Melhylovorus sp. strain SS1 grown on methanol was found to show activities of key enzymes of the linear route, $NAD^+$-linked formaldehyde and formate dehydrogenases, and the cyclic route, hexulose-6-phosphate synthase, glucose-6-phosphate isomerase, glucose-6-phosphate dehydrogenase, and 6-phosphogluconate dehydrogenase, for formaldehyde oxidation. The activities of the cyclic route enzymes were higher than those of the linear route enzymes. The bacterium also exhibited activities of the key enzymes of the ribulose monophosphate and Entner-Doudoroff pathways and transaldolase involved in the formaldehyde assimilation and the enzymes involved in the biosynthesis of extracellular polysaccharide. Cells grown in the presence of 2.3 mM ammonium sulfate were higher in the productivity of extracellular polysaccharide, but lower in the growth yield, than those grown in the presence 7.6 mM ammonium sulfate. The activities of 6-phosphogluconate dehydrogenase, phosphoglucomutase, and UDP-pyrophosphorylase in cells grown under nitrogen-limited condition were higher, but that of 6-phosphogluconate dehydratase/2-keto-3-deoxy-6-phosphogluconate aldolase was lower, than those in cells grown in the presence of sufficient amount of nitrogen source.
Palmitoyl CoA was found to inhibit corn embryo axis glucose-6-phosphate dehydrogenase and 6-phosphogluconate dehydrogenase, which were also inhibites by polyamines. However, reversal of inhibition of both enzymes by palmitoyl CoA was made by spermine. Activity of corn embryo axis protein kinase was found to increase steadily after germination. Activation and inhibition of protein kinase were made by MgCl$_2$and all polymines, respectively. Suc results suggest that fatty acid biosynthesis and lypolysis could be regulated to some extent by polyamines in corn embryo axis.
Hyeonjeong Yu;Jiyeon Hong;Jihye Seok;Young-Bae Seu;Il-Kwon Kim;Kyung-Jin Kim
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.33
no.10
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pp.1361-1369
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2023
Corynebacterium glutamicum (C. glutamicum) has been considered a very important and meaningful industrial microorganism for the production of amino acids worldwide. To produce amino acids, cells require nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH), which is a biological reducing agent. The pentose phosphate pathway (PPP) can supply NADPH in cells via the 6-phosphogluconate dehydrogenase (6PGD) enzyme, which is an oxidoreductase that converts 6-phosphogluconate (6PG) to ribulose 5-phosphate (Ru5P), to produce NADPH. In this study, we identified the crystal structure of 6PGD_apo and 6PGD_NADP from C. glutamicum ATCC 13032 (Cg6PGD) and reported our biological research based on this structure. We identified the substrate binding site and co-factor binding site of Cg6PGD, which are crucial for understanding this enzyme. Based on the findings of our research, Cg6PGD is expected to be used as a NADPH resource in the food industry and as a drug target in the pharmaceutical industry.
The electrophoretic banding patterns of 6-phosphogluconate dehydrogenase (PGD) in the two different chromosomal ploidy groups of Gyraulus were compared. The monomeric or dimeric banding patterns or allelic variations in a locus of PGD were observed in four diploid populations (Osan, Sohre, Kimpo and Kangwha) of G. convexiusculus occurring in Korea, whereas the isozyme banding patterns encoded by at least 3 different loci were shown in the tetraploid populations of G. (Torquis) groups collected from Michigan, the U.S.A. Of 3 different tetraploid groups, G. (T.) circumstriatus group showed 3 monomorphic isozyme banding patterns, and the other 2 populations showed some allelic variations. Such results provided good evidence to differentiate tetraploid subgenus Torquis group from the diploid Gyraulus populations.
In this study, rat hepatocytes known to have active glucose metabolism were obtained to investigate the hypoglycemic action of fat soluble fraction of red ginseng by using the liver perfusion technique and incubated in two different media-one containing insulin and glucagon (control group), and the other containing glucagon only The activities of main regulating enzymes, such as glucokinase, glucose 6-phosphate dehydrogenase, 6-phosphogluconate dehydrogenate, and glucose 6-phosphatase, related to metabolic pathways of glucose in these two kinds of hepatocytes were compared between these two groups and the effects of addition of fat soluble fraction ($10^1$~$10^4$%) from red ginseng to these two groups on these enzymes were also detected. The results were as follows. The specific activity of enzymes such as glucokinase, flucorse 6-phosphate dehydrogenase, and 6-phosphogluconate dehydrogenase related to glucose-consuming pathways of insulin-deficient group was much less than control one. However, their decreased activity was recovered after the addition of fat-soluble fraction at all range of concentrations. The specific activity of these enzymes after the addition of ginseng components to the control group was also increased. On the other hand, the specific activity of glucose 6-phosphatase related to glucose-producing pathway of insulin-deficient group was much higher than control one, but their increased activity was decreased obviously after the addition of fat soluble fraction at all range of concentrations. The same results were observed after the addition of fat-soluble fraction to the control group. These results suggest that the red ginseng saponin components might be effective on diabetic hyperglycemia by regulating the activity of enzymes related to glucose metabolism directly and/or indirectly. The effects of fat-soluble fraction ($10^2$%) and ginsenosides (mixture, $Rb_1$ and $Rg_1$, $10^4$%) on hypoglycemic action were compared. As a result, they showed considerable effect on hyperglycemia, but the best eff ect on the activities of glucokinase and glucose 6-phosphate dehydrogenase was appeared by ginsenoside $Rb_1$ and that of 6-phosphogluconate dehydrogenase and glucose 6-phosphatase was by ginsenoside mixture.
The decreased activities of liver enzymes relating to carbohydrate metabolism such as glucose- 6-phosphate dehydrogenase, 6-phosphogluconate dehydrogenase and acetyl CoA carboxylase of streptozotocin injected rats were significantly modified by the intraperitoneal injection of ginseng saponin mixture and/or purified ginsenosides. However, several enzymes such as pyruvate kinase, malic enzyme and glycogen phosphorylase were not modified appreciably by the saponin administration, suggesting that the effect of ginseng saponin might be depend upon individual enzymes. Examination of liver enzymes by liver professing technique using perfusion buffer containing saponin (10-3%) showed that the ginseng saponin might stimulate insulin biosynthesis as well as the related enzyme activities.
In this study, rat hepatocytes known to have active carbohydrate metabolism were obtained by using the liver perfusion technique to examine the hypoglycemic action of red ginseng saponin components [ginsenoside (mixture, $Rb_1$, and $Rg_1$)] and incubated in two different media-one containing insulin and glucagon (control group), and the other containing glucagon only, The specific activities of some regulatory enzymes such as glucokinase, glucose 6-phosphate dehydrogenase, 6-phosphogluconate dehydrogenase, and glucose 6-phosphatase, in main pathways which were directly related to the glucose metabolism were compared between these two kinds of hepatocytes cultured in two different media. The effects of red ginseng saponin components [ginsenoside (mixture, $Rb_1$, and $Rg_1$)] under the concentration of $10^3$~$10^6$% on these enzymes In hepatocytes were also investigated, when they were added to these two media. The results were as follows. The specific activity of enzymes such as glucokinase, glucose 6-phosphate dehydrogenase, and 6-phosphogluconate dehydrogenase related to glucose-consuming pathways of insulin-deficient group was much less than control one, however, their decreased activity was recovered after the addition of ginseng components at all range of concentrations. The increased specific activity of these on - zymes was shown by the addition of ginseng components to the control group. On the other hand, the specific activity of glucose 6-phosphatase related to glucose-producing pathway of insulin-deficient group was much higher than control one, but their Increased activity was decreased after the addition of ginseng components at all range of concentrations. The same results were obtained after the addition of ginseng components to the control group. These results suggest that the red ginseng saponin components might better diabetic hyperglycemia by regulating the activity of enzymes related to glucose metabolism directly and/or Indirectly though more detailed studies were needed.
Most of the biosynthetic pathways for secondary metabolites are influenced by carbon metabolism and supply of cytosolic NADPH. We engineered carbon distribution to the pentose phosphate pathway (PPP) and redesigned the host to produce high levels of NADPH and primary intermediates from the PPP. The main enzymes producing NADPH in the PPP, glucose 6-phosphate dehydrogenase (encoded by zwf1 and zwf2) and 6-phosphogluconate dehydrogenase (encoded by zwf3), were overexpressed with opc encoding a positive allosteric effector essential for Zwf activity in various combinations in Streptomyces lividans TK24. Most S. lividans transformants showed better cell growth and higher concentration of cytosolic NADPH than those of the control, and S. lividans TK24/pWHM3-Z23O2 containing zwf2+zwf3+opc2 showed the highest NADPH concentration but poor sporulation in R2YE medium. S. lividans TK24/pWHM3-Z23O2 in minimal medium showed the maximum growth (6.2 mg/ml) at day 4. Thereafter, a gradual decrease of biomass and a sharp increase of cytosolic NADPH and sedoheptulose 7-phosphate between days 2 and 4 and between days 1 and 3, respectively, were observed. Moreover, S. lividans TK24/pWHM3-Z23O2 produced 0.9 times less actinorhodin but 1.8 times more undecylprodigiosin than the control. These results suggested that the increased NADPH concentration and various intermediates from the PPP specifically triggered undecylprodigiosin biosynthesis that required many precursors and NADPH-dependent reduction reaction. This study is the first report on bespoke metabolic engineering of PPP routes especially suitable for producing secondary metabolites that need diverse primary precursors and NADPH, which is useful information for metabolic engineering in Streptomyces.
Intraspecific and interspecific isozyme variations and their relationship of 16 local populations in 3 species of Phyllostachys, that is, P. bambusoides, P. nigra var. henonis and P. pubescens were investigated by multi-variate analysis. Leaf isozymes of Phyllostachys such as 6-PGD (6-phosphogluconate dehydrogenase), MDH (malate dehydrogenase), PGI (phosphoglucoisomerase), PRX (peroxidase), PGM (phosphoglutamase), IDH (isocitrate dehydrogenase) showed electrophoretic variations in the number of zymotypes (7, 6, 6, 9, 3 and 5, respectively). In the cluster analysis on the isozymic characteristics, 16 populations were classified into 3 species at the euclid genetic distance of 2.041. P. nigra var. henonis and P. bambusoides were clustered first at 2.813 and then P. pubescens at 3.001. So far, 3 local types of intraspecific ariation were found in P. nigra var. henonis and P. bambusoides.
By spectrophotometric assay method, the following enzymes could be detected in Dunaliella tertiolecta and Chlorella pyrenoidosa cell-free extracts: Hexokinase; Glucose-6-phosphate, 6-Phosphogluconate and Triosephosphate dehydrogenase; Transketolase; Phosphogluco and Ribosephosphate isomerase; Phosphoglucomutase; Phosphofructokinase; Fructosediphosphate aldorase and Ribulosephosphate 3-epimerase. Such enzymes are in accordance with the proposed pathway of glucose catabolism by D. tertiolecta as well as C. pyrenoidosa. Also, it could be estimated, under the presence of NADP, that pentose phosphate pathway were more active than glycolytic pathway in D. tertiolecta cell-free systems.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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