본 실험은 알팔파의 Allelopathy와 Autotoxicity에 관련되는 생리활성 물질의 분리, 정제, 동정하기 위하여 실시되었다. 알팔파 생잎 1kg을 80% MeOH로 추출하여 silica gel TLC와 DCCC의 분리와 정제과정을 거쳐 HPLC로 동정하였다. HLPC 분석결과 4개의 phenolic 물질(salicylic acid, rutin, quercetin, scopoletin) 등이 동정되었다. 이들 물질을 이용한 발아실험에서도 모두 알팔파의 발아와 생육에 억제적으로 작용하였으며, 이 중 quercetin의 처리가 가장 억제적이었다. 따라서 최소한 이들 물질이 알팔파의 Allelopathy와 Autotoxicity에 관련하는 것으로 생각되었다.
Autotoxicity restricts reseeding of new alfalfa(Medicago sativa L.) after alfalfa until autotoxic chemical(s) breaks down or is dispersed into external environments, often requiring up to a year or more. One solution for reducing autotoxicity would be to select germplasms or cultivars with tolerance to the autotoxic chemical(5) and use genetically breeding program. Bioassay of seed germination and early seedling growth was conducted to evaluate autotoxic responses of 3 varieties of alfalfa to the water-soluble extracts(at 4 and 8g/L) from alfalfa ‘Cody’leaf by using agar and filter paper medium in a petri-dish assay. Root length at 5 days after seeding was more sensitive to the extract than was hypocotyl length or seed germination, and was a better parameter of autotoxic effects of alfalfa leaf extracts. Use of an agar medium gave better sensitivity of root length than did use of filter paper. Evaluating tolerance with percent of control was more important indicator than was mean of root length because of significant variation among varieties in root length of control treatment. Bioassay ranked varieties in the following order of tolerance on the basis of relative root length; “Cody” >“ Pioneer 5373” >“ Alfagraze”. Seedling growth from old “Cody” seed was more sensitive to the autotoxic chemical(5) than was that from newly produced seed.
Most parts of alfalfa plant have been reported to contain autotoxic substances that inhibit seed germination and early seedling growth, however, the chemical(s) is not still studied much. Effect of seed leachates of 'Vernal' alfalfa (Medicago sativa L.) was evaluated for inhibition of alfalfa germination and root growth through bioassay. Alfalfa seeds were extracted in 1 L deionized water for 1 h after soaking and the leachates caused to reduce root length of alfalfa significantly as the soaking time increased. Crude seeds at 4 g L$L^{-1}$ exudated autotoxins that reduce significantly root length by 34 % compared to the control, when the seeds soaked in deionized water for 24 h. However, the extracts did not affect final germination as well as speed of germination. Extracts from ground seeds significantly reduced speed of germination (GT 50) and root length. The results indicate that release of autotoxic substances from seeds during seed imbibition was increased with increase of soaking time and seed amount, and that autotoxicity was more occurred in ground seeds than in crude seeds.
알팔파 종자와 재배지 토양의 추출물이 알팔파 및 무우의 발아 및 생육에 미치는 영향과 이들 물질을 구명코자 수행한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1) 알팔파 종자 추출물의 무우생육에는 Luna, Sparta, Magnum, Husky, Milkmaker, Challenger, Anchor의 7개 품종에서 60∼80% 생육억제 효과를 보였다. 2) 알팔파 재배지 토양잔류추출물을 이용한 무우생육조사는 추출물의 농도가 증가하면서 발아억제 및 줄기, 뿌리 등의 생장억제에 관여하는 것으로 나타났다. 3) 알팔파 재배토양으로 알팔파와 무우 생육실험시에는 80%의 발아억제를 보이면서 줄기와 뿌리의 길이 및 생체중에서도 큰 차이를 보여 allelopathy와 autotoxicity가 관여하는 것으로 사료된다. 4) 위 실험을 통해 관여하는 물질의 활성을 분석하기 위해 조사한 결과 표준 phenol compounds와 식물부위별 추출물을 비교 분석하였더니 salicylic acid, p-hydroxybenzoic acid, vanillic acid, syringic acid, p-cou-maric acid, ferulic acid 등의 7가지 acids를 분리동정 할 수 있었다.
알팔파의 식물체로부터 자감작용에 관여한 물질은 알팔파 재배 후에 연작되는 알팔파의 발아와 유묘생장 및 입모를 억제하는 것으로 알려져 있다. 그러나 그러한 물질은 아직 확실하게 밝혀지지 않고 있다. 본 연구는 알팔파·잎추출물의 자감작용 특성을 평가하기 위한 유묘생물검정의 감수성을 개선코자 몇 가지 생장배지 및 추출액의 멸균방법을 비교하여 발아와 초기 유묘 생장을 억제하는데 한계 적정농도를 결정하였다. 여과지를 이용한 종이배지보다는 한천과의 혼합배지에서 추출액에 대한 발아 및 유묘신장 반응이 더 민감하였으며, 한천배지에서 뿌리신장, 발아 및 배축 신장을 50% 억제하는 추출액 농도는 각각 2.7, 3.8 및 9.9g $kg^{-1}$으로 나타나, 뿌리신장이 발아나 배축의 신장보다 추출액의 autotoxic 물질에 대해 더 민감하였다. 100ppm의 streptomycin은 유의적으로 발아율을 촉진시켰으나, 추출액이 없는 대조처리의 뿌리 신장을 43%억제시켰다. $125^{\circ}C$ 고열 증압 멸균은 추출물의 활성을 변화시키지 않고 멸균 가능한 방법이었다. 본 연구결과는 고열증압멸균에 의한 추출액을 한천과 혼합한 배지에서 생물검정이 이루어짐으로써 더 높은 일관성과 정확성을 기대할 수 있으며, 뿌리신장은 알팔파 잎 추출물의 자가작용 효과를 검정하는데 최선의 판단기준이 될 수 있음을 결론지을 수 있다.
Chinese fir (Latin name: Cunninghaimia lanceolata) is one of the major commercial coniferous trees. Most of Chinese fir forests are managed in successive rotation sites, which lead productivity to decline. Autotoxicity is the important reason for soil degradation of Chinese fir plantation, especially, phenolic acids are considered as the major allelopathic toxins which induce autotoxicity in Chinese fir rotation stands. We performed here proteomic approach to investigate the response of proteins in Chinese fir leaves to salicylic acid. The tube plantlets of Chinese fir clone were treated with 120 mg/L salicylic acid for 1, 3 and 5th day. 2-DE, coupled with MALDI-TOF-TOF/MS, was used to separate and identify the responsive proteins. We found 12, 7, and 12 candidate protein spots that were up- or down-regulated by at least 2.5 fold after 1, 3, and 5th day of the stress, respectively. Of these protein spots, 16 spots were identified successfully. According to the putative physiological functions, these proteins were categorized into five classes (1) the proteins involved in protein stability and folding, including 26S proteome, Grp78, Hsp70, Hsp90 and PPIase; (2) the protein involved in photosynthesis and respiration, including OEC 33 kDa subunit, GAPDH; (3) the protein related to cell endurance to acid, F-ATPase; (4) the protein related to cytoskeleton, tubulin; (5) the protein related to protein translation: prolyl-tRNA synthetase. These results give new insights into autotoxic substance stress response in Chinese fir leaves and provide preliminary footprints for further studies on the molecular signal mechanisms induced by the stress.
Actinoplanes teichomyceticus ATCC 31121 was mutated with UV to obtain a superior mutant strain with increasing level of teicoplanin production. In this investigation lethal curve was obtained and the optimal condition to induce mutagenesis was determined and to isolate the desirable mutant strain. It was also confirmed that teicoplanin activities by agar diffusion method to be compared to the mother strain. One mutant strain, T991014-1 that had the highest teicoplanin productivity was finally selected for further investigation including fermentation pattern. The mutant was characterized by the various tests such as amylase activity, protease activity, antibiotic resistance, autotoxicity, and productivity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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