• 한국산학기술학회논문지
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• 제9권3호
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• pp.800-806
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• 2008

자연발효된 청국장으로부터 혈전용해활성을 가지는 세균 Bacillus licheniformis HK-12를 농화분리하여, 배양기간 동안 생산된 혈전용해활성을 가지는 단백질에 대해 프로테옴 분석을 실시하였다. B. licheniformis HK-12를 액체 영양배지에 접종하여 얻어진 배양상등액을 피브린 평판법(fibrin plate method)을 사용하여 효소활성을 측정하였다. 그 결과, HK-12의 혈전용해 활성은 대조구인 plasmin보다 약 2.3배정도 높은 활성을 나타내었다. 효소는 배양상등액을 ammonium sulfate 침전, DEAE-cellulose chromatography, Sephadex chromatography 등을 수행하여 분리정제하였으며, 정제된 혈전용해효소의 분자량은 SDS-PAGE를 통해 약 23 kDa로 측정되었다. 배양시간에 따른 HK-6의 세포외 단백질의 변화를 2-D PAGE 분석을 통하여 분석하였다. 그 결과 36시간배양 후에 가장 현저하게 유도된 spot #1을 분리하였으며, MALDI-TOF MS를 이용하여 단백질 동정을 실시한 결과, 유도된 단백질의 아미노산 서열은 $^1EKKIEKYREEEORLK^{15}$으로서, serine protein kinase (PrkA) (AAU22526)로 확인되었다.

• 생명과학회지
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• 제8권6호
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• pp.654-659
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• 1998

NR2B는 연접후 치밀질의 주요 tyrosine 인산화 단백질이다. 본 연구에서는 mass spectrometry 방법을 적용하여 NR2B의 tyrosine 인산화 위치를 동정하였다. NR2B를 N-octyl glucoside (NOG)에 용해되지 않는 PSD 분획으로부터 SDS-PAGE와 electroelution방법으로 분리하였다. 분리한 단백질을 NR2B와 phos-photyrosine에 특이한 항체로 조사한 결과 이들은 phosphotyrosine을 유지하고 있는 NR2B임이 확인되었다. 이 단백질을 trypsin 혹은 endolys-C 처리하고, matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight (MALDI-TOF) mass spectrometry 방법으로 조사한 결과 Tyr-1304이 인산화됨을 확인하였다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제17권9호
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• pp.1296-1302
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• 2004

This study was conducted to evaluate the possible application of 2 D-SDS-PAGE (2 DE)-based proteome analysis techniques to the assessment of extreme proteolysis in postmortem skeletal muscle. Eight Hanwoo longissimus muscles were incubated immediately after slaughter for 24 h at 5$^{\circ}C$, 15$^{\circ}C$ or 36$^{\circ}C$. Warner Bratzler (WB)-shear force and ultrastructural configuration were determined at 24 h, and rate of proteolysis to 24 h was determined by 1 D-SDS-PAGE (1 DE) and 2 DE. In addition, tentative protein identification was performed from peptide mass fingerprints of MALDI-ToF analysis of major protein groups on 2 DE profiles. The result showed that although ultrastructural configuration was similar between the 5$^{\circ}C$ and 36$^{\circ}C$ treatments, meat at 5$^{\circ}C$ had higher WBshear force (approximately 5 kg greater). A higher rate of protein degradation at 36$^{\circ}C$ was observed based on Troponin-T degradation, 1 DE, and 2 DE analysis. This indicates that proteolysis during the early postmortem period was a significant determinant of shear force at 24 h. Little difference in proteolysis between 5$^{\circ}C$ and 15$^{\circ}C$ treatments was found based on classic 1 DE profile assessment. Meanwhile, considerable differences in the 2 DE profiles between the two treatments were revealed, with substantially higher rate of proteolysis at 15$^{\circ}C$ compared to 5$^{\circ}C$. Nuclease treatment improved 2 DE profile resolution. 400 ${\mu}$g and 600 ${\mu}$g of sample loading appeared to be appropriate for 24 cm pH 3-10 and pH 5-7 IPG strips, respectively. Protein detection and quantification of the 5$^{\circ}C$, 15$^{\circ}C$ and 36$^{\circ}C$ 2 DE profiles revealed 78, 163 and 232 protein spots respectively that were differentially modified in terms of their electrophoretic properties between approximately pI 5.3-7.7 with the molecular weight range of approximately 71-12 kDa. The current results demonstrated that 2 DE was a superior tool to 1 DE for characterising proteolysis in postmortem skeletal muscle.

• Journal of Plant Biology
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• 제38권4호
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• pp.349-357
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• 1995

The alkaline invertase ($\beta$-D-fructofuranoside fructohydrolase, EC 3.2.1.26) was isolated and characterized from the hypocotyls of mung bean (Phaseolus radiatus L.). The enzyme was purified by consecutive step using diethylaminoethyl (DEAE)-cellulose anion exchange, 1st Sephadex G-200, DEAE-Sephadex A50 and 2nd Sephadex G-200 chromatography. The overall purification was about 77-fold with a yield of about 6%. The finally purified enzyme exhibited a specific activity of about 48 $\mu$mol of glucose produced mg-1 protein min-1 at pH 7.0 and appeared to be a single protein by nondenaturing polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). The enzyme had the native molecular weight of 450 kD and subunits molecular weight of 63 kD and 38 kD as estimated by Sephadex G-200 chromatography and SDS-PAGE, respectively, suggesting that the enzyme is a heteromultimeric protein composed of two types of subunits. On the other hand, the enzyme appeared to be not a glycoprotein according to the results of Con A chromatography and glycoprotein staining. The enzyme had a Km for sucrose of 19.7 mM at pH 7.0 and maximum activity around pH 7.5. The enzyme was most active with sucrose as substrate, compared to raffinose, cellobiose, maltose and lactose. These results indicate the alkaline invertase is a $\beta$-fructofuranosidase.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제26권4호
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• pp.297-302
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• 1998

Bacillus stearothermophilus No.236 xylB 유전자가 삽입된 재조합 플라스미드 pKMG12를 가지고 있는 E. coli HB101 균주를 이용하여 B. stearothermophilus $\beta$-xylosidase B을 생산, 정제하고 효소의 일반특성을 조사하였다. Ammonuim sulfate 분획, DEAE-Sepharose CL-6B 이온 교환 크로마토그래피, Sephacryl S-200 및 Superdex 200HR 젤 크로마토그래피의 과정을 거쳐 정제하였으며 정제된 효소는 SDS-PAGE 및 zymogram 실험을 통해 $\beta$-xylosidase B의 단백질임을 확인하였다. 정제 $\beta$-xylosidase B는 반응액의 수소이온 농도와 온도에 매우 민감하며 최적 활성 pH 및 온도는 각각 pH 6.5와 $50^{\circ}C$로 결정되었다. $\beta$-Xylosidase 활성은 1 mM $Mn^{2+}$ 첨가에 의해 약 35% 활성화됨을 보였으나 $Ag^{+}$, $Cu^{2+}$ 및 $Hg^{2+}$ 등의 중금속이온의 존재하에서는 거의 완전한 저해를 나타내었다. 또한 본 효소는 비록 높지는 않으나 $\alpha$-arabinofuranosidase 활성도 가지고 있어 B. stearothermophilus No 236의 $\beta$-xylosidase A 효소 보다 최소한 arabinoxylan의 분해에 있어서 더 우수한 효소로 판단되며 o-nitrophenyl-$\beta$-D-xylopyranoside 기질에 대한 $K_{m}$ 값과 $V_{max}$ 값은 각각 6.43 mM과 $1.45\mu$mole/min 로 계산되었다. 한편, $\beta$-xylosidase B 분자량은 gel 여과법으로는 약 160 kDa, 그리고 SDS-PAGE에 의해서는 약 54 kDa로 측정되어 본 효소는 trimer의 구조를 가지고 있음을 알 수 있었다.

• 한국동물학회지
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• 제33권4호
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• pp.461-467
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• 1990

Acrylamide의 신경독성에 대해 조사하기 위하여 초기 후지마비 증상이 유도된 생쥐의 뇌를 SDS-PAGE와 이차원 전기영동법으로 분석한 결과, SDS-polyacrylamid gel 전기영동에 의해 처리군, 대조군 및 회복군을 비교하여 보았을때 두드러진 양상의 차이를 나타내지 않았으나 이차원 전기영동상에서 실험군간의 다소 상이한 단백질 양상이 관찰되었다. 특히, 처리군에서 spot 20(14,500, 5.64),21(19,900, 6.78)및 수개의 단백질이 소실되었으며 spot 9(31,300, 5.82),11(31,300, 5.36) 및 19(16,400, 5.42)들은 비교적 많이 감소되었다. 처리군에서 양적변화를 보인 이들 spot중에서 spot 20 (14,500, 5.64)는 회복군에서 대조군 보다 현저히 증가하였으나 spot 11(31,300, 5.36),19(16,400, 5.42) 및 다수의 spot들은 회복군에서 대조군과 대등한 양상을 보여주었다. 위와같은 실험결과는 acrylamide가 초기적 말초신경 장애를 나타내는 시기에 이미 뇌의 단백질대사에 관여함으로써 단백질합성이 저해되고, 이로 인하여 뇌의 조절능력이 부진하게 되어 결과적으로 중추신경계의 이상이 일어나게 된다는 것을 시사한다. 또한 손사에 대한 회복은투여된 농도 및 기간에 의존하여 acrylamide에 대한 노출이 중지된 후 점진적인 자구적 복구에 의해 이루어지는 것으로 사료된다.

• 한국식품과학회지
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• 제18권2호
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• pp.163-167
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• 1986

녹두의 발아중 수분 함량의 변화, 총 단백질과 가용성 단백질 함량의 변화, 그리고 전기영동에 의한 가용성 단백질의 변화 패턴을 조사하였다. 건조녹두의 수분함량은 12.7%이고 침지 후에는 60% 였으며 발아함에 따라서 점차 증가하여 90.7%까지 올라갔다. 녹두를 침지하므로써 급격히 총 단백질 함량과 가용성 단백질 함량이 감소하였고 발아 일수가 경과함에 따라서 점진적인 감소를 보였으며, 총 단백질과 가용성 단백질은 비슷한 감소 패턴을 보였다. 녹두의 가용성 단백질을 SDS로 처리하지 않고 전기영동 하였을때 2개의 넓은 band와 3개의 즘은 band를 얻을 수 있었고, 발아함에 따라서 2개의 넓은 band는 점차 희미해져 단백질이 분해되고 있음을 알 수 있었다. 그러나 다른 band의 단백질들은 비교적 분해되지 않고 남아 있었다. 녹두의 가용성 단백질을 SDS-PAGE로 관찰 하였을때 19개의 분명한 band를 얻을 수 있었고 발아함에 따라서 대부분의 단백질 band는 분해되어 희미해져 갔으나 상당한 부분이 발아 7일째까지 분해되지 않고 남아 있음을 알 수 있었다.

• 한국양식학회지
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• 제15권1호
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• pp.31-37
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• 2002

이 연구는 무지개송어, O. mykiss 간세포 배양을 이용해 합성화학물질인 2,4-Dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D)가 vitellogenin (VTG) 합성과 estrogen (E$_2$) - estrogen receptor (ER) binding affinity에 미치는 영향을 조사하였다. 간세포는 2일간 전 배양한 후에 E, (2$\times$10$\^$-6/ M) 또는 2,4-D (10$\^$-9/∼10$\^$-6/ M)를 배지에 첨가해 5일간 배양한 후, VTG과 E$_2$-ER binding affinity를 SDS-PAGE와 ELISA를 이용해 각각 조사하였다. 사용된 2,4-D의 농도는 세포의 형태, 생존력 및 DNA 함량에는 영향을 미치지 않았다. 또한, 2,4-D는 VTG의 합성에도 어떠한 영향도 미치지 않았으나 E$_2$-ER binding affinity를 억제하였다. 이 binding affinity는 2,4-D의 농도가 증가할수록 증가하는 경향을 나타내어 10$\^$-7/과 10$\^$-6/ M에서 25%와 30%를 각각 억제하였다. 이 결과들은 비록 2,4-D가 VTG의 합성에는 영향을 미치지 않지만, ER에서 xeno-estrogenic contaminant로서 행동하는 것을 제시하였다.

• Journal of Plant Biology
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• 제39권4호
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• pp.301-307
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• 1996

The disassembly of Chl-protein complexes during dark-induced senescence (DIS) was investigated using detached third and fourthleaves of 21$\pm$1 day-old Arabidopsis thaliana. Although Chl content decreased linearly after 1 d, a significant decrease of photochemical effeciency (Fv/Fm) was observed after 2 d. In experiments using native green gel electrophoresis of Chl-protein complexes combined with additional two-dimensional SDS-PAGE analysis, we could observe the degradation of both photosystems after 2 d. Although light-harvesting complex(LHC) for PSI (LHCI) was degraded first in PSI complex, small PSII apoproteins including CP47/CP43 and D1/D2 apoproteins were degraded first in PSII complexes. LHC for PSII (LHCII) trimers were stable until 4 d. The level of LHCII monomers was increased until 3 and decreased thereafter, resulting in the increase of free pigments. These results suggest that the disassembly process of PSI is different from that of PSII.

• 약학회지
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• 제38권6호
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• pp.687-695
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• 1994

Lectin from mistletoe(Viscum coloratum) fermented by Lactobacillus plantarum for 1,2,3 days were obtained by salt fractionation, gel filtration, anion exchange chromatography and SDS-PAGE, and compared with the lectin from unfermented mistletoe. The new lectin of molecular weight of about 18,500D from fermented mistletoe was identified.