• 식물조직배양학회지
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• 제27권3호
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• pp.169-173
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• 2000

Amaranthus hypochondriacus의 저장 단백질을 encoding 하는 AmA1 유전자를 RT-PCR 방법을 이용하여 분리하고 특성화하였다. AmAl 유전자를 담배에 형질전환 시키기 위해 CaMV 35S promoter와 3'NOS를 가지고 있는 식물 발현 vector에 subcloning 하고 이 재조합 vector를 이용하여 Agrobacterium-mediated형질전환 방법을 이용하여 담배에 도입시켰다 신초는 0.1 mg/L NAA, 1.0 mg/L BA, 100 mg/L kanamycin 그리고 250 mg/L cefotaxime이 첨가된 MS 선발 배지에서 선발했고, 선발된 신초는 식물 생장 조절제를 첨가 하지 않고 200 mg/L kanamycin과 250 mg/L cefotaxime이 첨가된 MS배지에서 뿌리를 유도하였다. 선발된 담배의 게놈내의 AmA1 유전자의 존재는 PCR 방법과 hybridization을 이용하여 확인되었고, AmA1 유전자의 발현은 RT-PCR방법과 Southern blot hybridization을 사용하여 확인되었다.

• BMB Reports
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• 제38권1호
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• pp.41-48
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• 2005

In this study we developed the transposon-mediated shuttle vector 'Hanpvid', which composed of HaNPV (Heliothis armigera nuclear polyhedrosis virus) genomic DNA and a transposon cassette from Bacmid of Bac-to-Bac system. Hanpvid replicates in E. coli in the same way as Bacmid and retains infective function in cotton bollworm cells (Hz-AM1). Using Hanpvid we constructed a recombinant virus, which could infect Hz-AM1 cells and generate recombinant HaNPV (rHa-Bar) containing the barnase gene, a ribonuclease gene from Bacillus amyloliquefaciens. Since the expression vector carrying barnase gene cannot replicate in the absence of barstar, a specific inhibitor of barnase, we constructed a new cotton bollworm cell line (AM1-NB) using the marker rescue method. In AM1-NB barstar was integrated into the cellular chromosome to sustain the replication of rHa-Bar. To screen out recombinant HaNPV for potential use as biopesticide, Hz-AM1 and AM1-NB cell lines were infected with rHa-Bar, respectively. The results obtained indicate that Viral progenies in AM1-NB were 23 and 160 times greater than those in Hz-AM1 48 h and 72 h after infection, respectively. With additional insertion of the polyhedron gene from AcNPV (Autographa californica nuclear polyhedrosis virus) into the Hanpvid genome, rHa-Bar regained the polyhedron phenotype and its pest-killing rate greatly improved. Toxic analysis showed that the lethal dosages ($LD_{50}$) and the lethal time(s) ($LT_{50}$) of rHa-Bar were reduced by 20% and 30%, respectively, compared to wt-HaNPV in the third instar larvae of cotton bollworm. This study shows that in AM1-NB barnase can be effectively produced and used as pest-killing agent for the biological control of cotton pests.

• 대한본초학회지
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• 제38권1호
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• pp.45-53
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• 2023

Objectives : Network pharmacology-based research is one of useful tool to predict the possible efficacy and molecular mechanisms of natural materials with multi compounds-multi targeting effects. In this study, we investigated the functional underlying mechanisms of Astragalus membranaceus Bunge (AM) on its anti-obesity effects using a network pharmacology analysis. Methods : The constituents of AM were collected from public databases and its target genes were gathered from PubChem database. The target genes of AM were compared with the gene set of obesity to find the correlation. Then, the network was constructed by Cytoscape 3.9.1. and functional enrichment analysis was conducted to predict the most relevant pathway of AM. Results : The result showed that AM network contained the 707 nodes and 6867 edges, and 525 intersecting genes were exhibited between AM and obesity gene set, indicating that high correlation with the effects of AM on obesity. Based on GO biological process and KEGG Pathway, 'Response to lipid', 'Cellular response to lipid', 'Lipid metabolic process', 'Regulation of chemokine production', 'Regulation of lipase activity', 'Chemokine signaling pathway', 'Regulation of lipolysis in adipocytes' and 'PPAR signaling pathway' were predicted as functional pathways of AM on obesity. Conclusions : AM showed high relevance with the lipid metabolism related with the chemokine production and lipolysis pathways. This study could be a basis that AM has promising effects on obesity via network pharmacology analysis.

• 원예과학기술지
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• 제28권5호
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• pp.818-827
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• 2010

스프레이 국화 'Argus'의 꽃잎으로부터 $DgLDOX$의 전장 cDNA와 genomic DNA를 분리하였고, 감마선 변이원으로부터 유래된 3가지 화색변이체 사이의 다양한 유전자 특성들을 밝혀냈다. cDNA 영역은 1068bp이고 356 amino acid로 변환되었다. Genomic DNA의 크기는 'Argus'에서 1346bp이었고, 3가지 화색 변이체에서는 1363부터 1374의 크기를 나타내었다. $DgLDOX$ 유전자는 두 개의 엑손 사이에 하나의 인트론을 갖고 있는 구조이고, 그 크기는 'Argus'에서 112bp 이지만 3가지 화색 변이체에서는 128 혹은 137bp였다. 이것은 감마선 조사에 의해 인트론 부분에 유전자가 삽입됐다는 것을 나타낸다. DNA 분석 결과 국화의 게놈 내에서는 하나의 $LDOX$ 유전자를 갖는 것이 확인되었다. $DgLDOX$ 유전자의 발현 정도를 분석한 결과, 연분홍의 'Argus'와 두 개의 보라색 변이체(AM1 and AM3) 에서 높게 발현되었으나 흰색 변이체(AM2)에서는 매우 약하게 발현되었다. 이러한 결과들은 $DgLDOX$ 유전자의 인트론에 삽입된 유전자 조각 혹은 엑손 부위의 일부 아미노산의 변화에 의해서 변이체의 화색이 변할 수 있다는 것을 보여주고 있다.

• BMB Reports
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• 제38권3호
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• pp.354-359
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• 2005

Open reading frame 29 (ha29) is a gene specific for Helicoverpa armigera single-nucleocapsid nucleopolyhedrovirus (HearSNPV). Sequence analyses showed that the transcription factor Tfb2 motif, bromodomain and Half-A-TPR (HAT) repeat were present at aa 66-82, 4-76, 55-90 of the Ha29 protein respectively. The product of Ha29 was detected in HearSNPV-infected HzAM1 cells at 3 h post-infection. Western blot analysis using a polyclonal antibody produced by immunizing a rabbit with purified GST-Ha29 fusion protein indicates that Ha29 is an early gene. The size of Ha29 product in infected HzAM1 cells was about 25 kDa, which was larger than the presumed size of 20.4 kDa. Tunicamycin treatment of HearSNPV-infected HzAM1 cells suggested that the Ha29 protein is N-glycosylated. Fluorescent confocal laser scanning microscope examination, and Western blot analysis of purified budded virus (BVs), occlusion-derived virus (ODVs), cell nuclear and cytoplasmic fraction, showed that the Ha29 protein was localized in the nucleus. Our results suggested that ha29 of HearSNPV encodes a non-structurally functional protein that may be associated with virus gene transcription in Helicoverpa hosts.

• 농업과학연구
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• 제22권2호
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• pp.163-169
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• 1995

본 연구는 홀스타인종 유우의 혈청단백질 및 효소에 대한 유전적 구조를 분석하기 위하여, 혈청단백질인 post-transferrin-2(pTf-2), transferrin(Tf), post-albumin(pAlb) 및 albumin(Alb)과 혈청효소인 ceruloplasmin(Cp)와 amylase-I(Am-I)을 polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE)와 starch g디 electrophoresis(STAGE) 방법으로 유전적 변이체를 분석하였다. 혈청단백질인 pTf-2 좌위는 pTf-2 F와 S 유전자에 의해 지배되는 pTf-2 FF, FS 및 SS 유전자형이 확인되었으며, 이들의 분포는 각각 76.34%, 14.50% 및 9.10%이었고, 유전자빈도는 pTf-2 F와 S가 각각 0.836 및 0.164이었다. 한편 Tf 좌위는 Tf A, D1, D2 및 E 유전자가 검출되었으며, 유전자형은 Tf AA, AD1, AD2, AE, D1D1, D1D2, D2D2 및 D2E형이 확인되었고, 이들의 분포는 각각 0.11, 32.06, 19.08, 1.53, 10.69, 18.32, 9.92 및 2.29%이었으며, 유전자빈도는 Tf A, D1, D2 및 E에서 각각 0.324, 0.359, 0.298 및 0.019이었다. 또한 pAlb 좌위는 pAlb F와 S 유전자가 검출되었고, 유전자형은 pAlb FF, FS 및 SS형이 확인되었으며, 이들의 분포는 각각 32.06, 29.77 및 38.17%이었고, 유전자빈도는 pAlb F와 S가 각각 0.469 및 0.531이었다. Alb 유전자 빈도에 있어서는 Alb A와 B가 각각 0.996 및 0.004이었다. 그리고 혈청효소인 Cp 좌위는 Cp F와 S 유전자가 검출되었으며, 유전자형은 Cp FF, FS 및 SS 형이 확인되었고, 이들의 분포는 각각 46.57, 27.48 및 25.95%이었으며, 유전자빈도는 Cp F와 S가 각각 0.603 및 0.394이었다. Am-I 좌위는 Am-I B와 C 유전자가 검출되었으며, 유전자형은 Am-I BB, BC 및 CC 형이 확인되었고, 이들의 빈도비율은 각각 39.69, 21.73 및 38.93% 이었으며, 유전자 빈도는 Am-I B와 C가 각각 0.503 및 0.497이었다.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제6권3호
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• pp.173-178
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• 2001

Food yeast, Saccharomyces cerevisiae, is a safe organism with a long history of use for the production of biomass rich in high quality proteins and vitamins. AmA1, a seed storage albumin from Amaranthus hypochondriacus, has a well-balanced amino acid composition and high levels of essential amino acids and offers the possibility of further improving food animal feed additives. In order to find an effective means of expressing AmA1 in yeast, the gene was cloned into an episomal shuttle vector. Four different promoters were tested: the glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase promoter, galactose dehydrogenase 10 promoter, alcohol dehydrogenase II promoter, and a hybrid ADH2-GPD promoter. The recombinant AmA1 genes were then introduced into the yeast Saccharomyces cerevisiae 2805. Northern and Western blot analyses of the yeast under appropriate conditions revealed that AmA1 was expressed by all four promoters at varying levels. An enzyme-linked immunosorbent assay demonstrated that the amount of AmA1 protein in the recombinant yeast was 1.3-4.3% of the total soluble proteins. The highest expression level was obtained from the hybrid ADH2-GPD promoter.

• 한국가금학회지
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• 제38권2호
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• pp.145-154
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• 2011

By a series of positional cloning, we successfully narrowed down the AM candidate region to approximately 1.2 Mbp on GGA2q including 7 functional genes. Subsequently, we identified WWP1 gene as the most likely AM candidate by sequence comparison. The amino acid sequence around the candidate mutation was highly conserved among tetrapods, suggesting that WWP1 is the causative gene of chicken muscular dystrophy. Transfection of mutated WWP1 gene into $C_2C_{12}$ myoblasts disrupted muscle differentiation process. The abnormal muscle differentiation is a characteristic of chicken muscular dystrophy, so we could demonstrate a part of phenotype of the disease. Furthermore, western blotting revealed that accumulation of caveolin-3 protein is limited in damaged muscle of muscular dystrophic chicken, suggesting caveolin-3 may be associated with the pathological change of the disease. We could conclude that WWP1 gene is the responsible one for chicken muscular dystrophy from these results, but the mechanism leading the onset should be clarified in the future. The information will contribute to the study of chicken muscular dystrophy and the corresponding human dystrophies.

• Pediatric Infection and Vaccine
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• 제7권1호
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• pp.83-93
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• 2000

목 적 : Urabe AM-9 볼거리 백신주는 무균성 뇌막염의 발생 빈도가 높은 것으로 알려져 있다. 백신 접종 후 무균성 뇌막염을 일으키는 경우 Urabe AM-9 백신주의 hemagglutinin-neuraminidase(HN) 유전자의 염기서열 1081번의 G가 A로 치환되어 335번째 아미노산이 glutamic acid에서 lysine으로 바뀌게 됨에 따라 야생형의 mumps 바이러스와 동일한 작용을 나타내는 것으로 알려져 있다. 이에 국내에서 사용중인 Urabe AM-9 백신주의 안전성 여부를 조사하기 위해 일부 백신주와 야생 분리주의 HN 유전자의 염기서열 분석을 실시하였다. 방 법 : 국내에서 사용되고있는 Urabe AM-9주 백신 2종류와 1998~1999년에 볼거리 환자로부터 분리된 야생 분리주를 이용하여 RT-PCR 방법에 의해 HN 유전자를 증폭시킨 후 염기 및 아미노산 서열 분석을 실시하였다. 결 과 : 백신주와 야생 분리주 모두 HN 343, 1476, 1570번 위치에서의 염기 변이는 없었으나 1081번 위치 염기는 모두 야생주와 같은 Lysine/AAA form으로 나타났으며 변이주인 Glutamic acid/GAA와의 혼합 양상은 관찰되지 않았다. HN 1470번 위치의 염기는 백신주 중 계대 배양시 C에서 A로 치환되었으며, HN 1727번 위치 염기는 모두 A에서 G로 치환된 것으로 나타났다. 결 론 : 국내에서 사용중인 2종류의 Urabe AM-9 백신주와 야생 분리주 모두 1081번 위치의 염기가 야생주와 같은 무균성 뇌막염을 일으킬 생물학적 가능성이 있는 것으로 나타났으며, 국내에서도 상기 백신주를 사용한 후 무균성 뇌막염이 발생하고 있을 개연성이 매우 크다고 사료되며 직접적인 연관성에 대한 보완 연구를 위하여 정확하고 믿을만한 자료에 의한 실제 부작용 실태를 파악하여야 한다.

• 농업과학연구
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• 제22권2호
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• pp.170-179
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• 1995

본 연구는 축협중앙회 한우개량사업소에서 사육하고 있는 한우 238두의 혈청내에 존재하는 혈액 단백질 및 효소의 유전적 다형을 조사하기 위하여, 혈청단백질인 post-transferrin-2(pTf-2), transferrin(Tf), post-albumin(pAlb) 및 albumin(Alb)과 혈청 효소인 ceruloplasmin(Cp) 및 amylase-I(Am-I), 그리고 혈구단백질인 hemoglobin(Hb)을 PAGE(polyacrylamide gel electrophoresis)와 STAGE(starch gel electrophoresis) 방법으로 유전적 다형을 분석하여 이들의 유전자형 및 유전자빈도를 추정하였던바 그 결과는 다음과 같다. 1. 혈청단백질인 pTf-2 좌위는 pTf-2 F와 S의 공우성 대립유전자가 검출되었고, 유전자형은 pTf-2 FF, FS 및 SS 형이 확인되었으며, 이들의 분포는 각각 46.22, 46.64 및 7.14%이었고, 유전자 빈도는 pTf-2 F와 S에서 각각 0.695 및 0.305이었다. 2. Tf 좌위는 Tf A, D1, D2 및 E의 대립유전자가 검출되었으며, 유전자형에 있어서는 Tf AA, ADl, AD2, AE, D1D1, D1D2, D2D2 DIE D2E 및 EE형이 확인되었고, 이들의 분포는 각각 0.84, 13.87, 13.03, 10.92, 22.27, 12.61, 2.94, 15.l3, 6.72 및 1.68%이었으며, 유전자빈도에 있어서는 Tf A, D1, D2 및 E의 빈도가 각각 0.197, 0.430, 0.191 및 0.181이었다. 3. pAlb 좌위는 pAlb F와 S 유전자가 검출되었으며, 유전자형의 분포에 있어서는 pAlb FFFS 및 SS 형이 각각 42.86, 33.19 및 23.95%이었고, 유전자빈도에 있어서는 pAlb F와 S에서 각각 0.595 및 0.405이었으며, Alb에서는 Alb A 유전자 빈도가 1.000이었다. 4. Cp 좌위는 Cp F와 S 유전자가 확인되었으며, 유전자형의 분포는 Cp FF, FS 및 SS 형에서 각각 23.11, 34.87 및 42.02% 이었고, Cp F와 S 유전자빈도는 각각 0.405 및 0.595이었다. 5. Am-I 좌위는 Am-I B와 C 대립유전자가 검출되었으며, 유전자형의 분포는 Am-I BB, BC 및 CC형에서 각각 51.26, 16.81 및 31.93%이었고, 유전자빈도는 Am-I B와 C가 각각 0.597 및 0.403이었다. 6. Hb 좌위는 Hb A와 B 대립유전자가 검출되었으며, 유전자형의 분포는 Hb AA, AB 및 BB형에서 각각 83.19, 16.39 및 0.42%이었고, Hb A와 B의 유전자빈도는 각각 0.914 및 0.086%이었다.