• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제16권11호
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• pp.1809-1813
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• 2006

A gene corresponding to 4-${\alpha}$-glucanotransferase (${\alpha}GTase$) was cloned from the thermophilic bacterium Thermus brockianus. The nucleotide sequence analysis showed that the ${\alpha}GTase$ gene is composed of 1,503 nucleotides and encodes a polypeptide that is 500 amino acids long with a calculated molecular mass of 57,221 Da. The deduced amino acid sequences of Thermus brockianus ${\alpha}GTase$ (TBGT) exhibited a high level of similarity to the amino acid sequence of ${\alpha}GTase$ of Thermus thermophilus (86%), but low level of homology to that of E. coli (26%). The TBGT gene was overexpressed in E. coli BL21, and the corresponding recombinant enzyme was efficiently purified by Ni-NTA affinity chromatography. The enzymatic characteristics revealed that optimal pH and temperature were pH 6 and $70^{\circ}C$, respectively. Most interestingly, TBGT reacted with small oligosaccharides, especially maltotriose, to form various maltooligosaccharides by using its disproportionation activity.

• Applied Biological Chemistry
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• 제38권2호
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• pp.111-117
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• 1995

CRP (cAMP receptor protein)은 cAMP와 결합하여 cAMP-CRP 복합체를 형성하여 전사조절의 조절인자로서 작용한다. crp 유전자에 변이를 도입하여 cAMP의 비존재 상태에서 cAMP-CRP와 비슷한 기능을 가진 crp 유전자가 도입된 대장균 MK2001 (crp, cya::km)을 숙주로 사용하여 cAMP 혹은 cGMP의 비존재하에서도 mal 유전자의 발현을 촉진시키는 유전자 sfs (sugar fermentation stimulation) 수 종을 클로닝 하였다. 본 실험에서는 이미 밝혀진 nlp (Ner like protein) 유전자와 같이, sfs의 새로운 유전자를 탐색하여, 그 중 sfs4의 2126 bp 전 염기배열을 결정하고, 잠정적인 sfs4의 promoter 영역에는 CRP 단백질과의 결합 DNA 공통 염기배열(5' AAT TGTGA ACACCA TCACC CGT 3')이 존재함을 확인했다. lacZ 융합 유전자를 작성하여 TP2010R1 MK2001의 균주에서 cAMP를 첨가할 경우 각각 2.3배, 1.8배의 ${\beta}-galactosidase$ 활성이 증가하는 것으로 보아 sfs4는 cAMP-CRP에 의해 발현 조절을 받는 것으로 나타났다.