DCs, like the sensory neurons, express vanilloid receptor 1 (VR1). Here we demonstrate that the VR1 agonists, capsaicin (CP) and resiniferatoxin (RTX), enhance antiviral CTL responses by increasing MHC class I-restricted viral antigen presentation in dendritic cells (DCs). Bone marrow-derived DCs (BM-DCs) were infected with a recombinant vaccinia virus (VV) expressing OVA (VV-OVA), and then treated with CP or RTX. Both CP and RTX increased MHC class I-restricted presentation of virus-encoded endogenous OVA in BM-DCs. Oral administration of CP or RTX significantly increased MHC class I-restricted OVA presentation by splenic and lymph node DCs in VV-OVA-infected mice, as assessed by directly measuring OVA peptide SIINFEKL-Kb complexes on the cell surface and by performing functional assays using OVA-specific CD8 T cells. Accordingly, oral administration of CP or RTX elicited potent OVA-specific CTL activity in VV-OVA-infected mice. The results from this study demonstrate that VR1 agonists enhance anti-viral CTL responses, as well as a neuro-immune connection in anti-viral immune responses.
Chronic hepatitis C virus (HCV) infection is responsible for the development of liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. HCV core protein plays not only a structural role in the virion morphogenesis by encapsidating a virus RNA genome but also a non-structural role in HCV-induced pathogenesis by blocking innate immunity. Especially, it has been shown to regulate JAK-STAT signaling pathway through its direct interaction with Janus kinase (JAK) via its proline-rich JAK-binding motif ($^{79}{\underline{P}}GY{\underline{P}}WP^{84}$). However, little is known about the physiological significance of this HCV core-JAK association in the context of the virus life cycle. In order to gain an insight, a mutant HCV genome (J6/JFH1-79A82A) was constructed to express the mutant core with a defective JAK-binding motif ($^{79}{\underline{A}}GY{\underline{A}}WP^{84}$) using an HCV genotype 2a infectious clone (J6/JFH1). When this mutant HCV genome was introduced into hepatocarcinoma cells, it was found to be severely impaired in its ability to produce infectious viruses in spite of its robust RNA genome replication. Taken together, all these results suggest an essential requirement of HCV core-JAK protein interaction for efficient production of infectious viruses and the potential of using core-JAK blockers as a new anti-HCV therapy.
Kim, Hyun-Seok;Chung, Yong-Ju;Jeon, Yeong-Joong;Lee, Sung-Hee
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.9
no.4
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pp.386-392
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1999
A large-scale culture of hepatitis A virus in human diploid MRC-5 cells was conducted. In a roller bottle culture, the virus was grown to a maximum titer in 3 weeks after infection. Over 95% of the cell-associated virus was excreted after culturing the infected cells in suspension media without fetal bovine serum for 3 days. The cultured virus was inactivated with formalin, concentrated by ultrafiltration, and partially purified by ultracentrifugation in a non-ionic gradient medium of Renocal. Two separate peak fractions showing high anti-HAY ELISA titer were pooled and about 40% of HAV antigen was recovered by this purification procedure. Of the partially purified vaccine, the protein pattern in SDS-PAGE and immunogenicity in mice were compared with a commercial HAV vaccine. In SDS-PAGE, the purified vaccine in this study and the commercial vaccine showed almost the same protein pattern. The seroconversion rate of the purified vaccine in mice was not different from that of the commercial vaccine. Therefore, we could prepare a good grade of HAV vaccine by a simple purification procedure although the purification itself was not completed.
Kim, Hee-sun;Graham, Robert Ross;Lee, Jun-hak;Kang, Mun-il;Koh, Hong-bum
Korean Journal of Veterinary Research
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v.33
no.2
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pp.321-326
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1993
Sixty eight wild rats were caught from Seoul, Kyonggi, Kangwon, Cholla, and Kyongsang provinces in Korea. All of them were confirmed in the same species, Rattus norvigicus. All of sera from wild rats were examined by indirect immunofluorescent test against Hantaan-related virus. Detection of anti-body to Hantaan-related virus were 4 out of 68 rats(5.9%), including 2 of 8(25.0%) rats in Kangwon and 2 of 20 rats(10.0%) in Kyongsang province. No difference of the sero-positive rates between sex of rats tested to Hantaan-related virus was recognized. According to age, four rats with antibodies(1:320~640) to Hantaan-related virus belonged one subadult, one young adult, one middle aged adult, and one old adult, respectively.
Immunomagnetic separation of virus coupled with .reverse transcription-polymerase chain reaction (IMS-PCR) was performed with infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV). A DNA fragment of expected size was synthesized in the RT-PCR with total RNA extracted from IHNV inoculated CHSE-214. In a SDS-PAGE analysis, a protein band of over 70kDa was detected from non-infected cells and cells inoculated with IHNV and infectious pancreatic necrosis virus (IPNV). This protein was detected in the Western blot analysis probably because of non-specific reaction to monoclonal antibody against IHNV nucleocapsid protein. In the immunomagnetic separation, magnetic beads coated with monoclonal antibody against the IHNV nucleocapsid protein was incubated with supernatant from IHNV inoculated CHSE-214 cells. During this process, the non-specifically reacting protein could be removed by washing the magnetic bead with PBS in the presence of an external magnetic field, and viral proteins were detected from the remaining, cleaned magnetic beads. It was necessary to extract viral RNA from the captured virus particles before RT-PCR, and no DNA product was detected when the captured virus was only heated 5 min at $95^{\circ}C$. A PCR-product of expected size was synthesized from IMS-PCR with magnetic beads double coated either by goat anti-mouse IgG antibody -monoclonal antibody or streptavidin - biotin conjugated monoclonal antibody.
Ku, Keun Bon;Shin, Hye Jin;Kim, Hae Soo;Kim, Bum-Tae;Kim, Seong-Jun;Kim, Chonsaeng
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.30
no.12
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pp.1843-1853
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2020
COVID-19, caused by the novel coronavirus SARS-CoV-2, has spread globally and caused serious social and economic problems. The WHO has declared this outbreak a pandemic. Currently, there are no approved vaccines or antiviral drugs that prevent SARS-CoV-2 infection. Drugs already approved for clinical use would be ideal candidates for rapid development as COVID-19 treatments. In this work, we screened 1,473 FDA-approved drugs to identify inhibitors of SARS-CoV-2 infection using cell-based assays. The antiviral activity of each compound was measured based on the immunofluorescent staining of infected cells using anti-dsRNA antibody. Twenty-nine drugs among those tested showed antiviral activity against SARS-CoV-2. We report this new list of inhibitors to quickly provide basic information for consideration in developing potential therapies.
Pathophysiological mechanism of hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) is not fully understood. Major clinical findings of HFRS patients are widespread hemorrhage, acute renal failure and shock. Basic lesion is vascular injury with microvascular hemorrhage and relatively little inflammation. According to autopsy findings, renal medulla shows focal hemorrhage, tubular necrosis and interstitial mononuclear infiltrates. The predominant cell type in the renal and pulmonary interstitium is a fibroblast and it participates in the healing process at the injury site by secreting a large amount of extracellular matrix proteins. Cultured human lung fibroblasts and Mongolian gerbil fibroblasts were known to be good host cells for the hantaan virus. It is possible that not only the endothelial cell but also the fibroblast is a target of Hantaan virus and the fibroblast might be involved in the pathogenesis and the healing process in HFRS. Integrins are adhesion molecules, and act as receptors for many extracellular matrix proteins. Recently, there are many reports that cell surface integrins influence on some viral infections or reversely viruses influence on the expression of integrins. The ${\alpha}_5{\beta}_1$ integrin is a major receptor for the fibronectin which is an important extracellular matrix protein secreted by fibroblasts. In this study, the role of ${\alpha}_5{\beta}_1$ integrin in the infection of Hantaan virus was examined by using anti-${\alpha}_5{\beta}_1$, integrin, anti-${\alpha}_5$ integrin and anti-${\beta}_1$, integrin antibodies in chicken embryo fibroblasts (CEF) and Mongolian gerbil fibroblasts(MGF). The treatment of anti-${\alpha}_5{\beta}_1$, integrin antibody in CEF reduced the virion titers 26.8% and the amount of nucleocapsid N protein 32.6% when compared with control CEF. When MGF were treated with anti-${\alpha}_5$, anti-${\beta}_1$ and anti-${\alpha}_5{\beta}_1$ integrin antibodies, virion titers were reduced by 26.5%, 29.4% and 28.7% and the amount of nucleocapsid N protein were reduced by 65.2%, 59.7% and 72.6%. These results suggested that ${\alpha}_5{\beta}_1$ integrin might act as a receptor for the Hantaan virus or blocking of ${\alpha}_5{\beta}_1$ integrin influences on the viral replication in CEF and MGF. It is also possible that the blocking of only one subunit of integrin represents similar results in that of whole molecule.
Purpose: Recently, the incidence of acute hepatitis A has increased nationwide and is related to a low rate of IgG anti-HAV production. To establish effective measures for preventing hepatitis A virus infection, an epidemiologic study on the seroprevalence of anti-HAV is needed. Thus, we investigated the seroprevalence of IgG anti-HAV in children living in Gwangju and Jeonnam. Methods: IgG anti-HAV levels were measured in a total of 1,435 patients who visited Chosun University Hospital between January 2009 and December 2009. Results: The overall seropositve rate was 40.8% (586/1,435). The seropositive rates were 41% among children under the age of 1 year, 49.9% for children 1~5 years old, 51.1% among individuals 5~10 years old, 12.9% for individuals 10~15 years old, and 8.2% for subjects over 15 years old. There was no significant difference between genders in any group. The seropositive rates in Gwangju and Jeonnam were 57.3% and 32.9% for children under the age of 1 year, 52.5% and 44.3% for children 1~5 years old, 60.2% and 33.9% among children 5~10 years old, 14.1% and 9.7% for children 10~15 years old, and 10.8% and 4.2% for individuals over 15 years old. Conclusion: The results demonstrated the low rates of IgG anti-HAV, particularly among subjects over 10 years old, which suggests the possibility of increasing clinical HAV infection rates among adults in the near future. We should actively prevent the spread of hepatitis A virus. Vaccination is the most effective means of preventing hepatitis A virus transmission among persons at risk for infection. Hepatitis A vaccination is recommended for children who have low IgG anti-HAV seropositive rates.
As an alternative method to produce low cost reagents for immunodiagnosis and protect the plants from viral disease, a gene encoding a single chain variable fragment(scFv) recombinant antibody targeted to the coat protein of cucumber mosaic virus (CMV) was expressed in Nacotiana tabacum. The source of the scFv recombinant antibody gene was from spleen tissue of an immunized mouse. The gene was initially cloned into the pCANTAB5E phagemid and expressed in E. coli. In the following study, the antibody gene was subcloned into the plant expression vector, pCAMBIA-1301 and introduced into tobacco leaf tissue via Agrobacterium tumefacients mediated transformation. After transformation, 56 out of 58 plants were shown to carry the desired anti-CMV scFv gene by PCR analysis. Overall, only 12.5% of the 56 putative transgenic plants were found to express the antibody to a detectable level.
Mooi, L. Yang;Ali, A.M.;Norhanom, A.B.;Salleh, K. Mat;Murakami, A.;Koshimizu, K.
Natural Product Sciences
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v.5
no.1
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pp.33-38
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1999
Ethanolic extracts of different parts of 10 local traditional vegetables (ulam) (Amaranthus gangeticus, Jussiaea linifolia, Eugenia polyantha, Trapa incisa, Trichosanthes anquina, Mangifera indica, Pachyrrhirus erosus, Barringtonia mcarostachya, Carica papaya, and Coleus tuberosus) were screened for in vitro antitumor promoting activity using the inhibition test of Epstein-Barr virus (EBV) activation in Raji cells induced by phorbol 12-myristate 13-acetate and sodium-n-butyrate. All the extracts were found to have strong inhibition activity toward EBV-activation, except for leaf extract of T. anquina. The extracts were non-cytotoxic to the Raji cells except for the extracts of A. gangeticus (leaves), B. macrostachya (leaves), E. polyantha (young leaves), and J. linifolia (leaves) where the viability of the cells were decreased significantly.
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