• Journal of Ginseng Research
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• 제23권4호
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• pp.217-221
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• 1999

홍삼으로부터 염기성 수웅액 추출, 음이온교환 크로마토그래피 및 겔여과 크로마토그래피를 순차적으로 수행하여 항트롬빈 활성을 보이는 다당체를 분리하였다. 이 다당체는 셀룰로스 아세테이트막을 사용한 전기영동에서 하나의 띠로 나타나 비교적 순수하게 정제되었음을 알 수 있었고, 겔여과 크로마토그래피에서 결정된 평균 분자량은 약 177kDa이었다. $40.2\%$의 유론산, $9.2\%$의 황산기 및 $1.5\%$의 단백질을 포함하는 산성다당체였고, 구성 중성당으로 rhamnose, mannose, galactose, arabinose, glucose, fucose, xylose를 1.00 : 0.88 :0.86 : 0.78 : 0.70 : 0.33 : 0.22의 비율로 포함하고 있었다. 이 다당체는 트롬빈에 의한 피브리노겐의 응고를 농도에 비례하여 저해하였고, 혈장을 사용한 실험에서 내인성 경로를 통해 혈액응고를 저해하는 것으로 나타났다.

• 한국동물학회지
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• 제38권4호
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• pp.490-497
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• 1995

미국흰불나방 의지방체 조직을 [35S]-메타이오닌이 포하된 배지에서 조직배양한 결과, 저장단백질-1(SP-1)의 전용기부터 용 1일 사이에 지방체로 흡수됨을 알았다. CHAPS, Triton X-100 등의 계면활성제를 농도별로 처리하여 막단백질의 용해도를 스크리닝한 뒤, anti-SP-1 polyclonal 항체를 쓴 Western blotting과 ligand blotting, 그리고 in vitro reductive methylation으로 14C을 표지한 저장단백질-1을 사용한 fluorography 등으로 1개의 수용체 밴드를 확인하였다. 1% Triton X-100으로 용해시킨 부분정제하였고, SDS-PAGE에 의해서 분자량을 측정한 결과 약 80 kDa로 나타났고 isoelectric focusing 시행 결과 등전점은 약 6.1로 계산되었다. 수용체 분자는 환원조건과 비환원조건의 차이와 전기영동 중의 온도에 따라서 SDS-PAGE상의 뚜렷한 밴드 양상의 차이를 나타내었다.

• 한국자기공명학회논문지
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• 제17권2호
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• pp.67-75
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• 2013

ATP synthase produces ATP, a major energy source for metabolic processes in organisms, from ADP and inorganic phosphate in cellular membranes. ATP synthase is known as a rotary motor, in which the c-subunit ring functions as a rotor. In this work, we have tried to develop a more general preparation procedure of thermophilic $F_oc$-ring ($TF_oc$-ring) for NMR measurements. The expression of $TF_oF_1$ is easily affected by various experimental conditions such as temperature, shape and size of a flask, a volume of medium, and shaking rate of an incubator. Accordingly, we have tried to optimize the expression conditions of $TF_oF_1$. $TF_oc$-rings were purified from $TF_oF_1$ according to a reported method. We modified purification procedures to improve purity and yield of $TF_oc$. On top of them, we found a new combination of detergents for the purification at anion-exchange column chromatography. To examine the effect of lipid environments on the structure, the $TF_oc$-rings were reconstituted into two kinds of lipid bilayers, namely, saturated and unsaturated lipid ones. Then, we have compared characteristics of the $TF_oc$-ring structures in these membranes with solid-state NMR.

• 미생물학회지
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• 제39권3호
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• pp.148-154
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• 2003

Moraxella sp. CK-1는 남조류 Anabaena cylindrica의 생장을 억제한다고 알려져 있다. Moraxella sp. CK-1의 세포외 autolysin의 분리는 다음과 같은 방법으로 분리를 시도하였다. 흡광도 660 nm에서 0.7～0.8이 되도록 BGC-11세포배양액에서 키우고, 원심분리로 균주인 Moraxella sp. CK-1를 제거한 뒤 세포배양액을 Amicon ultrafiltration으로 농축을 하였다. 농축한 세포배양액을 $(NH_{4})_{2}SO_{4}$ 로 0～20%, 20～40%, 40～60%, 60～80%로 분획하여 단백질을 14,000${\times}$g로 침전 시켰다. 침전된 단백질을 20 mM Tris-HC1, pH 8.0완충용액으로 현탁시킨 뒤, 동일 완충용액을 이용하여 투석을 하였다. $(NH_{4})_{2}SO_{4}$로 분획한 뒤 활성확인을 위해 Anabaena Cylindrica가 도포된 평판배지에서 활성을 확인한 결과, 40～60%, 60～80%에서 활성이 있음을 확인하였다. 이들을 각각 Mono-$Q^{TM}$ HR 5/5 (column volume 1 ml) column을 이용하여 FPLC에서 단백질을 분리하였다. $(NH_{4})_{2}SO_{4}$ 로 분획한 40～60%에서는 major peak 3개, 60～80% 분획에서는 2개의 major peak가 분리되었다. Mono-$Q^{TM}$ HR 5/5 column에서 분리되어 나온 major peak 5개를 투석한 뒤 Anabaena cylindrica lawn에서 활성을 확인하였으나 확인이 되지 않았다. PVDF membrane을 이용하여 transfer하여 40～60% 침전에서 17 kDa의 단백질을 얻어냈다. 이를 N-terminal amino acid sequence를 하여 serine pretense의 계열임을 확인하였다.

• Molecules and Cells
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• 제46권9호
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• pp.545-557
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• 2023

Sphingomyelinase (SMase) catalyzes ceramide production from sphingomyelin. Ceramides are critical in cellular responses such as apoptosis. They enhance mitochondrial outer membrane permeabilization (MOMP) through self-assembly in the mitochondrial outer membrane to form channels that release cytochrome c from intermembrane space (IMS) into the cytosol, triggering caspase-9 activation. However, the SMase involved in MOMP is yet to be identified. Here, we identified a mitochondrial Mg²⁺-independent SMase (mt-iSMase) from rat brain, which was purified 6,130-fold using a Percoll gradient, pulled down with biotinylated sphingomyelin, and subjected to Mono Q anion exchange. A single peak of mt-iSMase activity was eluted at a molecular mass of approximately 65 kDa using Superose 6 gel filtration. The purified enzyme showed optimal activity at pH of 6.5 and was inhibited by dithiothreitol and Mg²⁺, Mn²⁺, Ni²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Fe²⁺, and Fe³⁺ ions. It was also inhibited by GW4869, which is a non-competitive inhibitor of Mg²⁺-dependent neutral SMase 2 (encoded by SMPD3), that protects against cytochrome c release-mediated cell death. Subfractionation experiments showed that mt-iSMase localizes in the IMS of the mitochondria, implying that mt-iSMase may play a critical role in generating ceramides for MOMP, cytochrome c release, and apoptosis. These data suggest that the purified enzyme in this study is a novel SMase.

• 자원리싸이클링
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• 제24권5호
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• pp.33-39
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• 2015

음이온 교환막을 이용한 확산투석에 의해 폐솔더 박리액으로부터 질산을 효율적으로 회수하기 위한 기초 연구를 실시하였다. 우선 모의용액 실험의 경우 유속, 유속비, 질산농도, 금속이온 종류 및 농도 등이 질산 회수율에 미치는 영향을 조사하였다. 유속이 증가함에 따라 질산 회수율은 감소하였고 급액에 대한 순수의 유속비(W/F)가 증가할수록 질산 회수율은 증가하여 유속비가 1.5이상에서 약 99%의 질산 회수율을 보였다. 급액중 질산용액의 농도가 증가함에 따라 3.0 M 까지는 산회수율이 증가 하였으나 3.0 M 이후로는 회수율은 점차 낮아 졌다. 확산투석막을 통과하는 금속이온의 투과율은 Pb, Na, Cu순 이었고, Fe과 Sn은 투과되지 않았다. 실제 폐솔더액을 사용하여 유속 $0.9L/hr-m^2$, W/F = 1.3 으로 확산 투석을 실시한 결과 약 94%의 질산 회수율을 얻을 수 있었다.