대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.1
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pp.154.1-154.1
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2003
Hydroxyproline (HYP) is a post-translational product of proline hydroxylation catalyzed by an enzyme prolyl 4-hydroxylase which plays a crucial role in the synthesis of all collagens, because the 4-hydroxyproline residues are essential for the folding of the newly synthesized collagen polypeptide chains into triple-heical molecules. Considering the role of collagen and its significance in many clinically important diseases such as liver cirrhosis, a great deal of attention has been directed toward the development of an assay at cell-based system. (omitted)
This study determined plasma glucose, free fatty acid(ffa), epinephrine, norepinephrine, creatine the phosphokinase(CPK), calcium (Ca), magnesium(Mg) and hydroxyproline, Ca and Mg in the heart muscle. Thirty six male Sprague Dawley rats average weighing 110g divided into two diet group : normal Mg group(0.05% Mg), Marginal Mg group(0.005% Mg). After the rats were on experimental diets for 2 weeks, rats for each group were randomly assigned to stress and no stress group and 30 minutes IMMB stress was administered to stress group every day for two weeks. The following were found : 1) Rats fed normal magnesium diet showed decreased plasma glucose and non signficant change in norepinephrine and CPK with IMMB stress, while magnesium deficient rats showed elevated plasma glucose, norepinephrine and CPK with stress. 2) Myocardial hydroxyproline and plasma epinephrine were not significantly different among groups. 3) In the rats fed adequate magnesium, stress increased plasma magnesium while rats on marginal magnesium diet did not show significant change with stress. 4) Plasma and myocardial calcium were increased in rats fed marginal Mg diet, but did not show any significant difference with stress.
To prevent the denaturation of ficin(EC 3.4.22.3) that is a proteolytic enzyme in fig(Ficus carica L.), fig conserve was heated to 55oC. The fig conserve was added as a tenderizer to native Korean cattle beef(KCB), dairy cattle beef(DCB), castrated dairy cattle beef(CDCB), and imported beef(IB). The composition of free amino acids, hydroxyproline content, shear force, cooking loss, morphological changes and sensory evaluation were then investigated to observe the effect of tenderizing beef with fig conserve. Free amino acids and cooking loss of treated beef were higher than those of control, whereas hydroxyproline and shear force were lower. Glutamine in treated beef decreased relatively but asparagine increased. Hydroxyproline was found, in increasing order of abundance, in DCB, CDCB, IB and KCB. By portion, loin was higher than tenderloin in free amino acids, hydroxyproline and shear force but was lower in cooking loss. Observation with a light microgram revealed a surprising loss of muscle fiber in treated beef. In sensory evaluation of uncooked beef, the control was redder than the treated beef(p<0.01~p<0.05). Treatment with fig conserve increased the juiciness of both cooked CDCB and IB(p<0.001) and decreased their hardness(p<0.01~p<0.001).
We observed that treatment with dimethyl α-ketoglutarate (DMK) increased the amount of intracellular α-ketoglutarate significantly more than that of α-ketoglutarate in HaCaT cells. DMK also increased the level of intracellular 4-hydroxyproline and promoted the production of collagen in HaCaT cells. In addition, DMK decreased the production of collagenase and elastase and down-regulated the expression of selected matrix metalloproteinases (MMPs), such as MMP-1, MMP-9, MMP-10, and MMP-12, via transcriptional inhibition. The inhibition of MMPs by DMK was mediated by the suppression of the IL-1 signaling cascade, leading to the attenuation of ERK1/2 phosphorylation and AP-1 transactivation. Our study results illustrate that DMK, an alkylated derivative of α-ketoglutarate, increased the level of 4-hydroxyproline, promoted the production of collagen, and inhibited the expression of selected MMPs by affecting the IL-1 cascade and AP-1 transactivation in HaCaT cells. The results suggest that DMK might be useful as an anti-wrinkle ingredient.
본 연구를 통하여 피부 미용 소재로 알려져 있는 콜라겐 펩타이드를 섭취한 후 혈중에 나타나는 소화분해산물 중 콜라겐 특유의 아미노산인 hydroxyproline과 이것의 dipeptide 형태인 Pro-Hyp이 피부에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. 피부 미용 소재를 경구 섭취하는 사람의 피부는 광노화 및 자연노화가 어느 정도 진행된 상태이므로, 이와 유사한 조건을 조성하기 위해 경구 투여를 시작하기 전에 hairless mouse에 7주간 주 3회 UV를 조사하여 주름을 선유발시켰다. 군 분리를 시킨 후 7주간 경구로 실험물질을 주 5회 반복 투여하면서, 주 3회 UV 조사를 병행하였으며, 시험 기간 중 임상증상, 체중변화를 관찰하였고, 3회 (0,4. 7주차) 피부주형을 채취하여 영상 분석을 실시하였으며, 2회 (0,7 주차)의 피부탄력측정 및 1회(7주차)의 TEWL측정을 병행하였다. 실험종료 후 피부조직의 병리조직학적 검사(H&E, Masson-Trichrome stain) 및 피부두께 측정을 실시하였다. 실험기간 중 이상 임상증상을 보이거나 사망한 개체는 없었으며, 체중에 대한 통계적으로 유의한 변화는 관찰할 수 없었다. 피부 육안관찰 시 NC군에 비해 UC군의 피부 주름 증가가 뚜렷하였으며, 시험군들은 UC군에 비해 주름 증가가 적었다. 경구 투여 0, 4, 7주차에 제작된 replica의 주름 지표를 통계 처리한 결과, UV/H군과 UV/P군은 DC군에 비해 감소경향은 보였으나 유의적인 차이는 없었다. 탄력측정검사 결과 UV를 쬐지 않은 NC군은 UC군에 비해 UA/UF, Ur/Ue, Ur/Uf 지표에서 유의적인 증가를 보였다. UV/H군과 UV/P군은 모두 0, 7주차 모두 유의적인 차이를 보이지 않았다. 피부 보습력 측정 결과 NC군 및 모든 실험군에서 UC군에 비해 유의적인 TEWL 감소를 관찰할 수 있었다. 피부 두께의 경우 NC군, UV/H군, UV/P군은 UC군에 비해 피부 두께가 유의적으로 감소하였다. 진피층에서의 교원질 확인을 위해 실시한 Masson-Trichrome stain의 경우 UC군에서는 상부 진피층에서의 염색상 소실이 관찰되었으나, 모든 실험군에서 진피층 손상이 거의 관찰되지 않아 실험물질에 의한 회복을 확인 할 수 있었다. 이상의 실험 결과 hydroxyproline, Pro-Hyp의 경구반복투여시 자외선에 의해 광노화가 유발된 피부에 보습 효과, 피부 두께 감소 효과, 진피층 손상 회복 효과를 유의적으로 확인할 수 있었으며, 단, 피부 주름 개선 정도는 통계적 유의성은 없이 경향성만을 확인할 수 있었다. Hydroxyproline과 이를 함유하는 dipeptide 형태의 Pro-Hyp를 경구 투여한 시험으로부터 확인한 피부 보습 및 진피층 회복 효과는 이 물질들이 유래된 콜라겐을 도포 또는 섭취했을 때 피부에 나타날 수 있는 작용들과 상통하며, 단독 미용 소재로도 활용될 수 있는 가능성을 보여주었다. 본 연구에서는 콜라겐 펩타이드를 섭취 시 체내에 흡수되어 혈액을 통해 각 조직에 운반되는 분해 산물이 피부에 미치는 영향을 동물 시험을 통해 살펴보았는데, 향후 연구에서는 관절, 혈관과 같은 다른 생체 조직들에 미치는 영향에 대해서도 검증해 볼 필요가 있다.
The purpose of this study was to investigate nutrient intake and bone status in rural postmenopausal women in Korea. Ten postmenopausal women in An-Sung area participated in this study and they were divided into two groups ; women in group I had been postmenopausal for 4 years or less and those in group II had been postmenopausal for 5 years or more before the present study began. Their environmental factors and dietary intakes were surveyed through the personal interviews. Serum levels of calcium, phosphorus, parathyroid hormone(PTH), estradiol and urinary Ca, P, creatinine, hydroxyproline levels were measured from December 4 to December 27 in 1993. The reults of this study are summarized as follows : Average ages of group I and II were 54.8 and 57.2 years. Average menopausal ages of group I and II were 50.8 and 47.3 years. The nutrient intakes of subjects were higher than recommended dietary allowances(RDA) except calorie, protein, calcium, and vitamin A. The nutrient status did not show any significant difference between group I and II. Serum levels of Ca, P, PTH, estradiol and urinary P, creatinine excretion did not show any significant difference between group I and II, and all levels were in normal range. Urinary Ca excretion(p<0.05) and hydroxyproline excretion(p<0.01) were significantly lower in group I than in group II. Urinary Ca/creatinine(Ca/cr) and hydroxyproline/creatinine(Hpr/cr) rations were significantly higher in group II than in group I(p<0.01. And Hpr/cr levels of group I were in normal range, but most of subjects in group II were higher than 0.017 indicating sign of osteoporosis. Correlations between parameters showed that serum PTH adn urinary Ca, Ca/cr levels were positive related (p<0.01), and the years of the after menopausal year and urinary Hpr/cr was also positive related(p<0.05). The present results suggests that it is difficult to protect postmenopausal women's bone destruction having Korean usual diets. Therefore, to prevent osteoporosis with aging, minimizing the hormonal changes in postmenopausal women is needed as well as Ca supplementation and proper exercise before menopause begins.
Objectives : The level of 4-hydroxyproline (4-Hyp) in human urine was measured using high performance liquid chromatography (HPLC) with a fluorescence detector. This method is useful for medical examinations and investigating the radicals induced by physical, chemical, mental stresses. This method is superior to many published several methods in terms of its low cost and ability to analyze many samples. Methods : The urine from workers in a tire manufacturing company (22 male pre- and post-shift workers) and 18 office-workers as controls were analyzed. Data concerning age, the cumulative drinking amount and the cumulative smoking amount was collected with a questionnaire. The optimum applied amount of dansyl-Cl, the optimum reaction temperature and time, the recoveries and the optimum pH of the eluent and buffer were determined.4-Hyp from human urine was derivatized with dansyl-Cl (dimethylamino-naphthalene-1-sulfonyl chloride) after removing the a-amino acid by a treatment with phthalic dicarboxaldehyde (OPA) and cleaned with Bond Elut C18 column. The 4-Hyp derivatives were separated on a reversed phase column by gradient elution with a phosphate buffer (5 mmol, pH 8.0) and acetonitrile, and detected by fluorescence measurements at 340 nm (excitation) and 538 nm (emission). Results : The detection limit for the urinary free 4-Hyp was $0.364{\mu}mol/l$. The recovery rate of 4-Hyp was 99.7%, and the effective pH of the phosphate buffer and borate buffer were 3.0 and 8.0, respectively. From statistical analysis, age, drinking and smoking did not affect the urinary free 4-Hyp in both the controls and workers. The range of urinary 4-Hyp in the controls, pre-shift, and post-shift workers were 0.33-16.44, N.D-49.06, and $0.32-56.27{\mu}mol/l$. From the pared-sample t-test, the urinary 4-Hyp levels in post-shift workers ($11.82{\pm}6.73\;nmmol/mg\;Cre$) were 2-fold higher than in pre-shift workers ($5.36{\pm}5.53\;nmol;/mg\;Cre$) and controls ($4.91{\pm}4.89\;nmol;/mg\;Cre$). Conclusions : This method was developed with high sensitivity, accuracy, and precision. The present method was effectively applied to analyze the urinary free 4-Hyp in both controls and workers.
이소플라본 보충이 골다공증의 예방 및 치료에 미치는 영향을 관찰하고자 Sprague-Dawley 암컷을 수술없이 일반식이를 제공한 군(CON), sham-operation 후 일반식이를 제공한 군(SH), 난소절제한 뒤 일반식이를 제공한 군(OVX), 난소절제 후 isoflavone을 공급한 군(OL, OM, OH)으로 나눈 뒤, 난소절제 4일 및 8주 후부터 8주간 이소플라본을 공급하여 혈액의 ALP, sy 중의 hydroxyproline의 변화, 골밀도, 골강도 및 골무게 등을 연구하였다. 골다공증의 예방에 대하여 isoflavone의 효과를 관찰한 결과, ALP는 난소를 절제한 OVX군에서는 CONrns과 SH군에 비해 유의적으로 높은 값을 보였다. 그러나, 난소절제 후 4일부터 8주간 isoflavone을 보충시킨 결과 ALP 활성과 urinary hydroxyproline 함량은 SH군과 비슷하게 낮아졌다. 특히 OM(0.8mg/kg diet)군의 경우 ALP활성과 urnary hydroxyproline 함량이 가장 낮아서 OVX군과 유의적인 차이를 보였다.(p<0.05). 난소적출 후 8주 후에 골밀도를 측정한 결과 난소절제군의 골밀도가 CONrns과 SH군에 비해 유의적으로 낮은 것으로 나타났다. Isoflavone을 보충한 결과 골밀도가 증가하였으나 유의적인 차이는 없어다. 골다공증의 치료효과에 대한 연구결과 alkaline phosphatase activity의 감소, 골밀도, 골강도 및 골무게가 증가하였으나 유의적인 차이는 나타나지 않았다. 이상의 결과는 난소절제 후에 일어나는 골격 대사의 이상은 isoflavone을 보충시킴으로써 어느 정도 정상화시킬 수 있음을 시사한다. 따라서 적절한 양의 isoflavone 보충은 폐경 후 여성의 골대사에 유익한 효과를 줄 것으로 풀이된다.
The functional properties of mechanically deboned chicken meat(MDCM) from whole carcass, whole carcass without exsanguination, neck without skin, leg hone, and upper back and rib were studied. Also, the effects of adding different levels of gelatin and MDCM to the comminuted meats were investigated. Proximate composition values of MDCM ranged from 54.2 to 68.6% moisture, 14.5 to 19.7% protein, 12.3 to 30.1% fat, and 1.1 to 1.3% ash. The MDCM from leg hone had a higher content of fat, and a lower contents of moisture and protein. The MDCM from neck without skin tended to be opposite to the MDCM from leg hone. The total pigment and myoglobin levels were highest in MDCM from whole carcass without exsanguination such as 3.83 and 0.29 rng /g, and those from the other parts were 1.58~2.93 mg /g and 0. 17~0.31 mg /g, respectively. The emulsifying capacity and water holding capacity were highest in MDCM from neck without skin which contained lower levels of fat, collagen and hydroxyproline, but a higher level of salt soluble protein. The emulsifying capacity of comminuted meat decreased as gelatin content increased. The extractability of hydroxyproline from gelatin showed a higher solubility in acidic solution. The MDCM could he added up to 20% level without detrimentally affecting functional properties of comminuted meats although they had less water holding capacity and cooking loss as the proportion of MDCM increased.
Objectives: Although increased reactive oxygen species (ROS) is caused by stress accelerates collagen degradation, there was no data on the relationship between stress and urinary hydroxyproline (Hyp) and proline (Pro), a good marker of collagen degradation. The purpose of this study was to evaluate the relationship between depression, anxiety, and stress (DAS) and concentrations of urinary Hyp and Pro. Methods: 97 hospital employees aged 20 to 58 were asked to fill out comprehensive self-administrated questionnaires containing information about their medical history, lifestyle, length of the work year, shit-work and DAS. Depression Anxiety Stress Scale (DASS) was applied to evaluate chronic mental disorders. Urine samples were analyzed using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) with double derivatization for the assay of hydroxyproline and proline. Results: The mean value of Hyp and Pro concenturation in all subjects was $194.1{\pm}113.4\;{\mu}mol/g$ and $568.2{\pm}310.7\;{\mu}mol/g$. DASS values and urinary Pro concentrations were differentiated by sex (female > male, p < 0.05) and type of job (nurse > others, p < 0.05). In the stepwise multiple linear regressions, urinary Hyp and Pro concentrations were influenced by stress (Adjusted $r^2$ = 0.051) and anxiety and job (Adjusted $r^2$ = 0.199), respectively. Conclusions: We found that stress and anxiety were correlated with urinary Hyp and Pro concentrations. To identifying a definite correlation, further study in large populations will be needed.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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