Kim, Hye-Ran;Park, Gyu-Nam;Jung, Bo-Kyoung;Yoon, Weon-Jong;Chang, Kyung-Soo
한국응용과학기술학회지
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제35권2호
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pp.492-501
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2018
Obesity is a worldwide disease and one of the major risk factors. Virus among many factors can lead to obesity. Adenovirus 36 (Ad-36) is the adipogenic virus linked with human obesity. Nevertheless, there is no drug to treat both Ad-36 infection and obesity associated with virus. For the precedent study on anti-cholesterol test, Distylium racemosum (D. racemosum), Quercus salicina (Q. salicina) and Raphiolepis indica (R. indica) were selected. This study was carried out to evaluate the anti-cholesterol effects, anti-lipid effects and inhibition of Ad-36 replication from three extracts. D. racemosum ($50{\mu}g/mL$) inhibited lipid accumulation on 3T3-L1 adipocyte. D. racemosum inhibited adipocyte differentiation through suppression of regulator peroxisome proliferator-activated receptor-${\gamma}$ ($PPAR{\gamma}$) genes and adipocyte-specific genes such as adipocyte protein 2 (aP2). D. racemosum inhibited replication of Ad-36 at $50{\mu}g/mL$ of concentration. Therefore, the extract of D. racemosum could be a candidate for development of anti-Ad-36 and anti-obesity drugs.
본 연구는 지방감소를 위한 소재개발로 감국 유산균 발효물이 갖는 지방구세포 분화 억제효과를 관찰하였다. 감국 추출물의 세포독성을 극복하는 유산균의 발효물을 제작하였다. 3T3-L1 세포주에서 감국 추출물 및 발효물이 갖는 세포독성은 모두 없었다(1day culture). 감국 추출물 처리 대조군과 비교하여 3T3-L1 세포주에 처리시 증식 유도된 발효물을 선별하였다. 감국 추출물 및 발효물의 분화억제 및 세포생존률 FACS분석은 분화 유도된 세포가 모든 실험군에서 줄어들었다. 3T3-L1 세포주에서 감국 추출물과 발효물 처리가 protein kinase B (Akt) pathway활성이 증가하였고, 단백질 발현은 지방구세포로 분화되면서 Gli2의 수준은 감소하였다. Hedgehog를 조절하는 유산균은 KCTC 3115인 것을 알 수 있었다. 분화와 관련된 KCTC 3115 및 KCTC 3109 발효군에서 단백질 수준에서 C/EBPα 및 FAS를 감소, pACC는 증가시키는 것을 확인하였다. 감국 추출물과 4개의 감국 유산균 발효물 중 Lactococcus lactis subsp. lactis KCTC 3115 발효물이 지방구세포 분화 신호를 더 효과적으로 조절하고, hedgehog을 같이 조절하여 지방전구세포의 분화를 억제하는 것을 알 수 있었다. Hedgehog 신호를 조절하면서 분화를 억제하는 물질에 대한 연구가 더 필요할 것으로 판단된다. 따라서 감국 발효물의 생리활성 물질 중 향후 매커니즘 분석을 위한 활성물질의 자료가 더 필요할 것으로 여겨지며, 감국 추출물 및 감국 발효물의 hedgehog 신호조절이 새로운 비만치료제로 개발될 수 있음을 위한 가능성을 제시하고자 한다.
The effect of diets(high fat, high fat high energy, pectin, cellulose) on adipocyte of epididymal fat pads were investigated in 70 male rats for 8 weeks. The rats were assigned to a control(C), high fat(HF) and high fat high energy(HFHE) group for 4 wks. During the next 4 wks, reassigned to one of three treatments (high fat, pectin supplemented, cellulose supplemented) in the HF group and one of three treatment (high fat high energy, pectin, cellulose) in the HFHE group. Therefore, the total experimental groups were 7 (C, HF, HF-P, HF-C, HFHE, HFHE-P, HFHE-C). Parameters evaluated and compared for each diet were body weight, total energy intake, feed efficiency ratio and weight changes in epididymal fat pads. The results are summarized as follows ; 1) There was no significant difference in body weight gain among the groups. 2) Total energy intake was higher in the C group than other groups. 3) Feed efficiency ratio (F.E.R) of the HF and HFHE groups were greater than C group(2, 4 weeks). However, there were no significant differences between the HF and HFHE groups. 4) Epididymal fat pads(EFP 100g/B.W) of the FH and HFHE groups were higher than C group (2, 4 weeks). However, there were no significant differences between the HF and HFHE groups. There was no significant difference in weight gain of epididymal fat pads among the groups(8 weeks). 5) Cell number and cell size of epididymal fat pads of the HF and HFHE groups were higher than the C group. The pectin and the cellulose supplementation groups decreased cell number and cell size of epididymal fat pads. Especially, the pectin supplementation group decreased than the cellulose supplementation in HFHE group. Therefore, we can concluded that the HF and the HFHE diet has no effect on the epididymal fat pads.
Objectives : This study was designed to investigate the effect of a herbal preparation HJ01 consisting of Salicornia herbacea, Citri Reticulatae Pericarpium, Crataegi Fructus and Glycyrrhizae Radix on adipocyte differentiation in OP9 cells and on poloxamer 407(P-407)-induced hyperlipidemia in mice. Methods : 1. MTT assay was used to evaluate the potential cytotoxicity of Salicornia herbacea, Citri Reticulatae Pericarpium, Crataegi Fructus, Glycyrrhizae Radix and HJ01, respectively. 2. Bone-marrow derived OP9 cells were treated with HJ01, and the alterations in fat storage in the cells were determined by the Oil red O assay. 3. The protein level of CAAAT/enhancer binding protein alpha($C/EBP{\alpha}$), as a adipocyte differentiation marker, was examined using western blot analysis in differentiated OP6 cells. 4. Adult male C57BL6 mice received intraperitoneal injections of P407 to induce hyperlipidemia, simultaneously, were treated with HJ01 for 4 weeks. Then the cholesterol (TC), triglyceride (TG) and high-density lipoprotein-cholesterol (HDL-c) levels in sera and liver tissues were measured. Results : 1. The MTT assay exhibited that Salicornia herbacea, Citri Reticulatae Pericarpium, Crataegi Fructus, Glycyrrhizae Radix and HJ01 showed no significant cytotoxicity in tested dosages. 2. Ten days' treatment with HJ01 markedly inhibited the increases in fat storage in differentiated OP6 cells. 3. Four weeks' treatment with HJ01 down-regulated the protein level of CAAAT/enhancer binding protein alpha($C/EBP{\alpha}$) but up-regulated the levels of adiponectin in differentiated OP9 cells. 5. HJ01 inhibited the accumulation of TC and TG in liver tissues and increased serum levels of TC in hyperlipidemic mice. Conclusions : These results suggest that HJ01 can in vitro inhibit adipocyte differentiation and fat storage in OP6 cells, in vivo improve the hyperlipidemia induced by P-407 in mice, which may be mediated by promoting glucose uptake and improving a lipid metabolite profile.
본 연구에서는 3T3-L1 지방전구세포가 지방세포로 분화되는 과정에서 진피 에탄올 추출물(ethanol extracts of citrus peel, EECP)이 유발하는 항비만 효능에 대해서 조사하였다. 3T3-L1 세포의 생존율 및 증식에 영향을 미치지 않는 농도의 EECP를 처리하였을 경우 지방세포에서 특징적으로 나타나는 lipid droplet의 형성과 triglyceride의 생성도 억제되는 것으로 나타났다. EECP가 유발하는 지방세포로의 분화억제에는 PPARγ, C/EBPα, C/EBPβ 및 SREBP-1c 등과 같은 adipogenic transcription factors의 발현억제가 관여하는 것으로 나타났으며, 그 결과로 aP2 및 Leptin과 같은 adipocyte expressed genes의 발현도 억제되는 것으로 조사되었다. 또한 EECP는 AMPK 및 ACC의 인산화를 유발하였으며, AMPK 억제제인 Compound C를 이용하여 AMPK의 활성을 억제하였을 경우 EECP에 의한 AMPK의 인산화와 adipogenic transcription factors의 억제현상이 회복되었다. 이상의 결과에서 EECP는 AMPK signaling pathway를 통하여 항비만 효능을 가진다는 것을 알 수 있었으며, 향후 비만 예방 및 억제와 관련된 기능성 소재로서의 진피의 활용 가능성을 제시한 것으로서 그 가치가 매우 높을 것으로 생각된다.
Kim, Juree;Jang, Taewon;Kim, Ji Hyun;Shin, Hanna;Park, Jaeho;Lee, Sanghyun
Journal of Applied Biological Chemistry
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제64권3호
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pp.269-275
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2021
The in vitro anti-obesity activity of 12 species of tree sprouts in differentiated 3T3-L1 cells and the mechanisms underlying their activity were evaluated. (+)-Catechin and quercetin concentrations in the sprouts were analyzed by HPLC/UV at 270 and 254 nm, respectively. Euonymus alatus (EAT) and Fraxinus mandschuria (FMS) extracts at doses of 50 and 100 ㎍/mL inhibited the accumulation of lipid droplets in differentiated 3T3-L1 cells. Moreover, EAT and FMS downregulated the expression of the CCAAT/enhancer-binding protein-α, adipogenesis-related proteins peroxisome proliferator-activated receptor-γ, and adipocyte P-2α in differentiated 3T3-L1 cells. Tree sprouts with an abundant flavonoid content exerted the highest anti-obesity activity. Concentrations of total flavonoids were the highest in FMS (24.281 mg/g DW) sprouts. These findings could be used to develop health-promoting functional foods or supplements derived from tree sprouts.
In this study, the effects of a methanol (MeOH) extract of Carduus crispus L. (Asteraceae) on adipogenesis was investigated in 3T3-L1 cells. To differentiate preadipocytes to adipocytes, confluent 3T3-L1 preadipocytes were treated with a hormone mixture, which included isobutylmethylxanthine, dexamethasone, and insulin (MDI). The methanol extract of C. crispus significantly decreased fat accumulation by inhibiting adipogenic signal transcriptional factors in MDI-induced 3T3-L1 cells in a dose-dependent manner. In MTT assays and on PI-staining, methanol extract of C. crispus inhibited the proliferation of 3T3-L1 cells during mitotic clonal expansion (MCE). The anti-adipogenic effect of the Carduus extract seemed to be associated with the upregulation of extracellular signal-regulated kinase (ERK) and p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathways within the first 2 days after MDI treatment. These results suggest that methanol extract of C. crispus might be beneficial for the treatment of obesity.
Obesity, one of the most common metabolic diseases in industrial countries is characterized by an increase in the number or size of adipocytes. In an effort to create transgenic mouse models for the study of obesity we developed a novel technique in which adipose tissue can be ablated genetically at will, at any specific developmental stage and/or physiological condition, by the treatment of ganciclovir. We made a series of adipocytespecific expression vectors using minimal regulatory regions of brown adipocyte-specific uncoupling protein (UCP-1) gene and adipocyte-specific aP2 gene, and then analyzed their expression characteristics in cultured cell lines. When both constructs pUCP-LacZ and paP2-LacZ were transfected transiently into differentiating 3T3-L1 (pre-while adipocytes) and HIB-1B (pre-brown adipocytes) cell lines in vitro and then monitored by X-gal staining of cells, these regulatory regions were sufficient to show proper differentiation stage-specific expression in adipocvtes. To confirm that adipocytes expressing HSV-TK controlled by these minimal requlatory elements are sufficient to kill themselves with ganciclovir treatment pUCP-TK and paP2-TK expression constructs were transfected stably into HIB-1B and 3T3-L1 cells, respectively, and their ganciclovir sensitivities were tested during in vitro differentiation of cells. As expected more than 80% of cells were dead by the 7th day of treatment with ganciclovir while negative control cells were not affected at all. The data suqqest that the constructed vectors are suitable for obtaining novel obese transqenic models based on a conditional genetic tissue ablation method.
Ciglitazone is a member of the thiazolidinedione family, and specifically binds to peroxisome proliferator-activated receptor-γ (PPARγ), thereby promoting adipocyte differentiation. We hypothesized that ciglitazone as a PPARγ ligand in the absence of an adipocyte differentiation cocktail would increase adiponectin and adipogenic gene expression in bovine satellite cells (BSC). Muscle-derived BSCs were isolated from six, 18-month-old Yanbian Yellow Cattle. The BSC were cultured for 96 h in differentiation medium containing 5 µM ciglitazone (CL), 10 µM ciglitazone (CM), or 20 µM ciglitazone (CH). Control (CON) BSC were cultured only in a differentiation medium (containing 2% horse serum). The presence of myogenin, desmin, and paired box 7 (Pax7) proteins was confirmed in the BSC by immunofluorescence staining. The CL, CM, and CH treatments produced higher concentrations of triacylglycerol and lipid droplet accumulation in myotubes than those of the CON treatment. Ciglitazone treatments significantly increased the relative expression of PPARγ, CCAAT/enhancer-binding protein alpha (C/EBPα), C/EBPβ, fatty acid synthase, stearoyl-CoA desaturase, and perilipin 2. Ciglitazone treatments increased gene expression of Pax3 and Pax7 and decreased expression of myogenic differentiation-1, myogenin, myogenic regulatory factor-5, and myogenin-4 (p < 0.01). Adiponectin concentration caused by ciglitazone treatments was significantly greater than CON (p < 0.01). RNA sequencing showed that 281 differentially expressed genes (DEGs) were found in the treatments of ciglitazone. DEGs gene ontology (GO) analysis showed that the top 10 GO enrichment significantly changed the biological processes such as protein trimerization, negative regulation of cell proliferation, adipocytes differentiation, and cellular response to external stimulus. Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes pathway analysis showed that DEGs were involved in the p53 signaling pathway, PPAR signaling pathway, biosynthesis of amino acids, tumor necrosis factor signaling pathway, non-alcoholic fatty liver disease, PI3K-Akt signaling pathway, and Wnt signaling pathway. These results indicate that ciglitazone acts as PPARγ agonist, effectively increases the adiponectin concentration and adipogenic gene expression, and stimulates the conversion of BSC to adipocyte-like cells in the absence of adipocyte differentiation cocktail.
본 연구는 testosterone이 지방세포생성에 미치는 영향과 그것에 대한 분자생물학적 조절기전을 역전사-중합효소 연쇄반응과 일시적인 형질전환 분석을 통해 조사하였다. 정소절제수술 마우스(CAST)에 비해 testosterone이 처리된 정소절제수술 마우스(CAST+T)는 백색지방조직 무게와 지방세포 특이유전자($PPAR{\gamma}$와 aP2)의 발현이 감소되었다. In vivo 결과와 일치되게, testosterone 처리는 분화된 3T3-L1세포에서의 triglyceride축적과 지방세포 특이유전자($PPAR{\gamma}$와 aP2)의 발현을 억제시켰다. Testosterone에 의해 활성화된 androgen receptor(AR)는 $PPAR{\gamma}$ transfection에 의해 유도된 luciferase reporter gene 활성을 억제하였다. 따라서 본 연구결과는 testosterone이 AR을 통해 지방세포분화에 대한 $PPAR{\gamma}$의 작용을 억제 조절한다는 것을 시사하고 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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