요코가와흡충과 미야타흡충의 genomic DNA를 RAPD 분석을 이용하여 비교하였다. 상업적으로 구 입한 60-70%의 G+C 성분을 가진 무작위 10-mer oligonucleotide 표지자 (Kit A, Operon Technologies Inc., CalifDmia, USA) 20개 중에서 다음의 8개를 이용하여 두 홉충간에 구별이 가능한 밴드양상을 관찰할 수 있었다: OPA-02,5-TCCCGAGCTG-3; OPA-09,5-GGGTAACGCC-3; OPA-10, 5-GTGATCGCAG-3; OPA-11, 5-CAATCGCCGT-3; OPA-13, 5-CAGCACCCAC-3; OPA-17, 5-GACCGCTGT-3; OPA-19,5-CAAACGTCGG-3; OPA-20, 5-GTrCCGATCC-3. 이 연구의 결과로 미야타흡충은 요코가와흡충과 서로 다른 유전자 염기 서열을 가지고 있음이 암시 되었다.
The microencapsulation of sodium naproxen with Eudragit. RS was studied by coacrtvation/phase separation process using Span 80 in mineral oil/acetone system. Various factors which affect the mciroencapsulation, e.g., stirring speed, and surfactant concentraction, Eudagit RS concentration and loading drug amounts were examined. For the evaluation of the prepared microcapsules, release rate, particle size distribution and surface appearance as well as in vivo test were carried out. The addition of n-hexane and freezing of microcapsules accelerated the hardening of microcapsules. The optimum concentration of Span 80 ti prepare the smallest microcapsules was the same value with the CMC of Span 80 in solvent system. When 1.5% (w/w) Span 80 was used, the smallest microcapsules were formed $(30.02\pm5.05\mu$ in diameter) belonging to the powder category showing smooth, round and uniform surface. The release of sodium naproxen was retarded by microencapsulation with Eudragit RS. The Eudragit RS microcapsules showed significantly increased AUC and MRT and deceased Cl/F in rabbits.
Lactate and ketone bodies are considered biological markers for ketosis and several inherited metabolic disorders. In the current study, the specific ratios of lactate and ketone bodies as analytical tools for differential diagnosis of various lactic acidosis were devised. The study included a protein precipitation step following tert-butyldimethylsilyl derivatisation. Total run time was approximately 30 min including sample preparation and GS/MS analysis. The limits of detection were below 0.1 pg/mL over the targeted 4 analytes. The calibration curve was linear over the concentration range of $0.001{\sim}250{\mu}g/mL$ for pyruvate, beta-hydroxybutyrate, and acetoacetate ($R^2$ > 0.99). Inter-day accuracy and precision were 87.7~94.8% with RSD of 2.5~5.7% at 2 levels. Absolute recoveries (%) of target analytes were 87.0~98.4%. The method was validated for the quantification of lactate and ketone bodies for differentiation of lactic acidosis.
목 적 : 한국인 당원병 제 Ia형 환자에서 G6Pase 유전자 돌연변이를 찾아내고, 유전형과 임상양상과의 연관관계를 밝히는 것이다. 방 법 : 서울대학교병원 소아과에서 Ia형 당원병으로 진단 받은 환자 20명을 대상으로 G6Pase 유전자에 대하여 직접 염기서열 분석하였다. 유전형과 임상 양상의 상관성을 알아보기 위하여 진단시 연령, 저신장, 저혈당, 고콜레스테롤혈증, 고요산혈증, 고칼슘뇨증, 신석회화증, 간선종 발생을 조사하였다. 결 과 : 총 5종류의 돌연변이가 발견되었고, splice site 돌연변이인 727G>T가 40개의 대립 유전자 중 32개에서 발견되어 80%의 빈도를 보였다. 전체 20명 중에서 12명이 727G>T 동형접합자이고, 8명이 727G>T 복합 이형접합자이었다. 8명의 이형접합자에서 G122D 3명, P178A 1명, G222R 2명, 새로운 돌연변이인 S339R 2명 등 다른 돌연변이를 찾을 수 있었다. 727G>T 동형접합자와 복합 이형접합자 두 군 사이에 저신장, 저혈당, 고콜레스테롤혈증, 고요산혈증, 신석회화증, 간선종의 빈도는 차이를 보이지 않았다. 결 론 : 임상 양상, 생화학적 검사와 함께 유전자 돌연변이 분석을 이용하면 간생검을 통한 효소측정을 하지 않고 Ia형 당원병을 진단할 수 있으며, 727G>T 동형접합 돌연변이가 이형접합과 비교할 때 질병 양상에 큰 영향을 미치지 않는다.
양파가공기술의 일환으로 양파에 포함된 풍부한 포도당을 포도당산화효소(glucose oxidase)를 이용하여 글루콘산(gluconic acid)이 함유된 건강기능성 양파음료를 개발하기 위한 기초연구를 수행하였다. $Novozym^{\circledR}$ 771의 포도당 소모속도에 대한 kinetic parameter를 알아본 결과 Mechaelis Menten equation의 특성치들은 $V_{max}=26.1{\times}10^{-2}\;g/L{\cdot}min$이고 $K_m=5.84\;g/L$이었다. 양파즙에서의 포도당 산화효소의 반응특성을 알아보기 위해 2.5L jar fermentor에서 조업부피 1L로 각 조건에서 실험 하였다. 온도의 영향을 검토한 결과 $25^{\circ}C$일 경우 초기반응속도가 $3.18{\times}10^{-2}\;g/L{\cdot}min$이며 $30^{\circ}C$일 때보다 1.1배 증가된 값을 보임으로서 온도가 $30^{\circ}C$로 증가시 반응속도는 다소 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 통기속도의 영향을 살펴본 결과 반응속도는 통기량이 증가할수록 증가하는 경향을 보였다. 0 vvm일 때는 반응이 거의 진행되지 않았으며 4 vvm일 때 초기반응속도 $9.18{\times}10^{-2}\;g/L{\cdot}min$, 91.5%로 만족할 만한 높은 값을 보였으며 용존산소농도의 값을 측정함으로서 4 vvm일 때 산소가 포함됨을 확인할 수 있었다. 교반속도는 측정되었던 반응 조건 중 반응속도에 큰 영향을 주는 중요한 조건이었다. 450rpm일 때 $16.2{\times}10^{-2}\;g/L{\cdot}min$, 99.2%으로서 최대값을 보였다. 교반속도의 증가는 산소전달과 물질전달을 용이하게 해줘 결국 반응속도가 증가되는 것으로 판단된다. 2.5 L jar fermentor에서의 결과를 바탕으로 20L bench 규모의 효소 반응기를 제작, 20L 효소 반응기에서 조업부피 10L로 $25^{\circ}C$, 2 vvm, 350rpm에서 양파즙의 포도당 산화반응을 살펴본 결과 전체적인 반응속도가 크게 변하지 않는 것으로 판단되어 본 효소 반응은 매우 용이하게 scale-up 될 수 있는 것으로 판단되었다.
Lee Young-Ju;Cho Jae-Keun;Kim Ki-Seuk;Tak Ryun-Bin;Kim Ae-Ran;Kim Jong-Wan;Im Suk-Kyoung;Kim Byoung-Han
Journal of Microbiology
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제43권5호
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pp.391-397
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2005
Escherichia coli is a common inhabitant of the intestinal tracts of animals and humans. The intestines of animals also represent an ideal environment for the selection and transfer of antimicrobial resistance genes. The aim of this study was to investigate the resistance of E. coli isolated from chicken fecal samples to fluoroquinolones and to analyze the characterization of mutations in its gyrA and parC gene related resistance. One hundred and twenty-eight E. coil isolates showed a high resistance to ciprofloxacin (CIP; $60.2\%$), enrofloxacin (ENO; $73.4\%$) and norfloxacin (NOR; $60.2\%$). Missense mutation in gyrA was only found in the amino acid codons of Ser-83 or Asp-87. A high percentage of isolates ($60.2\%$) showed mutations at both amino acid codons. Missense mutation in parC was found in the amino acid codon of Ser-80 or Glu-84, and seven isolates showed mutations at both amino acid codons. Isolates with a single mutation in gyrA showed minimal inhibitory concentrations (MIC) for CIP (${\le}0.5\;to\;0.75{\mu}g/ml$), ENO (1 to $4{\mu}g/ml$) and NOR (0.75 to $4{\mu}g/ml$). These MIC were level compared to isolates with two mutations, one in gyrA and one in parC, and three mutations, one in gyrA and two in parC (CIP, ${\le}0.5\;to\;3{\mu}g/ml;\;ENO,\;2\;to\;32<{\mu}g/ml;\;NOR,\;1.5\;to\;6\;{\mu}g/ml$). However, the isolates with two mutation in gyrA regardless of whether there was a mutation in parC showed high MIC for the three fluoroquinolones (CIP, 0.75 to $32{\le}{\mu}g/ml;\;ENO,\;3\;to\;32{\le}{\mu}g/ml;\;NOR,\;3\;to\;32{\le}{\mu}g/ml$). Interestingly, although the E. coil used in this study was isolated from normal flora of chicken, not clinical specimens, a high percentage of isolates showed resistance to fluoroquinolones and possessed mutations at gyrA and parC associated with fluoroquinolone resistance.
오만둥이의 세포독성 효과를 알아보기 위해 신선한 오만둥이를 분쇄하고 동결건조하여 분말 형태로 제조한 후 시료 5 g당 메탄올, 에탄올, 아세톤, 물을 각각 100 mL씩 첨가하여 용매별 추출물을 제조하였다. 이 용매별 추출물을 대장암 세포주인 HT-29 cell에 250 ${\mu}g/mL$ 농도로 각각 처리하여 형태학적인 변화를 관찰한 결과 대조군에 비해 아세톤 추출물에서 세포의 수가 감소하고 그 형태가 응축되는 현상을 관찰할 수 있었고, 이 결과를 바탕으로 100, 250, 500 ${\mu}g/mL$ 농도로 MTT reduction assay를 실시한 결과 아세톤 추출물을 500 ${\mu}g/mL$ 농도로 처리했을 때 6%의 암세포만이 생존하는 것으로 나타나 형태학적인 실험결과와 동일한 결과를 얻을 수 있었다. 아세톤 추출물을 헥산, 디에틸 에테르, 에틸 아세테이트 그리고 물로 분획물을 조제하여 대장암 세포주인 HT-29 cell에 250 ${\mu}g/mL$ 농도로 각각 처리하여 형태학적인 변화를 관찰한 결과 헥산 분획물에서 세포의 형태변화가 가장 크게 나타났으며 250 ${\mu}g/mL$ 농도로 MTT reduction assay를 실시한 결과에서도 5.1%의 암세포만이 존재하는 것으로 나타나 헥산 분획물이 가장 높은 세포독성 효과를 보이는 것을 확인할 수 있었다. 다른 암세포주에 대한 영향을 알아보기 위해 헥산 분획물을 SW620, HeLa 및 MCF-7 세포주에 농도별로 처리한 결과, 250 ${\mu}g/mL$ 농도에서 10% 내외의 암세포 생존율을 보여 높은 세포독성 효과를 나타내었으며 특히, HeLa 세포주에서는 생존율이 5.8%로 나타나 매우 높은 활성을 보였다. 이상의 결과를 종합하여 미루어 짐작해 볼 때 오만둥이에 함유된 불포화 지방산 등의 지용성 물질이 암세포주의 성장 억제에 중요한 역할을 하리라 생각된다. 따라서 오만둥이 추출물은 다양한 암세포주에 대해 활성을 가지는 해양생물로서의 잠재적인 가능성을 가진다는 것을 확인할 수 있었다.
Atopic dermatitis is one of the most common skin disease in children and a characteristic chronically recurrent form of dermatitis with a hereditary tendency, affecting infants and may extend to the childhood or th the adult age. Environmental factors, stress, and foodstuffs such as milk, egg may cause atopic dermatitis. Nc/Nga mice were used as an animal model for human atopic dermatitis. The divided by 4group such as normal group, BMAC group, FK506 group, MR group for this study raised in conventional conditions. To investigate effect of Chamomile German on atopic dermatitis in NC/Nga mice, the serum IgE and IgG1 level were measured while the severity degree of the skin lesion was examined by the naked eyes of two volunteers who were unaware of the treatment status. The results were the followings. 1. The score on the severity degree of skin dermatitis in FK 506 and MR group was lower than that in control group. 2. The serum IgE level in control group was higher 25% than that in normal group. 3. The serum level of IgE in FK506 and MR group compares to control group was decreased. 4. The serum IgG1 level was decreased more than 3.5 times in FK506 compared to control group while MR group had significantly less the serum IgG1 than control group. From the above results, treatment of Chamomile German oil had the effect on atopic dermatitis in NC/Nga mice. If scientific researches on aroma oil are performed in various way, aroma oil will be used to cure skin dermatitis as a alternative therapy in the future.
콩과는 전 세계적으로 약용식물로 흔히 사용된다. 본 연구에서는 약용식물이자 다양한 용도로 사용되는 염료식물인 콩과에 속하는 황기(Astragalus membranaceus), 소목(Caesalpinia sappan L.), 감초(Glycyrrhiza uralensis F.), 갈근 및 갈화(Pueraria lobate O.), 자단향(Pterocarpus santalinus L.) 추출물을 이용하여 항산화능 및 세포 보호능을 비교하고자 한다. 염료 추출물은 라디칼 소거능, 총 페놀 함량 및 MTT assay를 활용한 간세포 보호능이 확인되었다. 소목(5 mg/mL) 추출물에서 93.49%의 가장 높은 라디칼 소거능을 확인하였으며, 황기(5 mg/mL) 추출물에서 7.83%의 가장 낮은 라디칼 소거능을 확인하였다. 또한 소목 추출물의 총 페놀 함량은 310.93 mg GAE/g extract로 확인되며, 가장 높은 총 페놀함량을 확인하였고, 황기 추출물의 총 페놀 함량은 15.33 mg GAE/g extract로 확인되며 가장 낮은 총 페놀 함량을 확인하였다. 게다가, 가장 높은 항산화능을 나타낸 소목(100 ㎍/mL) 및 자단향(100 ㎍/mL) 추출물에서 산화적 스트레스에 대한 세포 보호능을 확인하였다. 이러한 결과 콩과 5종 물질 중 적색 천연색소를 가지는 소목 및 자단향에서 높은 항산화능이 있는 것으로 확인되었다.
Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) using crude and affinity-purified antigens of adult worms of Paragonimus westermani was performed for infected cat sera with different worm burden, from preinfection to 18th week after infection. Crude antigen was used with supernatant of homogenated worms by freezing-thawing method, and the supernate was centrifuged for 1 hour at 10,000 rpm at $4^{\circ}C$. Affinity-purified antigen(antibody-bound antigen) was prepared from fractions(bound and unbound) of crude antigen by affinity chromatography on CNBr-activated sepharose 4B, and IgG as a ligand was prepared from paragonimiasis cat serum(6 months infected) obtained by ammonium sulfate ($40%{\sim}45%$ saturated) precipitation method. By SDS-PAGE, crude antigen showed 22 polypeptide fractions while purified antigen showed 4 fractions: 36, 400, 34, 700, 27, 600 and 11, 500 in molecular weights. All cats were divided into five groups($G_1-G_5$) by different worm burdens. The mean of recovered worms(${\pm}SD$) and the number of cats in each group are as follows: $G_1$, 2 worms(0) and 4 cats; $G_2$, 4.75 (${\pm}0.66$) and eight; $G_3$, 10.75(${\pm}1.92$) and four; $G_4$, 23.20(${\pm}3.43$) and five; $G_5$, 48(${\pm}12.63$) and five cats. The results were summarized as follows: 1. The antibody levels(OD value) increased by worm burden in $G_1$ to $G_4$ generally. However, individual antibody levels were not exactly related with worm burden in all groups, especially there was a wide difference in $G_4$ and $G_5$. These results suggested that the worm burden in $G_4$ (about $20{\sim}30$ worms) is enough to produce antibody maximum in cats of $2{\sim}3kg$ weight. 2. The antibody levels increased significantly(p<0.05) compared to control sera at the 3rd week in $G_1$ and $G_2$, at the 2nd week in $G_3$, and at the 1st week in $G_4$ and $G_5$. Especially in the 4th week, OD value increased more in $G_1$(p<0.01) and in $G_2$ to $G_5$(p<0.001). In the pattern of antibody levels by ELISA in each group, OD in $G_1$ increased to the 18th week continuously, in $G_2$ OD was maintained same after the 16th week, but in $G_3$ it decreased after the 16th week, and it was maintained same in $G_4$ and $G_5$ after the 14th week. 3. The antibody levels by ELISA with the affinity-purified antigen were higher than those with crude antigen in all groups generally. Especially, the difference of OD values between two antigens was larger from the 4th to the 10th week. In $G_1$ and $G_2$ OD with purified antigen was higher than that with crude one to the 18th week. It was also higher in $G_3$ than that with crude antigen to the 16th week and OD of $G_4$ and $G_5$ were higher before the 14th week than that with crude antigen, however became lower at the 16th week. Consequently, the antibody level in ELISA with affinity-purified antigen was more sensitive at the early weeks after infection and in light infection groups than that with crude antigen.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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