下丸)의 B-16 세포에 대한 직접적인 항암작용을 알아 보기 위한 시험관내 세포독성 실험에서는 청상보하환(淸上補下丸)의 용량이 $5{\mu}g/well$, $2.5{\mu}g/well$, $1.25{\mu}g/well$, and $0.625{\mu}g/well$인 경우 유의성있는 효과를 얻을수 있었으며 생존율에 의한 $IC_{50}$은 $2.17{\mu}g/well$이었다. NK-activity를 측정한 결과 청상보하환(淸上補下丸) 투여군이 작동세포와 표적세포의 비율이 100:1, 50:1의 경우에 있어서 $72.63{\pm}5.17%$, $26.94{\pm}2.43%$를 보여 대조군에 비하여 각각 31.12%, 43.68% 유의성있는 증가를 보였다. IL-2의 생산능을 측정한 결과 청상보하환(淸上補下丸) 투여군은 $1392.00{\pm}22.31pg/ml$을 보여 대조군에 비해 4.04%의 유의성 있는 증가를 보였다.
목 적: 치사선량의 방사선에 의해 유도되는 아포토시스에 대해 항산화제 또는 산화제로 알려진 EGCG가 어떤 효과를 나타내는지를 마우스 비장에서 연구하였다. 대상 및 방법: C57BL/6 마우스를 실험군에 따라 정상대조군, 방사선조사 단독군, EGCG 전처치군(방사선조사 1시간 전에 100 mg/kg 복강주사)으로 분류하고 7 Gy의 단일선량으로 전신조사 하였다. 각 실험군별 비장 내의 아포토시스는 TUNEL assay를 통해 분석하였고, Bax와 Bcl-2 유전자 발현은 Western blotting 방법으로 측정하였다. 결 과: 비장 내 아포토시스는 주로 white pulp에만 국한되어 발견되었으며, 방사선조사 후 8시간째에 최대의 아포토시스지수를 나타냈다. 8시간째에 방사선조사 단독군과 EGCG 전처치군의 아포토시스지수는 53.9%와 52.1%로 유의한 차이를 보이지 않았다(p=0.328). 또한 두군간에 Bax/Bcl-2 ratio (1.64 vs 0.97, p=0.037)와 대조군에 상대적인 Bcl-2 단백질 발현(0.57 vs 0.82, p=0.037)에서는 유의한 차이를 보였으나, Bax 발현(0.86 vs 0.81, p=0.335)에서는 차이를 보이지 않았다. 결 론: 마우스 비장세포에서 EGCG가 방사선에 의해 유도되는 아포토시스를 유의하게 감소시키지 못하였고, 추가적인 아포토시스의 증가를 유발하지도 않았다.
The maintenance of peripheral immune tolerance and prevention of chronic inflammation and autoimmune disease require $CD4^{+}CD25^{+}$ T cells (regulatory T cells). The transcription factor Foxp3 is essential for the development of functional, regulatory T cells, which plays a prominent role in self-tolerance. Retroviral vectors can confer high level of gene transfer and transgene expression in a variety of cell types. Here we observed that following retroviral vector-mediated gene transfer of Foxp3, transductional Foxp3 expression was increased in the liver, lung, brain, heart, muscle, spinal cord, kidney and spleen. One day after vector administration, high levels of transgene and gene expression were observed in liver and lung. At 2 days after injection, transductional Foxp3 expression level was increased in brain, heart, muscle and spinal cord, but kidney and spleen exhibited a consistent low level. This finding was inconsistent with the increase in both $CD4^{+}CD25^{+}$ T cell and $CD4^{+}Foxp3^{+}$ T cell frequencies observed in peripheral immune cells by fluorescence-activated cell-sorting (FACS) analysis. Retroviral vector-mediated gene transfer of Foxp3 did not lead to increased numbers of $CD4^{+}CD25^{+}$ T cell and $CD4^{+}Foxp3^{+}$ T cell. These results demonstrate the level and duration of transductional Foxp3 gene expression in various tissues. A better understanding of Foxp3 regulation can be useful in dissecting the cause of regulatory T cells dysfunction in several autoimmune diseases and raise the possibility of enhancing suppressive functions of regulatory T cells for therapeutic purposes.
본 논문에서는 MPEG-4 AVC|H.264 SE(Scalable Extension) 부호화 복잡도의 대부분을 차지하는 모드 결정과정을 간략화시키는 시간적 및 공간적 계층 부호화에 따른 고속 모드 결정 방법을 제안한다. 우선 시간적 계층 부호화를 위해 조기스킵(Early Skip) 알고리즘과 MHM(Mode History Map)을 이용한 고속 모드 결정법을 제안한다. 조기스킵 알고리즘은 시간적으로 이전 영상과 이후 영상에 속한 참조 매크로블록의 모드만을 후보 모드로 사용하고, GOP 내에 존재하는 참조 매크로블록의 모드들로 MHM을 구성하여, 여기에 포함된 매크로블록 모드만을 후보 로드로 사용한다. 또한, 공간적 계층 부호화를 위해서는 하위 공간 계층에 대한 MHM을 구성하고, 여기에 BL_mode 만을 추가하여 상위 공간 계층의 후보 모드로 사용하는 방법을 제안한다. 제안방법은 후보 모드의 개수를 감소시킴으로써 최적 모드를 선택하기 위한 모드 결정 과정의 복잡도를 감소시킨다. 실험 결과는 제안 방법이 기존 방법에 비해 율-왜곡 성능의 큰 감소 없이 시간적 계층 부호화 방법에 대해 약 52%, 공간적 계층 부호화 방법에 대해 약 47%의 복잡도를 감소시킬 수 있음을 보여준다.
본 연구는 산수국의 종자번식에 관한 기초자료를 얻고자 수행하였다. 종자를 11월 15일, 12월 30일, 그리고 1월 23일 채취하여 파종한 결과 최종발아율이 각각 $90.0{\pm}4.16%$, $84.4{\pm}5.52%$, 그리고 $88.9{\pm}2.40%$로 휴면성이 없는 것으로 판단되었다. 광, 온도조건에 따른 발아실험 결과 최적의 발아조건은 온도는 $25^{\circ}C$이고, 광 은 명조건으로 판단되었다. 초장, 엽장, 줄기직경, 근장, 근수, 생체중, 건물중, T/R율 공히 $25/20^{\circ}C$의 주야 변온조건에서 가장 크거나 많았으나 $25^{\circ}C$ 항온조건과 큰 차이를 보이진 않았다. $15^{\circ}C$와 $20^{\circ}C$의 비교적 저온에서 생육이 억제되었는데, 특히 T/R율이 낮아 지상부의 생육이 더 억제된 것으로 판단되었다. 적색광은 유묘의 초장과 절간장의 신장을 촉진시켰다. 청색광 처리구에서 총엽록소, 엽록소 a/b 및 카로티노이드함량이 가장 높게 나타났고 적색+청색광 조합처리가 그 다음으로 높아 청색광이 포함된 광질 처리에서 함량이 더 높게 나타났다. 플러그 셀 수(50, 72, 128, 162, 200cell)에 따른 유묘의 생육실험결과 지상부의 생육은 50공 트레이에서 가장 좋았고 다음으로 72, 128공 순이었으며 162공과 200공 간에는 유의적인 경향이 일정하지 않았다. 대체로 셀의 부피가 큰(재식밀도가 낮은) 트레이에서 자란 유묘의 잎이 컸다.
인천 연안의 심하게 오염된 갯벌로부터 강력한 세포외 알카리성 단백질 분해효소를 생산하는 호알카리성 Bacillus clausii I-52를 분리하였으며, 이 균주로부터 알카리성 단백질 분해효소의 유전자를 cloning하여 서열 분석을 하였다. Chromosome 서열이 완전히 밝혀진 Bacillus subtilis의 서열을 기초로 하여 알카리성 단백질 분해효소 및 promoter를 포함하도록 primer를 고안하여 PCR을 수행하여 2,277 bp의 DNA 단편을 얻었으며 BLAST 분석 결과 29 개의 아미노산으로 이루어진 signal peptide, 77 개의 아미노산으로 이루어진 propeptide 및 275 개의 아미노산을 갖는 활성형의 BCAP으로 구성된 총 381 개의 아미노산을 코딩하는 1,143 bp의 open reading frame을 확인하였다. 활성형 BCAP의 N-말단 아미노산은 Ala이며, 분자량 및 pI 값은 각각 27698.7 Da과 6.30으로 계산되었다. 아미노산 상동성을 분석한 결과, B. subtilis 유래의 nattokinase precursor 및 B. subtilis BSn5 유래의 subtilisin E precursor와 99%의 서열 상동성을 나타내어 B. clausii I-52 유래의 BCAP은 subtilisin 계열의 단백질 분해효소임을 확인하였다. E. coli BL21(DE3)에서 발현한 재조합 BCAP는 N-Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA 를 효율적으로 분해하였다. Refolding한 재조합 BCAP은 전형적인 serine protease inhibitor인 PMSF에 의하여 강하게 효소 활성이 억제됨으로써 serine protease 계열의 단백질 분해효소임을 알 수 있었다.
Recombinant antigenic proteins of Toxoplasma gondii are alternative source of antigens which are easily obtainable for serodiagnosis of toxoplasmosis. In this study, highly antigenic secretory organellar proteins, dense granular GRA2 and GRA3, rhoptrial ROP2, and micronemal MIC2, were analyzed by bioinformatics approach to express as water-soluble forms of antigenic domains. The transmembrane region and disorder tendency of 4 secretory proteins were predicted to clone the genes into pGEX-4T-1 vector. Recombinant plasmids were transformed into BL21 (DE3) pLysS E. coli, and GST fusion proteins were expressed with IPTG. As a result, GST fusion proteins with $GRA2_{25-105}$, $GRA3_{39-138}$, $ROP2_{324-561}$, and $MIC2_{1-284}$ domains had respectively higher value of IgG avidity. The $rGST-GRA2_{25-105}$ and $rGST-GRA3_{39-138}$ were soluble, while $rGST-ROP2_{324-561}$ and $rGST-MIC2_{1-284}$ were not. $GRA2_{31-71}$, intrinsically unstructured domain (IUD) of GRA2, was used as a linker to enhance the solubility. The $rGST-GRA2_{31-71}-ROP2_{324-561}$, a chimeric protein, appeared to be soluble. Moreover, $rGST-GRA2_{31-71}-MIC2_{1-284}$ was also soluble and had higher IgG avidity comparing to $rGST-MIC2_{1-284}$. These 4 highly expressed and water-soluble recombinant antigenic proteins may be promising candidates to improve the serodiagnosis of toxoplasmosis in addition to the major surface antigen of SAG1.
The objectives of this study were to quantify the combination values of the principal components and factors calculated using body measurements of Hanwoo (Korean Cattle) and estimate their heritabilities. The technique of multivariate analysis was used to reduce a large number of variables to a smaller number of new variables and characterize cattle according to body shape. The analyses were performed using 1,979 cattle at 12 months of age and 936 cattle at 24 months of age. The data for the analyses was obtained from progeny tests performed on Korean Cattle for 6 years from 2003 to 2008. The phenotypic correlations among these traits were estimated to range from 0.32 to 0.90 at 12 months of age and from 0.21 to 0.82 at 24 months of age. The first principal components (PC1s) indicated a weighed average of overall body measurements, accounting for 99.91% of the total variation for both periods of test. The two first PCs had positive coefficients for all body measurements. The major sources of PC, such as chest girth (CG), body length (BL), rump height (RH), and wither height (WH) were similar for both test periods. The heritabilities for PC1, the first factor score (FS1), and the second factor score (FS2) were estimated by multivariate REML method. The estimated heritabilities for PC1, FS1, and FS2 were 0.33, 0.38, and 0.40, respectively, at 12 months of age and 0.26, 0.76, and 0.58 at 24 months of age. Further studies are needed to determine whether the heritabilities of FS1 and FS2 at 24 months of age were overestimated.
Corn silk (Okmi-su) was anciently adopted as a material for tea or beverage. Corn silk extracts (CSE) contain bioactive phytochemicals such as phenolic acid, flavonoids, ascorbic acid, tannins, and glycosides. Under the impact of these functional components, CSE has benefits for antioxidation, diuresis, anti-diabetes, and dyslipidemia recovery. Nonetheless, its role in whole-body adiposity was not investigated; therefore, the effects of CSE on obesity were evaluated in high-fat diet-induced obese mice. Mice were assigned to either group (n=12); 1) normal diet (18% kcal from fat), 2) high-fat diet (45% kcal from fat, the control), 3) high-fat diet with CSE (800 mg/kg diet), and 4) high-fat diet with orlistat (500 mg/kg diet, a comparable control for weight loss). Our results showed that body weight, adiposity, and energy expenditure in obese mice were not altered by CSE. Lean body mass tended to decrease by CSE, which can be explained by stimulation of diuresis (p=0.06). In conclusion, our results suggest that dietary consumption of CSE does not influence the adiposity and underlying substrate utilization in high-fat diet-induced obese mice.
Despite reports suggesting that tissue-resident natural killer (trNK) cells cause ischemic kidney injury, their contribution to the development of tubulointerstitial fibrosis has not been determined. This study hypothesized that the depletion of trNK cells may ameliorate renal fibrosis by affecting transglutaminase 2/syndecan-4 interactions. Aristolochic acid nephropathy (AAN) was induced in C57BL/6 mice as an experimental model of kidney fibrosis. The mice were treated with anti-asialo GM1 (ASGM1) or anti-NK1.1 antibodies to deplete NK cells. Although both ASGM1 and NK1.1 antibodies suppressed renal $NKp46^+DX5^+$ NK cells, renal $NKp46^+DX5^-$ cells were resistant to suppression by ASGM1 or NK1.1 antibodies during the development of tubulointerstitial fibrosis in the AAN-induced mouse model. Western blot analysis showed that both antibodies increased the expression of fibronectin, transglutaminase 2, and syndecan-4. These findings indicate that trNK cells played an exacerbating role in tubulointerstitial fibrosis by activating transglutaminase 2 and syndecan-4 in the AAN-induced mouse model.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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