In order to clarify effects of phytohormones on the viability and the cell wall regeneration of protoplasts isolated from Nicotiana tobacum L. var. BY4, protoplasts isolated from mesophyll tissue were cultured on the Murashige-Skoog liquid media supplemented with auxin(2, 4-D, NAA, IAA) and/or cytokinin (kinetin, BAP, 2ip). Viability of protopplasts was higher in the culture medium containing auxin and cytokinin, especially in the combination of 2, 4-D and BAP. The effectual cell wall regeneration of protolasts was observed when theprotoplasts were cultrued on the medium supplemented with auxin alone, especially with IAA. Cell wall regernation started from 2-3 days after culture and was not detected at budding regions. When the protoplasts were cultured on the phytohormone-free medium, the viability of protoplasts dramatically decreased 4 days after culture.
본(本) 연구(硏究)는 생장조절물질(生長調節物質) 및 물리적(物理的) 처리(處理)를 통한 포도의 성숙조절기술(成熟調節技術) 확립(確立)을 목적으로 수행되어 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1. Anti-gibberellin인 chlormequart 및 paclobutrazol의 verasion 10일전(日前) 처리는 박피(剝皮) 또는 적분처리(摘糞處理)에 관계없이 anthocyanin 함량(含量)을 증가시켰으나 가용성고형물함량(可溶性固形物含量) 및 과실의 숙기(熟期)에는 영향을 미치지 않았다. 환상박피(環狀剝皮)는 성숙(成熟)을 촉진(促進)함은 물론 가용성고형물(可溶性固形物)의 축적(蓄積)을 촉진(促進)하였고 반면에 적엽처리(摘葉處理)는 숙기(熟期) 및 고형물(固形物)의 축적(蓄積)을 현저히 지연(遲延)시켰다. 2. Auxin (2,4-D 및 fenoprop)는 농도(濃度)에 따라 과실의 성숙(成熟)을 20일(日)에서 30일(日)가량 지연(遲延)시켰으며 처리농도(處理濃度)가 50 ppm이상일 경우 과방내(果房內)에서도 과립(果粒)의 성숙(成熟)이 불균일(不均一)하여 정상과립(正常果粒)이 과숙한 후에도 20-30%의 과립(果粒)은 미숙 상태로 남아 있었다. 3. Gibberellin 단용처리(單用處理)는 과실의 성숙(成熟)에 영향하지 않았으나 auxin 가용(加用)의 경우는 auxin 단용에서와 같이 성숙지연(成熟遲延) 및 과립(果粒)의 불균일(不均一)한 성숙현상(成熟現象)이 관찰되었다. 4. Verasio기(期)의 칼슘 가용(加用) ethephon 처리(處理)는 과실의 성숙(成熟)에 영향을 미치지 않았으나 anthocyanin 함량(含量)을 증가시켰다.
By screening a cDNA library of auxin-treated mung bean (Vigna radiata L.) hypocotyls, we have isolated two full-length cDNA clones, pVR-ACS6 and pVR-ACS7, for 1-aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) synthase, the rate-limiting enzyme in the ethylene biosynthetic pathway. While PVR-ACS6 corresponds to the previously identified PCR fragment pMBA1, pVR-ACS7 is a new cDNA clone. A comparison of deduced amino acid sequences among auxin-induced ACC synthases reveal that these enzymes share a high degree of homology (65-75%) to VR-ACS6 and VR-ACS7 polypeptides, but only about 50% to VR-ACS1 polypeptide. ACS6 and ACS7 are specifically induced by auxin, while ACS1 is induced by cycloheximide, and to lesser extent by excision and auxin treatment. Results from nuclear run-on transcription assay and RNA gel blot studies revealed that all three genes were transcriptionally active displaying unique patterns of induction by IAA and various hormones in etiolated hypocotyls. Particularly, 24-epibrassinolide (BR), an active brassinosteroid, specifically enhanced the expression of VR-ACS7 by distinct temporal induction mechanism compared to that of IAA. In addition, BR synergistically increased the IAA-induced VR-ACS6 and VR-ACS7 transcript levels, while it effectively abolished both the IAA- and kinetin-induced accumulation of VR-ACS1 mRNA. In light-grown plants, VR-ACS1 was induced by IAA in roots, whereas W-ACS6 in epicotyls. IAA- and BR-treatments were not able to increase the VR-ACS7 transcript in the light-grown tissues. These results indicate that the expression of ACC synthase multigene family is regulated by complex hormonal and developmental networks in a gene- and tissue-specific manner in mung bean plants. The VR-ACS7 gene was isolated, and chimeric fusion between the 2.4 kb 5'-upstream region and the $\beta$-glucuronidase (GUS) reporter gene was constructed and introduced into Nicotiana tobacum. Analysis of transgenic tobacco plants revealed the VR-ACS7 promoter-driven GUS activity at a highly localized region of the hypocotyl-root junction of control seedlings, while a marked induction of GUS activity was detected only in the hypocotyl region of the IAA-treated transgenic seedlings where rapid cell elongation occurs. Although there was a modest synergistic effect of BR on the IAA-induced GUS activity, BR alone failed to increase the GUS activity, suggesting that induction of VR-ACS7 occurs via separate signaling pathways in response to IAA and BR.
작물의 생육촉진과 식물 진균병의 생물방제능 효과를 동시에 나타내는 다기능 유기농업용 미생물제제를 개발하고자 경북지역 저병해 경작지 토양으로부터 옥신생산성 균주들을 분리하였다. 그 중 auxin, siderophore, 그리고 항진균성 cellulase를 동시에 생산하는 K11 균주를 선발하였으며, 선발된 K11 균주는 형태 및 생화학적 test 후 Biolog사의 동정시스템(Microlog$^{TM}$ 4.0)과 16s rDNA 상동성을 조사한 결과 Bacillus licheniformis로 동정되었으며, 이를 Bacillus licheniformis K11로 명명하였다. B. licheniformis K11은 고추역병의 원인균인 Phytophthora capsici에 대하여 in vitro 상에서 63%의 길항능을 보였으며, in vivo pot test에서도 뛰어난 방제능을 나타내었다. 또한 B. licheniformis K11의 배양액을 10ml/l로 처리한 녹두발근생검법에서 시판중인 IAA(0.1 mg/l)보다 발근율이 15% 증가됨을 확인 할 수 있었다. 또한 배추, 완두, 녹두를 대상으로 B. licheniformis K11에 의한 식물 생장촉진을 조사한 결과 녹두, 완두 그리고 배추의 뿌리 생육을 각각 160, 150, 130% 증가시켰다. 상기 연구 결과들로 미루어 볼 때 다기능 생물방제균인 B. licheniformis K11을 경작지에 관주하거나 적합한 미생물제제로 제제화한다면 토양전염성 질병의 방제와 함께 옥신 생산성에 의한 작물생육의 촉진으로 수확시기를 조기화 함으로 농가에 수익 증대 효과를 줄 수 있을 것이므로 친환경 농업용 미생물제제로 개발 가능성이 있음을 확인 할 수 있었다.
식물 세포는 각 세포가 발생을 통해 새로운 완전한 개체를 생산하는 전형성능이 있다. 이것을 응용하여 식물의 증식 방법으로 기내에서 호르몬을 처리하여 체세포 배 발생의 광범위한 적용으로 여러 기술이 발전하고 있다. 이 기술을 이용하기 위해서 보다 규칙적인 세포 분열을 하는 무성생식이 가능한 식물인 Kalanchoe pinnata 에 cytokinin에 속하는 kinetin과 auxin에 속하는 호르몬들 중 picloram을 서로 조합하여 첨가한 뒤 8주 동안 처리한 후 전형성능을 실험하였다. 우리의 실험 결과로 잎 절편에서 발근 효과로는 picloram 농도가 0.1 mg/L에서 70%의 발생율을 보였다. kinetin과 picloram의 비율이 1:5-1:10의 농도차이가 효과적이라는 것이 입증 되었다. auxin의 효과가 Kalanchoe 뿌리 발생에 필수적이라는 실험 결과이다. 경엽부 발생 효과로는 picloram 농도가 0.5 mg/L에서 60%의 발생율을 보였다. kinetin 농도는 0.5 - 1.0 mg/L이며 발생에 중요한 영향을 준다. kinetin과 picloram의 비율이 1:1-1:2의 농도 차이가 효과적이라는 것이 입증 되었다. cytokinin과 auxin의 조합이 결정적으로 경엽부 발생에 중요하다는 것을 보여 주는 결과이다. 호르몬의 조합으로 직접기관형성을 유도하여 기내에서 대량 증식을 유도하는 기술의 기초가 될 수 있다고 사료된다.
Peach (Prunus persica L.) is a model species for stone fruit studies within the Rosaceae family. Auxin plays an important role in the development of peach fruit. To reveal the distribution of auxin in the tissues of peach fruit, immunohistochemical localization of IAA was carried out in the seed, mesocarp, and endocarp in developing peach fruit using an anti-indole-3-acetic acid (anti-IAA) monoclonal antibody. A strong IAA signal was observed throughout the outer and inner integument during peach fruit development, and the distribution was zonal. The IAA signal was mainly focused in mucilage layers in the outer integument. The outer integument may function to produce or store IAA in the seed; a strong IAA signal was detected in the cells around the vascular tissue, whereas a weak IAA signal was located in the vascular tissues. In the mesocarp, the cells around the vascular bundle tissue gave rise to an IAA signal that increased in the late phase of fruit growth, which coincided with a significant increase in fruit growth. The distribution of IAA, however, was changed when fruit was treated with auxin transport inhibitors NPA (1-N-naphthylphthalamic acid) or TIBA (2, 3, 5-triiodobenzoic acid); in mesocarp tissues, an IAA signal was detected mainly in vessels of the treated fruit. During the critical period of endocarp lignification, the vessel lignification process was negatively correlated with IAA signal. The present results confirmed that the distribution of IAA was different in various tissues of peach fruit according to the developmental stage. This research provides cytological data for further study of the regulatory mechanism of auxin in peach fruit.
Callus culture initiation of strawberry (Fragaria${\times}$ananassa Duch.) was investigated at different Murashige and Skoog (MS) medium strengths, types and concentrations of plant growth regulators, and incorporating a cold pretreatment period to determine the optimal nutritional and environmental conditions. No high quality callus was induced on MS media without auxin regardless of medium strength. When 6-benzylaminopurine (BA) was combined with indole acetic acid (IAA), naphthalene acetic acid (NAA), and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), high quality callus were highly induced compared to medium supplemented with auxin alone. When $0.5mg{\cdot}L^{-1}$ BA was combined with IAA, NAA, and 2,4-D, high quality callus induction was more effective than the medium supplemented with the other BA concentrations. The best combination of auxin and cytokinin for high quality callus induction was $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ NAA and $0.5mg{\cdot}L^{-1}$ BA. Although the differences in callus induction were not significant, high quality callus induction at half strength MS medium was more effective than at full strength medium. When $30g{\cdot}L^{-1}$ sucrose was added to the half strength MS medium, the rate of high quality callus induction increased. The optimum cold pretreatment temperature and period for high quality callus induction were $4^{\circ}C$ and 72 h, respectively. Regeneration rate of high quality callus increased in MS medium supplemented with thidiazuron.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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