Production of haploids in vitro anther culture of Nicotiana tabacum L. was oriented in a large number on a chemically defined culture medium. The haploids were screened for T.M.V. resistance and the segregating ratio in F$_1$ were in good agreement with the expected ratio.
Anther and/or tissue culture of cross pollinated crops would be very important because it can result in the direct use of haploids or doubled haploids for developing superior hybrids or varieties. The objective of the study was to investigate the response frequencies in anther and/or tissue-cultured hybrids of corn. pearl millet and buckwheat to identify agronomically acceptable germplasm of the crops. 27 crosses of corn inbred lines were evaluated by plating their anthers on N6. MS and Yu-Pei media. Two genotypes of FR1l41/FR16 hybrid cultured on N6 medium and Fla 2BT73/S6013 hybrid cultured on N6 medium responded with one anther producing calli when plated after 5$^{\circ}C$ low temperature treatment for one week. Immature embryos of corn hybrid Suwon 19 responded producing calli that were regenerated to plants at a 8.6 percent success rate. Of the 20 corn hybrids. immature tessels of FR1l41/FR16. B68/A1l6N//KS15. KS16/KS17. GA209/DB578 and SDB126/GA209 crosses responded at a relatively higher success rate producing calli that were regenerated to plants. In tissue culture of elongating culms of pearl millet x Napier grass interspecific hybrid. 2.5-4.0mm long pieces of the culm were good for callus induction resulting in higher success rate. The epicotyl of buckwheat was very good for tissue culture. and the node produced the plants regenerated directly without callus induction on the B5 medium containing I ppm BA and 0.05 ppm IBA. There were great differences in response to anther and/or tissue culture of corn, pearl millet and buckwheat due to genotype x medium and environment interactions.
Doubled haploids have long been recognized as a valuable tool in plant breeding since it not only offers the quickest method of advancing heterozygous breeding lines to homozygosity, but also increased the selection efficiency over conventional procedures due to better discrimination between genotypes within any one generation. Salt tolerant mutants were obtained in rice the variety, 'Hawsungbyeo', through in vitro mutagenesis of in vitro cultured anther-derived calli. Various doses (30, 50, 70 and 90 Gy) of gamma ray were applied to investigate the effect of radiation on callus formation on medium containing 1% NaCl, green plant regeneration, frequency of selected doubled haploid mutants and of the salt tolerant screen. It was demonstrated that the dose of 30 and 50 Gy gamma rays had significant effects on callus formation, regeneration and selection of salt tolerance. No tolerant lines were obtained from non-mutagenized cultures. From gamma ray irradiated cultures, five tolerant lines ($M_2$generation) at germination stage and 13 tolerant lines ($M_3$genoration) at seedling stage were obtained. The frequency of salt tolerant mutants indicates that anther culture applied in connection with gamma rays is an effective way to improve salt tolerance.
To study the effect of genotype of donor plants on anther culture, anthers of nine hybrid cultivars (Derby, Special, Bossanova, Minipaprika, Fiesta, Boogie, Phenlene, Kufrah, and Clarity) of sweet pepper (Capsicum annuum L.) were cultured in a petridish containing C medium (Sibi, Dumas De Vaulx medium) supplemented with 0.1 mg/L 2,4-D and 0.1 mg/L kinetin, 3% sucrose and 0.32% Phytagel. The cultures were incubated in the dark at $35^{\circ}C$ for seven days, and then cultured at $25^{\circ}C$ with a photoperiod of 16 hr. daylength for 40 days. Frequency of callus formation and plant regeneration was varied among cultivars. Callus formation was ranged from 6% in Phenlene to 69.8% in Kufrah. The highest percentage of regenerated plantlets was obtained in cv. Phenlene (2.67%) followed by Bossanova (2.41%). Result of ploidy analysis; chromosome number observation and flowcytometry analysis, showed that haploid plants could be developed from all of these hybrid cultivars except cv. Fiesta, where highest percentage of haploid plants were obtained in Minipaprika (40%) followed by cv. Bossanova (36.1%). Haploid plants derived from these hybrid cultivars contained single set of chromosome (12 in numbers), higher stomata density (numbers), and smaller sized stomata as compare to diploid plants. The mean length of stomata was 26.9 ${\mu}m$ in haploid plants and 35.7 ${\mu}m$ in diploids.
The influence of genotype and ecotype on the anther culture efficiency using hybrid of hot pepper (Capsicum annuum L.) was investigated. Anther culture efficiency was differently dependent on the genotype of parents. In the efficiency of embryo production, the cross combination using female parents with high embryo inducing ability was higher than those with low embryo inducing ability. It was shown that genotype and cytoplasm has effect on embryo production. Also the embryogenic ability was different according to ecotype of cross lines. The frequency of embryo production were the highest in Local variety $\times$ pimento cross combinations with 17.8~46.1 and the lowest in Pimento $\times$ Local variety cross combinations with 5.4~8.5%. Embryo inducing frequency was the middle value with 10.25~23.1% in Local variety $\times$ Tropical variety, Tropical variety $\times$ Local variety, Tropical variety $\times$ Pimento, and Pimento $\times$ Tropical variety cross combinations.
Five $F_1$ hybrids of radish(Raphanus sativus L.) were used in the study for induction of microspore derived embryos. Anthers from the mid-uninucleate to early bicellular stage were inoculated on the modified B5 medium and modified Nitch-Nitch medium supplemented with several growth regulators. The efficiency of anther culture was dspendent on the genotype of donor plants and we obtained various culture efficiency from different genotypes. Induction of embryos from microspore was best result on Nitsch-Nitsch media supplemented with 0.1mg/l NAA and 0.05mg/l BAP. Heat treatments of anthers at $35^{\circ}C$-2days and combined with pretreatment of $4^{\circ}C$ for 2, 8, 12 and 16days . Among the treatments, $35^{\circ}C$-2 days treatment combined with $4^{\circ}C$-2days pretreatment treatment were the most effective in developing embryos from microspores.
Herbicide tolerant rice (Oryza sativa L. cv. Ilpumbyeo) cell lines were selected from $\gamma$-ray-irradiated anther-derived cell cultures. The anther-derived cell clusters were small (300 to 400 ${\mu}{\textrm}{m}$ in diameter) and uniform ones that were screened by miracloth filtering. The cell suspensions were very efficient to plate one layer onto agar medium and to screen target cell lines. Herbicide tolerant cell lines were selected by 5 mg/L cyhalofop butyl (CHB) treatment by using the small cell suspensions on agar N6 medium containing 1 mg/L 2,4-D and 0.2 mg/L kinetin. Of the cell lines, one line (CHB-1) showed stable tolerance at 10 mg/L concentration after 6-month culture without herbicide suspension. Growth stability of CHB-1 was similar to that of control cell line on 10 mg/L CHB containing medium. In this experiment we established herbicide tolerant cell line selection system by using anther-derived uniform-cell suspensions with $\gamma$-ray-irradiation.
The research concerned of the regeneration of plants from embryos obtained from anther cultures of ginseng (Panax ginseng C. A. Meyer). The aim was to determine the influence of the regeneration medium on the efficiency of the regeneration process. We conducted to determine the optimum conditions such as cold pretreatment, plant growth regulators and carbon sources on anther culture of P. ginseng. Highest callus formation rate was obtained when flower buds pretreated at $4^{\circ}C$ for 1 day. Among the treated growth regulators with various degrees of concentration in Murashige and Skoog's (MS) medium, 4.53 ${\mu}M$ of 2.4-dichlorophenoxyacetic acid and 4.44 ${\mu}M$ of 6-benzylaminopurine gives the most responsive callus with the frequency of 73.89% and 129.53 g of fresh weight. When we used 3-9% of sucrose and maltose among the different kinds and various concentrations of carbohydrates, callus was formed highest 67.29% in the medium with 3% of sucrose. Shoots induced from callus supplemented with 28.9 ${\mu}M$ of gibberellic acid and rooted in Gamborg's B5 medium supplemented with 14.7 ${\mu}M$ of indole-3-butyric acid.
The anthers of late uninucleate microspore or early binucleate microspore stage of Paeonia suffruticosa Andr. (economic tree) were cultured on the modified Murashige and Skoog's medium suppliment with Keinetin, 2,4-D, and NAA for inducing haploid plants. The results are as follows; 1. Callus were induced from both anther locule and anther wall, where that from anther locule was identified as haploid. 2. Among 2,000 anthers cultured, fourteen haploid callus were developed. These haploid callus were clearly identified to be originated from the microspore in anther locule. 3. Diploid callus were induced only 0.5 percent from the callus of endothelium of anther wall, septium of two neighboring anther locule, parenchyma tissues of connectives and or anther locules. 4. In the anther locule of Paeonia suffruticosa Andr. cultured in medium, swollen microspores, polynucleate microspores, multicellurar pollen grains, or callus mass was frequently observed. And the haploids were seemed to be caused by the callus originated from the reduced microspore.
Dihaploid lines of tobacco (Nicotiana Tabacum L.) were developed from vitro anther culture of single cross F 1, "SC 72"X "Hicks". All genetic materials were evaluated for agronomic performance and chemical composition. Compared with midparent value, pollen derived dihaploid progenies showed reduced vigor in all measured features of plant growth, and increased total alkaloids as well as decreased reducing sugar content.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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