The cAMP-dependent protein kinase(PKA) is an intracellular enzyme with serine-threonine kinase activity that plays a key role in cell growth, differentiation, and apoptosis in eukaryotes. In order to understand the PKA signal transduction pathway regulating cell life cycle and identify its role, we focused on the characterization of up-/down-regulated genes by PKA using the differential display polymerase chain reaction. Seven differentially expressed sequence tags(DEST) have been obtained. Among these DESTs, 2 DESTs were homologous to the sequence of genes from BLAST search result. KC1-5 DEST that was up-regulated in A123.7 cells was highly corresponded to mouse apoptosis-related gene(MA-3) or mouse mRNA for topoisomerase inhibitor suppressed(TIS). MA-3 was induced in various types of apoptosis, specially in NGF-deprived apoptotic PC12 cells. TIS was down-regulated in the RVC lymphoma cells incubated with topoisomerase inhibitor that induces DNA strand breakages. PG1-1 DEST that was highly expressed in PC12 cells was corresponded to transposon Tn10 3'-end. Tnansposon Tn10 was up-regulated in differentiated myeloblastic ML-1 cells by 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate. This study illuminates that MA-3/TIS was down-regulated by PKA activity, and transposon Tn10 was up-regulated by it.
제주긴뿌리동충하초(Cordyceps longissima, CL)와 풍뎅이동충하초(C. scarabaeicola, CS)의 배양액을 이용하여 RAW 264.7 세포 내 세포 독성 및 NO 생성량을 확인하였다. 세포에 CL J106과 CS J94 배양액을 처치한 경우 세포 독성이 나타나지 않았으나 CL J144와 CS J123 배양액은 세포생존율을 4% 이하로 감소시켜 같은 종일지라도 균주에 따라 세포 독성이 있음을 확인하였다. 따라서 NO 생성 억제 실험에는 CL J106과 CS J94를 이용하였으며 두 종 모두 LPS(lipopolysaccharide)가 처리된 RAW 264.7 세포의 NO 생성을 농도 의존적으로 억제하였다. 본 실험결과 동충하초 부산물인 배양액에도 항염증효과에 관여하는 성분이 존재할 것으로 판단되었고 동일한 종일지라도 생리활성측면에서 매우 다른 특성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
목적: 현재 유방암 치료제로서 임상실험 제 2단계에 들어간 idoxifene은 항에스트로겐 의약품으로서 기존의 tamoxifen보다도 많은 장점을 가지고 있는 것으로 연구결과 밝혀졌다. 또한 방사성 동위원소 $[^{123}I]$를 표지한 $[^{123}I]$idoxifene은 SPECT을 이용한 유방암세포를 영상화하여 조기에 진단할 수 있는 진단시약으로서 널리 각광 받고 있다. 따라서 본 연구에서는 idoxifene의 전구체를 합성하고 $[^{123}I]$를 표지하여 세포 내 섭취론 관찰하였다. 대상 및 방법: $[^{123}I]$idoxifene을 위한 전구체는 McCague가 연구 발표한 자료를 바탕으로 (2-chloroethoxy)benzene과 2-phenylbutanoic acid를 출발물질로 하여 합성하였다. 표지는 $[^{123}I]$를 사용하였으며 분리는 Silica Sep-Pak을 사용하였으며 세포 내 섭취실험은 에스트로겐 리셉터를 가진 MCF-7과 대조군으로서 에스트로겐 리셉터가 없는 MDA-MB-468을 이용하였다. 결과 및 결론: Idoxifene의 전구체인 4-stannylated 화합물의 합성수율은 약 30%이었으며, $[^{123}I]$ 표지는 60분 경과에서 $90{\sim}92%$로 최대의 표지수율을 보였으며 방사화학적 순도는 98%이상이었다. 또한 세포 내 섭취실험에서 실험군과 대조군 사이에 섭취비율은 180분에서 1.7:1로 나타나 idoxifence은 항에스트로겐 효과가 아주 높은 것으로 판명되었다. 이를 바탕으로 배양세포와 동물모델을 이용한 추가적인 실험이 필요하며, 유방암 환자에게도 임상이용이 기대된다.
아시아에서 한방약초로 널리 알려진 당귀 추출물의 미백활성을 알아보기 위하여 tyrosinase 저해활성을 측정한 결과 1,000 ${\mu}g/ml$의 농도에서 70% 이상의 활성을 나타내었다. 또한 당귀 추출물에 대한 멜라노마 세포(B16F10)의 세포생존율을 확인한 결과 500 ${\mu}g/ml$의 농도에서 99% 이상의 세포생존율을 확인할 수 있었다. 미백 관련 인자인 MITF, TRP-1, TRP-2 및 tyrosinase의 mRNA 발현량을 측정한 결과 50 ${\mu}g/ml$의 농도에서 각각 85.7%, 123.9%, 68.8%, 208%로 당귀 추출물을 처리하지 않은 군보다 감소하였음을 확인할 수 있었다. 이러한 연구 결과에 따라 당귀 추출물이 melanin 합성과 관련이 있는 유전자 발현의 억제효과가 있음을 확인할 수 있었으며, 미백 화장품 소재로서의 가능성을 확인하였다.
ICR 마우스 위장관 8개 부위(위저부, 유문부, 십이지장, 공장, 회장, 맹장, 결장 및 직장)에서 위장관내분비 세포의 부위별 분포 및 상대적 빈도를 somatostain, serotonin, glucagon, chloecystokinin(CCK)-8, secretin, pancreatic polypeptide(PP) 및 gastrin 등 총 7종류의 항혈청을 이용한 면역조직화학적 방법으로 관찰하였던 결과 somatostain, serotonin, glucagon, CCK-8, secretin, 및 gastrin 면역반응세포의 7종류의 내분비세포가 관찰되었다. 본 실험의 결과 장관부위에서는 주로 타원형 또는 방추형의 개방형 세포(open-typed cell)들이 관찰된 반면 위저부와 유문부에서는 주로 원형의 폐쇄형 세포(close-typed cell)을이 관찰되었다. 이들 면역반응세포들의 부위별 분포는 위장관 각 부위에 따라 매우 다양하게 관찰되었다. Somatostain 면역반응세포들은 대장을 제외한 위장관에서 전 부위에서 관찰되었고, serotonin 면역반응세포들은 전 위장관에 걸쳐 관찰되었으며, ICR 마우스에서 가장 높은 빈도를 나타내었다. Glucagon 면역반응세포들은 위저부와 직장에 국한되어 관찰되었으며, 각각 중등도 및 소수의 빈도를 나타내었다. CCK-8 면역반응세포들은 유문부, 십이지장 및 회장에서 각각 다수, 중등도 및 극소수의 빈도로 관찰되었다. 한편 secretin 면역반응세포들은 각각 소수 및 극소수의 빈도로 십이지장과 회장에 국한되어 출현하였고, gastrin 면역반응세포들은 유문부에 국한되어 다수 관찰되었다. 그러나 PP 면역반응세포들은 전 위장관에 걸쳐 관찰되지 않았다. 결론적으로 ICR 마우스의 위장관내분비세포의 부위별 분포 및 상대적 빈도는 다른 포유동물과 유사하게 관찰되었으나, 일부 특이한 양상을 나타내기도 하였다.
본 연구에서는 등수국 잎 추출물의 미백 및 항산화 활성을 확인하고 유효성분을 분리하여 화학구조를 동정하였다. B16F10 melanoma 세포를 이용한 미백 활성 실험 결과, n-hexane (Hex) 분획물이 세포독성 없는 농도에서 멜라닌 생성 및 세포 내 tyrosinase 효소의 활성을 억제시키고 있음을 확인하였다. 또한 Hex 분획물이 tyrosinase 및 TRP-2 단백질의 발현을 감소시켰다. 반면, ethyl acetate (EtOAc) 분획물은 DPPH 및 ABTS+ 라디칼 소거 활성이 우수하였고, H2O2로 유도된 세포 손상에 대한 세포보호 효과를 나타내었다. Hex 및 EtOAc 분획물의 활성 성분을 규명하기 위해 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 8 개의 화합물을 분리하였다; ethyl linoleate (1), ethyl linolenate (2), 1-linoleoyl glycerol (3), 1-linolenoyl glycerol (4), epi-catechin (5), afzelin (6), quercitrin (7), hyperin (8). 분리된 화합물에 대한 항산화 활성 측정 결과, 화합물 5 - 8의 라디칼 소거 활성이 우수함을 확인하였다. 또한 HPLC 분석을 통해 주성분인 quercitrin (7)의 함량을 측정한 결과, 추출물에서 31.3 mg/g, EtOAc 분획물에서 169.8 mg/g이 함유되어 있는 것으로 확인되었다. 이상의 연구 결과를 바탕으로 등수국 잎은 미백 및 항산화 효과를 갖는 천연 화장품 소재로의 개발이 가능할 것이라 사료된다.
본 연구는 산말 3종류 Desmarestia dudresnayi subsp. Tabacoides (담배잎산말), Desmarestia viridis (쇠꼬리산말), Desmarestia ligulate (참산말) 잎 추출물의 항산화 및 항 멜라닌 활성에 대한 기능적 연구를위해 수행하였다. 3종류의 산말 중 담배잎산말 추출물이 2.5 mg / mL의 농도에서 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거활성이 각각 68.0 % ± 1.9 % 및 84.6 % ± 1.7 %로 강한 항산화력을 나타냈다. 질소 (NO) 라디칼 소거 활성은 91.6 % ± 1.1 %의 높은 항산화능을 보였다 산말 추출물을 이용한 B16F10세포의 세포독성은 100 ㎍/mL 농도에서 3종의 산말 추출물이 모두 85% 이상의 세포 생존률을 보였고, 100 ㎍ / mL농도에서 담배잎산말 및 쇠꼬리산말이 70% 이상의 멜라닌 억제효과를 보였다. 이러한 내용은 산말이 항산화 및 항멜라닌 활성과 같은 천연 화장품 소재로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
해양 홍조류 참도박(Grateloupia elliptica, G. elliptica)을 흑효모(Aureobasidium pullulans, A. pullulans)로 발효시킨 추출물들의 인간 피부각질세포주(HaCaT)에 대한 항염증 효과를 조사하였다. 흑효모로 발효한 참도박 추출물은 참도박 추출물에 비하여 총 폴리페놀(total polyphenol content)은 최대 2.7 배로 증가되었으며 총 플라보노이드(total flavonoid conten)는 최대 2.4 배 증가되었다. 인간 피부각질세포를 lipopolysaccharide (LPS) 또는 H2O2로 염증을 유도 한 후 참도박 추출물과 참도박 발효 추출물을 100 ㎍/mL 농도로 처리 한 결과 LPS 또는 H2O2 만 처리한 세포군에 비하여 약 3 ~ 10% 정도 세포생존율이 증가되었다. 또한 염증 유발과 관련된 단백질 발현 변화를 조사한 결과 참도박 발효추출물이cyclooxygenase-2 및 70 kDa heat shock protein 의 발현을 현저히 감소시켰다. 따라서 흑효모로 발효한 참도박은 항염효과를 가진 피부수렴용 화장품 소재로 유용하다.
A novel cell count method, which can improve the count efficiency and reduce contamination problem, was presented using micro lattice engraved on culture dish. The micro lattice has feature of $50{\mu}m{\times}50{\mu}m$ rectangular shape, $2{\mu}m$ line width, and $2{\mu}m$ depth in $3mm{\times}3mm$ area. In this paper, nickel mold was fabricated with thickness of 3mm and diameter of 80 mm, and transcription of the micro lattice on a polystyrene cell culture dish was performed by hot embossing at $200\;^{\circ}C$. The tedious and error-prone harvest/load processes of conventional cell counts with a hemocytometer could be omitted, and these advantages became magnified during periodical counts involving long-term cultures. SupT1 cells and HeLa cells were cultivated with the dish for 7 days in $CO_2$ incubator and counted as $371.84/mm^2$ and $123.36/mm^2$, respectively, during the cultivation without harmful effects on the cells.
에토포시드와 아피제닌의 약동학적 상호작용 연구를 위하여 아피제닌 (0.4, 2.0 또는 8 mg/kg)과 에토포시드의 경구(6 mg/kg) 및 정맥 (2 mg/kg) 투여 하여 본 연구를 실시하였다. 아피제닌이 cytochrome P450 (CYP) 3A4 활성과 P-glycoprotein (P-gp)의 활성에 미치는 영향도 평가하였다. 아피제닌의 CYP3A4의 50% 효소활성억제는 $1.8{\mu}M$ 이었다. 아피제닌은 MCF-7/ADR 세포의 로다마인-123 세포 축적을 증가 시키므로 P-gp를 억제시켰다. 아피제닌은 에토포시드의 혈장곡선하면적과 최고혈장농도 (AUC and $C_{max}$)를 유의성 있게 증가시켰으나, 에토포시드의 최고혈장농도 도달시간 ($T_{max}$)과 생물학적 반감기 ($t_{1/2}$)에는 영향을 미치지 않았다. 따라서, 아피제닌 존재하에 에토포시드의 절대적생체이용률 (AB)은 대조군과 비교하여 유의성있게 증가되었다. 경구투여시와는 대조적으로, 아피제닌은 정맥 내로 투여된 에토포시드에서는 약동학적 파라미터에 어떤 영향도 미치지 않았다. 따라서 아피제닌이 에토포시드의 생체이용률을 증가시킨 것은 아피제닌이 소장과 간장에서 CYP3A4을 억제 및 소장에서 P-gp를 억제 시켰기 때문으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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