• 한국식품영양학회지
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• 제9권4호
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• pp.452-458
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• 1996

호열균 B. stearothermophilus의 세포내 PPIase를 정제하여 Edman 법으로 N-말단 아미노산 배열을 결정하여 이를 바탕으로 합성한 올리고누클레오티드의 프리머를 이용하여, 서턴 분석하여 PPIase 유전자 약 3.0kb를 클로닝하였다.(pPI-40) PPI-40으로부터 PPIase N-말단 배열을 코드 하는 영역으로부터 합성한 프리머(A-1, B-2)를 이용하여, PCR법으로 PPIase N-말단을 코드 하는 유전자를 증폭하여, 염기배열을 경정한 후, 그 정보에 따라 유전 해석한 결과 PCR로 증폭된 단편(pSN-18)은 165염기로부터 형성된 55 아미노산잔기를 코드 하는 open reading frame (ORF)이 계속되고 있었고, Edman법으로 결정한 PPIase N-말단 아미노산 39 아미노산잔기가 완전히 일치하였다. 그리고, 이 ORF를 중심으로, 지금까지 클론화된 대장균의 PPIasea (cytoplasm)와 PPIase b(periplasm)의 아미노산 일차구조 해석으로부터 각각 58%(cytoplasm), 16%(periplasm)의 상동성을 나타냈다. PPIase 구조 유전자를 갖는 재조합플라스미드 pPI-40을 JM109로 형질전환하여 Lac 프로모터로 PPIase 단백질을 발현시켰다. 효소 분자량을 SDSPAGE로 확인한 결과 약 18kDa으로 호열균 B. stearothermophilus로부터 정제한 단백질 분자량과 동일하다. 면역억제(CsA, FK506)와의 화학적인 반응은 대장균의 PPIase와 동일하게, 면역억제와는 비감수성으로 나타났다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권3호
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• pp.271-279
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• 1992

내알카리성 및 내열성 xylanase를 생산하는 토양분리균인 Bacillus stearothermophilus의 chromosomal DNA와 pBR322 plasmid DNA의 HindIII 절단 DNA 단편을 ligation 시켜 E.coli HB101들 형질전환, 약 5천개의 형질전환체를 얻었으며 이들 중에서 세개의 xylanase 양성 형질전환체를 분리하였다. 상기 세 xylanase 양성 형질전환체들로부터 분리한 제조합 plasmid(pMG11, pMG12 및 pMG13)는 다 같이 xylanase 활성과 관계되는 B.stearothermophilus 유래의 동일 4kb 외래 DNA를 가지고 있었으나, pMG13은 외래 DNA의 삽입 방향만이 다름을 확인하였다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제9권1호
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• pp.27-30
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• 1996

One thousand eight hundreds and twenty two samples of raw milk were detected for antibiotic residues using Bacillus subtilis ATTCC 6633, B. stearothermophilus var. calidolactis C 593 and Micrococcus luteus ATCC 9341 as test organisms, were carried out from July 1991 through June 1992. Apparent antibiotic residues were found through out the study period, except in January. The detection rate varied from 0.7% in March and May to 11% in April. One hundred and thirty six (72%) samples of the 187 screening positive samples were considered to contain only the indigenous antimicrobial agents. Of the total, 51 (2.8%) samples were positive for antibiotic residues. Among the tested organisms, B. stearothermophilus var. calidolactis was the most sensitive organism in detection of the antibiotic residues.

• 한국수산과학회지
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• 제10권3호
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• pp.145-149
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• 1977

Thermal resistance of dried bacterial spores against dry heat was determined. Spare suspensions of Bacillus subtilis var. niger ATCC 9372, Bacillus stearothermophilus Oxoid Code BR 23 and Clostridium sporogenes ATCC 19404 were located on aluminium strips, dried in electric oven under vacuum at room temperature for 10 minutes. The aluminium strips were laid in the middle of gas flow (hot air and superheated steam) with the velocity of 6 m/sec and heated at $120^{\circ}C$ for 180 seconds. The calculated D-values showed that there were no remarkable differences in the heat resistance of bacterial spares between $R.H.\leqq0.012$ and R. H.=0.51. Furthermore the thermal resistance of B. subtilis spores to dry heat was greater than that of B. stearothermophilus.

• 생명과학회지
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• 제8권5호
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• pp.497-503
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• 1998

GTase와 CDase를 함께 분비$\cdot$생산하는 B. stearother-mophilus KJl6 균주의 CDase를 ammonium sulfate 침전, DBAE-cellulose, Sephadex G-100 column chromatogra-phy, 및 FPLC로 수율 7%, 비활성 12.4 units/mg, 정제도 87.6배로 정제된 CDase를 얻었으며 SDS-PAGE 상 단일 band를 확인하였다. 정제된 CDase의 분자량은 약 68,000 dalton 이었고 활성 최적 pH와 온도는 6.0와 55$^{\circ}C$였다. pH 안정성은 5.5~8.5의 범위에서 비교적 안정하였으며, 온도 안정성은 5$0^{\circ}C$에서 2시간까지는 안정하였고, 7$0^{\circ}C$에서 1시간 전처리하여도 80% 이상의 잔존활성을 나타내었다. 효소 활성은 $Cu^{+2}$와 $Hg^{+2}$와 같은 금속이온과 p-chlorome-rcuribenzoate, N-bromosuccinimide, mercaptoethanol, dithiothreitol에 의해서 효소활성이 강하게 저해되었다. 기질에 대한 반응 특이성은 $\gamma$ -CD를 가장 잘 분해하였으며, 그 외에 soluble starch나 amylose, amylopectin 등의 기질도 잘 분해하나 이들의 분해속도는 $\gamma$-CD에 비해서는 늦었다. 이들 기질의 최종 분해산물은 maltose였으며, maltose는 거의 분해되지 않았다.

• 한국식품과학회지
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• 제29권1호
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• pp.32-37
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• 1997

Meatball system에서 M-1과 M-2의 생성속도상수 및 활성화 에너지와 더불어 B. stearothermophilus ATCC 12980의 사멸율을 검토하였다. $121^{\circ}C$에서 M-1과 M-2의 생성속도상수는 각각 0.03과 0.28 Abs/min 였으며, 활성화 에너지는 27.9와 24.6으로 계산되었다. M-2는 M-1 보다 빨리 생성되었다가 감소되었으며, $121^{\circ}C$에서는 M-2는 약 10분, M-1은 40분 이상 생성량이 증가하였다. 이런 결과는 M-1이 M-2 살균도의 예측에 있어 보다 유용하게 사용될 수 있음을 나타내고 있다. B. stearothermophilus ATCC 12980의 D-value는 111, 114.4, 117.7, $121^{\circ}C$에서 각각 7.5, 4.5, 1.9와 0.58이였으며, 포자의 사멸율과 M-1의 생성은 일차함수적 상관관계로 나타낼 수 있었다. $126^{\circ}C$이상의 온도에서는 설정온도에 도달시까지 포자가 사멸하여 정확한 D-value를 구하기가 불가능하였다. 이러한 결과는 chemical marker를 이용하여 식품살균시 미생물의 사멸율은 물론 과가열 정도를 예측할 수 있음을 제시하고 있다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권4호
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• pp.454-460
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• 1995

Acetylxylan esterase II was produced by Escherichia coli HB101 harboring the recombinant plasmid pKMG7 which contained the estII gene of Bacillus stearothermophilus. Optimal medium for the production of the acetylxylan esterase by E. coli HB101/pKMG7 was determined to contain 0.5% galactose, 1% yeast extract and 1% NaCl. The enzyme produced was purified to homogeneity using a combination of 20-50% ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sepharose CL-6B chromatography and Sephacryl S-200 gel filtration. The temperature and pH optimum of the esterase were 45$\circ$C and pH 6, respectively. The essential amino acids for the esterase activity were found to be methionine, serine, and cysteine. Molecular weight of the esterase was determined to be 28 kDa by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, and 120 kDa by gel filtration. This suggests that the functional enzyme is a homomeric tetramer. The esterase had an isoelectric point of pH 3.4. The N-terminal amino acid sequence of the enzyme was Ala-Leu-Phe-Glu-Ser-Arg-Phe-Phe-Ser-Glu-Val-Leu-Gly-Leu.

• BMB Reports
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• 제35권2호
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• pp.228-235
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• 2002

Methionine aminopeptidase (MetAP) catalyzes the removal of an amino-terminal methionine from a newly synthesized polypeptide. The enzyme was purified to homogeneity from Bacillus stearothermophilus (KCTC 1752) by a procedure that involves heat precipitation and four sequential chromatographs (including DEAE-Sepharose ion exchange, hydroxylapatite, Ultrogel AcA 54 gel filtration, and Reactive red 120 dye affinity chromatography). The apparent molecular masses of the enzyme were 81,300 Da and 41,000 Da, as determined by gel filtration chromatography and sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), respectively. This indicates that the enzyme is comprised of two identical subunits. The MetAP specifically hydrolyzed the N-terminal residue of Met-Ala-Ser that was used as a substrate, and exhibited a strong preference for Met-Ala-Ser over Leu-Gly-Gly, Leu-Ser-Phe, and Leu-Leu-Tyr. The enzyme has an optimal pH at 8.0, an optimal temperature at $80^{\circ}C$, and pI at 4.1. The enzyme was heat-stable, as its activity remained unaltered when incubated at $80^{\circ}C$ for 45 min. The Km and Vmax values of the enzyme were 3.0mM and 1.7 mmol/min/mg, respectively. The B. stearothernmophilus MetAP was completely inactivated by EDTA and required $Co^{2+}$ ion(s) for activation, suggesting the metal dependence of this enzyme.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제8권2호
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• pp.152-157
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• 1998

To analyze the role of the C and D domains in the cyclization activity of cyclodextrin glucanotransferase (CGTase), two plasmids, pKB1ΔC300 and pKB1ΔD96, were constructed in which DNA regions encoding 100 and 32 amino acids, respectively, from the C and D domains of B. stearothermophilus NO2 CGTase were deleted. The mutated CGTase from the pKBlΔC300 produced much lower amounts of ${\alpha}$-, ${\beta}$-, and $\gamma$-cyclodextrin (CD) than the parental CGTase. However, the mutated CGTase from the pKBlΔD96 showed a similar production pattern of CDs to wild-type CGTase. The production ratios of the ${\alpha}$-, ${\beta}$- and $\gamma$-CDs were not affected by the deletions, when compared to those of parental CGTase. The optimum temperature of the mutated CGTase from the pKBlΔC300 was decreased from $60^{\circ}C$ to $55^{\circ}C$. The optimum pH of the mutated CGTase from the pKB1D96 was shifted from 6.0 to 7.0. The thermostability of the two mutant CGTases were not changed. From these results, it is suggested that the C and D domains are not related to cyclization activity directly because mutant-enzymes deleted C or D domains still possessed their activity. However, they are important for other enzymatic properties such as productivity and pH optimum as a partition of CGTase tertiary structure.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제30권3호
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• pp.206-209
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• 2002

Bacillus stearothermophilus의 CCTase 유전자(cgtS) 대장균과 효모의 shuttle vector로서 항구적 promoter인 adh l promoter를 함유한 pVT103-U(6.9Kb)에 도입하여 재조합 plasmid pVT-CCTS (9.0Kb)을 구축하고 효모 숙주 S. cerevisiae 2805에서 발현시켰다. 재조합 균주의 항구적 발현계인 2805/pv7-CGTS의 최적 발현조건은 YP배지에 dextrose 2%, pH 5.5, 30"C에서 최적 발효조건이었으며, CCTase의 최대 발현량은 48시간 배양시 0.624unit/mL을 나타내었다. B. stearothermophilus의 signal peptide가 재조합 효모에서도 높은 분비효율을 나타내어서 발현된 효소의 87%가 세포 외로 분비 생산되었다.산되었다.