This study developed a natural ingredient as a functional food possessing properties of attenuation of hypertension and cardiovascular hypertrophy. In a previous study hydrolysates obtained from chicken leg bone protein using Alcalase strongly inhibited angiotensin I converting enzyme (ACE) in vitro. In particular, hydrolysate (A4H) from four hours of incubation exhibited the highest ACE inhibitory activity (IC50 = 0.545 mg/ml). A4H was selected as a potent ACE inhibitor and orally administrated to spontaneously hypertensive rats (SHR) for eight weeks to investigate attenuating effects on age-related development of hypertension and cardiovascular hypertrophy. Results showed that treatment with A4H of SHRs attenuated the development of hypertension as effectively as the clinical antihypertensive drug captopril. Moreover, a significantly lower heart to body weight ratio and thinness of coronary arterial wall was observed in SHRs that had been treated with A4H or captopril. The results suggest that A4H can be utilized in developing an ACE inhibitor as a potential ingredient of functional foods to alleviate hypertension and cardiovascular hypertrophy.
한국 전통장류의 기능성 탐색 연구의 일환으로 청국장 발효과정 중 고혈압을 유발하는 angiotensin converting enzyme(ACE)의 저해 peptide를 분리하고 저해효과를 검토하였다. 청국장은 Bacillus subtilis CH-1023을 이용하여 제조하였고, $20^{\circ}C,\;30^{\circ}C,\;40^{\circ}C,\;50^{\circ}C,\;60^{\circ}C$에서 $0{\sim}72$시간동안 배양하면서 protein양, protease activity, ACE 저해율을 측정하고 저해활성을 가지는 peptide를 정제 후 아미노산조성을 분석하였다. 청국장의 발효시간이 경과함에 따라 protein 함량이 증가하여 $40^{\circ}C$, 60시간에서 최대를 나타낸 후 감소하였으며, 발효시간에 따른 protease activity와 ACE 저해율은 $40^{\circ}C$, 60시간에서 최대로 나타난 후 점차 감소하였다. 따라서 Bacillus subtilis CH-1023을 이용한 청국장 제조는 $40^{\circ}C$에서 60시간 배양이 최적의 배양조건이었다. 최적 발효조건에 따라 청국장을 제조한 후 20 mM sodium phosphate buffer(pH 7.0)를 가해 추출한 추출물을 Amicon YM-3 membrane filtration과 Sephadex G-10, G-25를 이용한 gel filtration으로 부분정제 하였다. 또한 정제한 peptide는 첨가함량이 높아질수록 저해활성은 높게 나타났으며, 0.5 mg 정도의 peptide 함량으로 94.3%의 저해율을 나타내었다. 정제한 peptide의 아미노산 조성은 histidine, alanine, phenylalanine 함량이 높은 것으로 나타났다.
Seven brown algal species (Ecklonia cava, Ishige okamurae, Sargassum fulvellum, Sargassum horneri, Sargassum coreanum, Sargassum thunbergii and Scytosiphon lomentaria) were hydrolyzed using five proteases (Protamex, Kojizyme, Neutrase, Flavourzyme and Alcalase) and screened for angiotensin 1-converting enzyme (ACE) inhibitory activities. Most algal species examined showed good ACE inhibitory activities after the enzymatic hydrolysis. However, E. cava was the most potent ACE inhibitor of the seven species. Flavourzyme digest of E. cava exhibited an $IC_{50}$ of around $0.3\;{\mu}g/mL$ for ACE; captopril has an $IC_{50}$ of $\~0.05\;{\mu}g/mL$. The Flavourzyme digest was separated to three fractions by an ultrafiltration membrane (5, 10, 30 kDa MWCO) system according to the molecular weights. The active components were mainly concentrated in >30 kD fraction which are composed of the highest protein content $(27\%)$ and phenolic content (261 mg/100 mL) compared to the other two smaller molecular weight fractions. Therefore, the active compounds appear to be relatively high molecular weight complex molecules associated with protein (glycoprotein) and polyphenols. Therefore, E. cave is a potential source of antihypertensive compound.
굴 효소 가수분해물은 굴을 alcalase, protamex, neutrase, flavourzyme, pepsin으로 각각 처리하였고, 이들의 ACE 저해활성을 측정하였다. ACE 저해활성은 가수분해 시간에 따라 증가 또는 감소하였으며, 그 중 10시간 이상 가수분해 처리한 PEH에서 가장 높은 ACE 저해활성을 나타내었다. PEH 가수분해물을 한외여과(30, 10 kDa) 하여 낮은 분자량의 분획물을 얻었다. 30 kDa와 10 kDa 이하 분자량 별 ACE 저해활성은 각각 $69.18{\pm}0.75$, $83.71{\pm}1.12$의 활성을 나타내었다. 이 결과 10 kDa 이하의 시료로부터 HPLC column (watchers 120 ODS-AP $250{\times}4.6$ ($5{\mu}m$))을 이용하여 각각의 활성 분획을 분취하여 얻은 6분획의 ACE 저해 활성은 29.56~85.85% 로 나타났다. 그 중 저해활성이 가장 높게 나타나는 B fraction의 아미노산 서열을 확인한 결과 Leu-Gln-Pro 임을 확인하였고, peptide합성하여 얻은 저해활성 농도($IC_{50}$)가 1.18 uM임을 확인하였다. 이러한 결과는 PEH를 이용하여 건강 기능성 식품의 개발에 도움이 될 수 있을 것으로 생각된다.
생리활성 보유 식물자원 발굴 및 이용을 위해 큰까치수영 지상부에 대한 항산화 및 항고혈압 활성을 검정하였으며 페놀화합물의 함량은 메탄올 추출물이 2.62%, 물 추출물이 0.23%였고 메탄올 추출물에서 얻어진 용매별 분획물 중에서는 에틸차세테이트 분획이 37.76%로 가장 함량이 높았다. Linoleic acid 자동산화에 대한 저해효과는 메탄올 추출물이 반응 6일째에 83%이상의 저해율을 보여 ${\alpha}-tocopherol$의 -2%보다 탁월하게 우수였으며 각 분획물 중에서는 핵산 및 에텔 분획이 매우 효과적으로 자동산화를 저해하였다. Superoxide anion 라디칼에 대헤서는 큰까치수영의 메탄올 추출물과 물 추출물이 $5{\sim}200\;{\mu}g/ml$의 농도에서 $86{\sim}109%$ 및 $96{\sim}122%$로 항산화제인 ascorbic acid의 $-4{\sim}69%$보다 월등하게 우수한 소거능을 보였으며 DPPH 라디칼에 대해서는 에틸아세테이트분획이 $26.8\;{\mu}g/ml$의 $RC_{50}$로 좋은 소거 효과를 나타내었다. ACE에 대한 저해활성은 $4,000\;{\mu}g/ml$의 농도에서 물 추출물(33%)보다는 메탄올 추출물(71%)이 효과적이었으며 분획물 중에서는 n-hexane fraction(133%), ether fraction(100%) 및 ethylacetate fraction(88%) 분획이 매우 효과적인 저해활성을 나타내었다.
새로운 고부가가치의 구기자 품종을 개발하기 위하여 구기자 표준 품종들과 이들의 교배종들의 순과 잎, 열매와 뿌리등의 물 추출물과 메탄올 추출물을 제조한 후 심혈관 질환 예방생리기능성과 노화억제 항산화 활성을 조사하여 비교하였다. 구기자 표준품종들의 생리기능성 가운데, 항산화 활성은 청운품종의 구기순의 메탄올 추출물이 93%로 가장 높았고 항고혈압성 안지오텐신 전환효소 저해활성은 청양7호의 지골피의 물 추출물에서 84.1%로 제일 높았다. 구기자 교배종의 생리 기능성중 항산화 활성은 명안A-2의 지골피의 메탄올 추출물이 93.1%로 제일 높았고 ACE저해활성은 DO148-72 (A11) 교배종 열매의 메탄올 추출물이 96.9%로 제일 높았다. 그러나 혈전용해활성과 HMG-CoA reductase 저해활성은 표준품종과 교배종 모두에서 대체로 미약하거나 없었다. 이상의 결과를 종합하였을 때 청운 표준품종의 구기순과 명안A-2 교배종의 지골피가 우수한 항산화 자원으로, DO148-72 (A11)교배종의 구기열매가 훌륭한 항고혈압성 ACE저해제 자원으로 각각 기능성 제품생산에 유용하게 활용될것으로 사료된다.
장류 발효기술과 유용 천연물을 활용한 프리미엄 발효소스의 개발을 목적으로 소맥분과 콩의 발효물(페이스트 형태), 미더덕 껍질, 뽕잎, 양파 추출물을 단독 또는 혼합하여 첨가한 발효소스를 제조한 후, ACE 저해능과 DPPH 라디칼 소거능을 측정하였다. 그 결과 무첨가 대조구에 비하여 추출물 첨가 발효소스의 ACE 저해능과 라디칼 소거능은 증가하였다. 특히 뽕잎과 양파 추출물을 혼합하여 첨가한 발효소스가 대조구에 비하여 상대적으로 ACE 저해능이 26.92% 증가하였고, DPPH 라디칼 소거능은 40.66% 증가하였다. 이러한 결과는 항고혈압능과 항산화능을 보유한 고품질 소스의 제조에 소맥분과 콩의 발효물, 뽕잎과 양파 추출물 등이 활용될 수 있음을 시사한다.
This study was performed to investigate the physicochemical activities such as mineral contents, antioxidantant activities, ${\partial}$-glucosidase activity, and angiotensin I-converting enzyme(ACE) inhibitory effect of Dangmyon (starch vermicelli) prepared with mulberry leaves powder. Mulberry leaves powder was added in ratio (w/w) of 0% (CON), 0.5% (MD1), 1.0% (MD2), 1.5% (MD3), and 2.0% (MD4), and then mineral contents, total polyphenol contents, antioxidant, antidiabetic, and antihypertensive activities of the Dangmyon were measured. The mineral contents were significantly increased by the addition of mulberry leaves powder (p<0.001). The total polyphenol contents and antioxidant activities of Dangmyon were significantly increased by the addition of mulberry leaves powder (p<0.05). In terms of antidiabetic and antihypertensive activities showed MD1~MD4 samples higher contents of ACE and ${\alpha}$-glucosidase compared to control (p<0.05). Our findings suggest that addition of mulberry leaves powder to Dangmyon may improve the effects of anti-oxidation, anti-DM, and anti-hypertension and provide health benefits of consumers.
키토산 올리고당이 ACE 저해활성과 SHR의 혈압에 미치는 영향을 검토하였다. 키토산 올리고당은 모두 ACE 저해활성을 나타내었다. ACE 저해활성$(IC_{50})$은 3량체가 $0.9\;{\mu}mole$로 가장 우수하였고 2량체의 경우에는 $2.4\;{\mu}mole$, 그 외의 올리고당은 모두 $>100\;{\mu}mole$였다. 강력한 ACE 저해제인 Captopril(2-D-mercaptopropanoyl-L-proline)의 인체 투여량을 기준으로 3량체 키토산 올리고당 2.14 mg/kg을 SHR에 강제 경구투여한 바, 4시간 경에 8주령 및 21주령 SHR모두 최저혈압을 보였고 이 때의 혈압 강하는 8주령 SHR $27{\pm}4.8\;mmHg$, 21주령 SHR $36{\pm}4.3\;mmHg$로 나타났다. 따라서 3량체 키토산 올리고당은 2량체 키토산 올리고당과 함께 향후 고혈압 치료제로서 응용가능함이 시사되었다.
Lee, Da Young;Lee, Seung Yun;Kang, Hea Jin;Park, Yeonhwa;Hur, Sun Jin
Journal of Animal Science and Technology
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제62권6호
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pp.933-947
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2020
This study was conducted to develop an effective heparin extraction method by using low-cost and highly effective enzymes from six pig by-products (liver, lung, heart, stomach, small intestine, and large intestine), and analyze their bioavailability. Low-cost and highly effective enzymes (alkaline-AK and papain) and a common enzyme (trypsin) were used for the heparin extraction. The angiotensin I- converting enzyme (ACE) inhibitory activity and the antimicrobial activity of extracted heparin were analyzed to verify their bioavailability. The average amount of heparin extracted per kilogram of pig by-products was 439 mg from the liver, 127 mg from the lung, 398 mg from the heart, 261 mg from the stomach, 197 mg from the small intestine, and 239 mg from the large intestine. Various enzymes were used to extract heparin, and the amount of extracted heparin was similar. Based on 1 g of pig by-product, the enzymes trypsin, papain, and alkaline-AK could extract 1,718 mg, 1,697 mg, and 1,905 mg of heparin, respectively. Heparin extracted from pig by-products showed antihypertensive activity and antimicrobial activity against Staphylococcus aureus at low populations. These results indicated that heparin can be obtained from pig by-products at a low cost.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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