Genetically modified organism (GMO) using recombinant DNA technique has been exponentially increased, however there are still arguments for the safety of GM foods. The objective of this research was to compare the allergens of GM soybean(Roundup Ready$^{TM}$) with conventional soybeans. Each soybean extracts were prepared as crude extracts, heated extracts, and as heated and simulated gastric quid (SGF)-digested samples to characterize the stability of allergens to physicochemical treatment. Positive sera from 20 soybean-sensitive patients and control sera from 5 normal subjects were used to identify the endogenous allergens in soybeans. Specific-IgE binding activities to each soybean preparations were evaluated by ELISA and immunoblot technique. In ELISA result, IgE binding activities of positive sera to soy crude extracts generally showed two fold higher mean value than those of control sera, how-ever there was no significant difference between GM soybean and natural soybean varieties. Extracted proteins form each of the soybean preparations were separated with SDS-PAGE. The band pattern of GM soybean was very similar to those of natural soybean varieties. Immunoblots for the different soybeans revealed no differences in IgE-binding protein patterns, moreover, disclosed five prominent IgE-binding bands (75, 70, 50, 44 and 34 kDa) in crude extracts, four (75, 70, 44 and 34 kDa) in heated preparations, one (50 kDa) in heated and SGF-digested preparations. These IgE binding bands were consistent with previously reported results on the soybean. These results indicate that GM soybean (Roundup Ready$^{TM}$) is no different from natural soybean in terms of its allergen.gen.
연구배경 : $\beta_2$ 교감신경 수용체의 다형성이 기관지 천식의 표현형에 영향을 미친다고 알려져 있다. 이에 저자들은 먼저 기관지 천식 환자와 정상인에서의 $\beta_2$ 교감신경 수용체의 다형성의 빈도에 차이가 있는가를 알아보고, 또한 기관지 천식 환자에서 아토피의 유무 및 혈청 총 IgE의 증가 여부와 $\beta_2$ 교감신경 수용체의 다형성이 관계가 있는지 알아보고자 본 연구를 시행하였다. 방 법 : 기관지 천식 환자 109명과 정상인 42명에 대하여 혈청 총 IgE를 측정하고, 항원 특이 IgE 검사 및 피부 단자 검사를 실시하였고, mutated allele specific amplification 법으로 $\beta_2$ 교감신경 수용체와 다형성을 검색하였다. 결 과 : $\beta_2$ 교감신경 수용체의 다형성을 조사한 결과 16번 아미노산 위치에서는 Arg 야생형 및 Arg/Gly 이형접합체 변이형, Gly 동형 접합체 변이형이, 그리고 27번은 Gln 야생형, Gln/Glu 이형 접합체 변이형, Glu 동형 접합체 변이형이 관찰되었다. 34번 아미노산의 경우는 Val 야생형과 Val/Met 이형 접합체 변이형이, 164번은 Thr 야생형만 있었다. 1) 정상인과 기관지 천식 환자에서 $\beta_2$ 교감신경 수용체의 16, 27, 34번 아미노산 위치에 있어서 다형성의 빈도는 통계학적으로 차이가 없었다(p>0.05)(Table 3). 2) 기관지 천식환자에서 $\beta_2$ 교감신경 수용체 다형성의 빈도와 아토피의 존재 유무는 16, 27, 34 번 아미노산에서 모두 통계학적으로 관계가 없었다(p>0.05) (Table 4). 3) 기관지 천식 환자 중 혈청 총 IgE가 증가된 군과 정상 군에서 $\beta_2$ 교감신경 신경 수용체 다형성과 혈청 총 IgE의 증가 여부의 비교는 16, 27, 34번 아미노산 모두 통계학적인 관련이 없었다(p>0.05) (Table 5). 결 론 : 결론적으로 기관지 천식 환자와 정상인 사이의 $\beta_2$ 교감신경 수용체의 다형성은 16, 27, 34번 아미노산 위치에서 차이가 없었고, 기관지 천식환자에서 아토피의 유무 및 혈청 총 IgE의 증가 여부와 $\beta_2$ 교감신경 수용체의 다형성의 빈도는 통계적으로 유의한 관계가 없었다.
Objective : Although management of asthma has become increasingly effective, its cure remains elusive, necessitating a new modality to prevent or eliminate causes triggering clinical progress. Based in the clinical experiences, a novel decoration Cheongsangbiyeum (CSB), has been developed to treat asthma, which consists of Polyporus, Semen Myristicae, Pericarpium citri Reticulatae, Rhizoma Cimicifugae, Cortex Albizziae, Fructus Rubi, Rhizoma Zedoariae, and Rhizoma Rhei. In the current study, its anti-asthmatic efficacy was evaluated using a mouse model of asthma. Methods : Experimental allergic asthma was induced by repeated intraperitioneal sensitization and intranasal challenge of ovalbumin (OVA). Water extract of CSB (1 mg/mouse/day) was administrated orally whereas control mice on given with identical volume of phosphate-buffered saline (PBS) for 5 days during the course of antigen challenge. When airway hyperreactivity(AHR) measured by ${\bata}-methacoline-induced$ airflow obstruction was compared, AHR of CSB-treated mice was significantly lower than those of control mice, indicating that CM extract can attenuate an asthmatic symptom. Airway recruitment of leukocytes and eosinophils was also markedly reduced by CSB treatment suggesting that oral treatment of CSB can alleviate the airway inflammation. For a better understanding of possible mechanisms underlying anti-asthmatic effet of CSB, cytokine (IL-4, IL-5, IL-13 and $IFN{\gamma}$ levels in bronchoalveola lavage fluid (BALF) and lung tissues were determined. Results : The results showed that cytokine levels were significantly lowered by CSB treatment. Additionally, number of draining lymph node cells was significantly lower than those of control mice. These data indicate that CSB suppress in vivo allergen-specific response. However, notably, levels of type 2 cytokines such as IL-5 and IL-13 were more profoundly influenced. Moreover, in vitro OVA-specific proliferative response and type 2 cytokine (IL-4, IL-5 and IL-13) production lymph node cells was markedly decreased in CSB-treated mice, whereas their $IFN{\gamma}$ production was not significantly altered Thrse data clearly showed a preferential inhibition of type 2 T cell (Th2) response by CSB treatment. This finding was also supported by serum antibody data showing that levels of OVA-specific type 2 antibodies, IgE and IgG1, in CSB-treated mice were significantly lower than in control mice, while type 1 antibody, IgG2a level m rather higher than controls, although the difference was in significant. Conclusions : In conclusion, oral administration of CSB attenuates asthmatic manifestations including AHR ad airway recruitment of eosinophils in a mouse model which possibly results from selective inhibition of Th2 cell response to allergen. Our data suggest a potential clinical application of CSB for control of allergic asthma.
Background: Allergic inflammation was induced by activated Th2 lymphocytes, leading to IgE production and eosinophil activation. A Th2 disproportion was shown in atopic children soon after birth. During specific allergen stimulation, an increase of Th2 cells was observed in most cases. In this study, we prepared new screening "whole blood" system for searching the anti-atopic materials. Cytokine production and IgE secretion from whole blood system were assessed and we confirmed the results by using animal system. Methods: Pathological features in NC/Nga mice are similar to those observed in human atopic dermatitis. Whole blood from NC/Nga mouse was stimulated by using TNCB (Th2 activator) or candidate materials of anti-atopic dermatitis, and the production of cytokines (IL-4, IL-12, and IFN-${\gamma}$) were measured by ELISA. In order to confirm the results of whole blood system, in vivo test was done by using NC/Nga mice. Results: In whole blood system, LPS and extracts of green tea, hardy orange and onion induced the production of IL-12 and IFN-${\gamma}$ while they reduced the production of IL-4. Also, LPS and extracts of onion reduced IgE production. Though atopic dermatitis was observed from a mouse stimulated with TNCB, it was not when a mouse was co-stimulated in LPS or extracts of onion. The results are same as those observed in whole blood system. Conclusion: Whole blood system was simple and speedy methods for searching a materials compared with the conventional high-cost animal system. And the results using whole blood system was proved to be reliable in our experiments for screening anti-atopic material. We expect that the system can be applied to other experiments for searching similar materials.
Understanding the developmental mechanisms of humoral immunity against intranasal antigens is essential for the development of therapeutic approaches against air-borne pathogens as well as allergen-induced pulmonary inflammation. Follicular helper T (Tfh) cells expressing CXCR5 are required for humoral immunity by providing IL-21 and ICOS costimulation to activated B cells. However, the regulation of Tfh cell responses against intranasal antigens remains unclear. Here, we found that the generation of Tfh cells and germinal center B cells in the bronchial lymph node against intranasal proteinase antigens was independent of $TGF-{\beta}$. In contrast, administration of STAT3 inhibitor STA-21 suppressed the generation of Tfh cells and germinal center B cells. Compared with wild-type OT-II T cells, STAT3-deficient OT-II T cells transferred into recipients lacking T cells not only showed significantly reduced frequency Tfh cells, but also induced diminished IgG as well as IgE specific for the intranasal antigens. Cotransfer study of wild-type OT-II and STAT3-deficient OT-II T cells revealed that the latter failed to differentiate into Tfh cells. These findings demonstrate that T cell-intrinsic STAT3 is required for the generation of Tfh cells to intranasal antigens and that targeting STAT3 might be an effective approach to ameliorate antibody-mediated pathology in the lung.
In Korea, different kinds of genetically modified (GM) crops are under development, including GM-rice expressing insecticidal crystal (Cry) proteins of Bacillus thuringiensis (Bt) modified to change a single amino acid. In this study, amino acid (aa) sequences of modified Cry proteins were compared to that of known allergens, and Cry proteins expressed in GM-rice were identified by using Cry protein specific polyclonal antibody. The antigen-antibody reactions were compared between GM and commercial rice to assess the allergic risk of Cry proteins. This analysis showed no known allergen to have more than 35% aa sequence homology with modified Cry proteins in Bt rice over an 80 aa window or to have more than 8 consecutive identical aa. Sera from allergic patients showed some IgE reactivity via immunoblotting and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), although no differences were seen between GM and commercial rice. Based on these results we conclude that GM rice with modified Cry proteins has no differences in its protein composition or allergenicity relative to commercial rice.
This study was undertaken to develop a subacute murine model for predicting occurrence of systemic anaphylaxis and to evaluate efficacy of various immunological parameters as the monitoring indices for the occurrence of anaphyalxis. The murine anaphyalxis model was developed through intraperitoneally sensitizing 100 $\mu\textrm{g}$ ovalbumin (OVA) in the presence of 1 mg alum and 300 ng cholera toxin twice a week interval followed by challenging 500 $\mu\textrm{g}$. OVA intravenously. Typical anaphylaxis symptoms were demonstrated at the both BALB/c mice, a strain prone to type-2 response, and C57BL/6 mice. a strain prone to type-1 response. Level of plasma histamine was approximately 50-fold or 30-fold higher in the mice sensitized with OVA than the mice sensitized with alum plus cholera toxin or the saline-treated mice after OVA challenge, respectively. Sensitization and challenge with OVA significantly enhanced plasma leukotriene $B_4$ level but not IgE levels in comparison with the control mice, which indicated the role of leukotriene $B_4$ for progression of anaphyalxis. Furthermore, among mice suffered from anaphylaxis, levels of OVA-specific IgGl were significantly higher in the BALB/c mice than in the C57BL/6 mice, which implied the genetic susceptibility for the induction of systemic anaphylaxis. Conclusively, simultaneous evaluation of histamine, leukotriene $B_4$, and allergen-specific IgG isotype may serve as more efficient monitoring tool for vaccine-related anaphyalxis.
Asthma is an inflammatory disease of airways that is induced by Th2 cytokines and inhibited by Th1 cytokines. In this study we wanted to investigate the effect of SCT and BJT on eosinophilla and cytokines of BALF in a mouse model established airway inflammmation. Asthma was induced to male c57/bl6 mice. Allergen-specific antibody responses, cytokine$(IL-4,\;IL-5,\;INF-{\gamma})$, and eosinophil inflammation of the airways were investigated on the BALF and splenocyte. SCT and BJT effectively induced $INF-{\gamma}$ and inhibited IL-4, IL-5 as well as eosinophilic inflammation when SCT and BJT were administered. Total Ig E level in the BALF decreased. SCT was more effectiveness than BJT. It is considered that SCT and BJT have faborable effect on the asthma because the asthma specific series of abnormalities in respiratory system were decreased.
목 적: 최근 여러 연구결과 천식을 포함한 알레르기질환의 발병에 소아 성장시기에 알레르겐이나 내독소(LPS)등과 같은 물질에 노출이 중요한 역할을 하는 것으로 제시되었다. 이에 연구자들은 출생 초기에 기도 점막을 통한 알레르겐과 내독소에의 노출이 성장한 후에 알레르기 기도염증과 과반응성의 발생에 미치는 효과를 생쥐 모델을 통하여 규명하고자 본 연구를 시행하였다. 방 법: 실험동물은 무균 상태의 생후 1주이내의 암컷 BALB/c 생쥐를 사용하였다. 실험동물들에게는 각각 신생생쥐시기에 생리식염수, 1% ovalbumin (OVA), $1.0{\mu}g$ LPS, $1.0{\mu}g$ LPS in 1% OVA를 각 비공을 통하여 투여하였다. 실험동물은 연구 시작 제 35일부터 10일간 5% OVA로 감작시켰으며 최종 기도 감작 10일 후부터 3일간 1% OVA로 기도 항원유발을 시행하였다. 최종 기도유발 48시간 후 체적검사(plethysmography)를 이용하여 비특이적 기도과반응성 검사(Methcholine challenge test)를 시행하였으며 검사 후 실험동물을 희생시켜 검체를 취하여 BAL액내 세포분획, 사이토카인, 혈청 면역글로불린을 측정하였다. 결 과: 1) 메타콜린에 의한 기도과반응성은 생후 초기에 OVA, LPS, OVA/LPS를 투여한 군에서 생리식염수를 투여한 군에 비해 통계적으로 유의하게 억제되었다. 2) OVA, LPS, OVA/LPS를 투여한 군에서 BAL 액내의 호산구수와 IL-4, IL-5가 유의하게 낮았다. 3) 혈청내 OVA 특이 IgE는 OVA, LPS, OVA/LPS 투여군에서 유의하게 감소되었다. 결 론: 본 연구 결과 신생생쥐 시기의 점막을 통한 항원, 내독소의 노출이 성숙한 후 항원에 의한 기도염증 및 과반응성의 발생을 억제하였으며 향후 이러한 효과의 작용기전에 대한 연구가 필요할 것으로 생각한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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