• 제목/요약/키워드: 2D gel electrophoresis

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Cloning of $\beta$-glucosidase gene from Cellulomonas sp. into E.coli

  • 김하근;김훈;박무영
    • 한국미생물생명공학회:학술대회논문집
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    • 한국미생물생명공학회 1986년도 추계학술대회
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    • pp.525.1-525
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    • 1986
  • To clone ${\beta}$-glucosidase gene from Cellulomonas sp. a gene library was constructed using E. coli JM83 pUC9. Among 2,500 pseudotransformants obtained, 20 clones developed yellow color on the p-nitrophenyl- -D-glucopyranoside filter paper These 20 clones were classified into three groups based on the results of activity staining using nondenaturating polyacrylamide gel electrophoresis and restriction enzyme digestions. Among the three groups, only one group containing pCEl plasmid has specificity for cellobiose.

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Analysis of Gene Expression in Cloned Bovine Placentae

  • Kim, Hong-Rae;Kang, Jae-Ku;Yoon, Jong-Taek;Seong, Hwan-Hoo;Jo, Min-Rae;Park, Chang-Sik;Jin, Dong-Il
    • 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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    • 한국수정란이식학회 2004년도 제4회 발생공학 국제심포지움 및 학술대회
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    • pp.62-62
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    • 2004
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한국인 우식아동으로부터 분리한 Streptococcus mutans의 내산성 단백질의 발현 (Acid Stress-Induced Proteins of the Streptococcus mutans Isolated from Korean Children with Caries)

  • 강경희
    • 한국산학기술학회:학술대회논문집
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    • 한국산학기술학회 2009년도 춘계학술발표논문집
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    • pp.3-4
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    • 2009
  • 한국인 아동의 우식치아로부터 S. mutans를 분리하고, acid stress하에서 분리한 S. mutans의 내산성 능력과 관련된 단백질을 규명하고자 하였다. S. mutans의 16S rDNA 유전자 핵산염기서열을 바탕으로 설계된 프라이머 쌍을 이용하여 중합효소연쇄반응을 실시하고 16S rDNA sequencing을 실시한 결과, 한국인 아동으로부터 분리 된 S. mutans K7은 기존에 보고된 표준균주와 99.9% 일치하는 결과를 나타내 S. mutans로 판명되었다. 또한 2D gel electrophoresis 를 수행한 결과, acid stress에 관여하는 것으로 추정되는 단백질들을 확인 할 수 있었다.

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Streptomyces violaceoruber 유래 Alginate Lyase의 정제 및 Sodium Alginate 가수분해 올리고당의 중합도별 Bifidobacterium spp.과 Lactobacillus spp.에 대한 생육활성 (Purification of Alginate Lyase from Streptomyces violaceoruber and the Growth Activity of Intestinal Bacteria by Degree of Polymerization of Alginate Hydrolysates)

  • 윤민;박영서;박귀근
    • 산업식품공학
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    • 제21권2호
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    • pp.103-109
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    • 2017
  • DEAE sephacel anion chromatography 및 SP sepharose cation chromatography에 의해 Streptomyces violaceoruber 유래 alginate lyase의 정제를 수행하여 비활성 14.59 units/mL 정제배율 40.64배를 나타내었다. Tricine SDS-PAGE에 의한 단일밴드를 확인하였고, 분자량은 23.3 kDa으로 결정되었다. 정제효소에 의해 sodium alginate를 가수분해하여 1차 activated carbon column chromatography와 2차 bio gel P-2 gel filtration에 의해 당가수분해물을 분리 회수하여 TLC와 FACE를 통해 중합도를 확인하고 Timell's method에 의해 hetero type M/G-oligosaccharide 중합도 6, 8로 결정되었다. B. animalis, B. bifidum, B. breve, B. infantis, B. longum와 L. acidophilus, L. casei, L. reuteri에 생육활성에 대한 중합도 6, 8의 영향을 검토하기 위하여 modified-MRS media에 탄소원으로 중합도 6, 8를 대체하여 생육활성을 비교한 결과 B. longum에서는 D.P. 6 M/G-oligosaccharide를 탄소원으로 대체한 경우 표준 MRS배지와 비교하여 4.25배, D.P. 8에서 6.44배의 상대활성을 나타내어 가장 우수한 생육활성을 나타내었으며, B. bifidum의 경우에서도 D.P. 6에서 3.27배, D.P. 8에서 5.4배의 상대활성을 나타내었다. 이외에도 B. animalis, B. breve그리고 L. casei에 있어서도 D.P. 8의 경우 3배의 상대활성을 나타내었으나, L. reuteri에 대한 D.P. 8의 경우에서는 표준 MRS media와 비교하여 0.29배로 감소하였다. 결과적으로 D.P. 8의 올리고당이 D.P. 6의 올리고당보다 생육활성에 크게 기여하는 것으로 나타났다.

Denaturing gradient gel electrophoresis와 real time PCR 방법을 이용한 연어 유전자들의 DNA 이형 다양성 검색 (DNA Heteropolymorphism of Chum Salmon Detected by Denaturing Gradient Gel Electrophoresis and Real Time PCR)

  • 함승협;이석근;한현섭;진덕희
    • 한국수산과학회지
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    • 제35권5호
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    • pp.490-496
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    • 2002
  • 한국, 미국, 일본지역에 서식하는 연어에서 추출한 genomic DNA를 이용하여 연어의 mtDNA NDI 영역, D-loop 영역, growth hormone, IGF-I, MCH2, histone H3의 염기서열을 분석하여, 최적의 primer를 제작하여 PCR을 실시한 결과, mtDNA NDI 영역은 Ks12, Ks24, As11, As14, Js13, Js15에서 증폭된 DNA를 확인하였으며, D-loop 영역, growth hormone, IGF-I, histone H3, MCH2에서는 모든 시료에서 증폭된 DNA를 확인하였다. DGGE 분석의 결과, mtDNA NDI 영역 (AF133701, 449-880), D-loop 영역 (AF125518, 11-514)과 growth hormone (AFO05927, 181-530)에서는 이형다양성을 확인하였으며, IGF-I (AF063216, 962-1461)과 MCH2 (M27281, 70-593)는 모두 이형다양성이 나타났으나, histone H3 (AF017147, 7-487)는 모두 이형다양성이 관찰되지 않았다. 그리고 real time PCR 관찰 결과는 DGGE의 결과와 유사한 점을 찾을 수 없었지만, real time PCR도 각각의 유전자에 따라 서로 다른 DNA 생성 패턴을 보여 DNA 변이를 쉽게 구별하는데 보조적인 도움이 되었다.

Streptomyces coelicolor 의 Catalase 들의 분석

  • 김형표;이종수;하영칠;노정혜
    • 미생물학회지
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    • 제30권4호
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    • pp.291-298
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    • 1992
  • 비변성 폴리아크릴 아미드 겔에서 Streptomyces coelicolor 의 catalase 활성 염색을 실시하여 여러개의 catalase 활성 띠를 관찰하였으며, 그 유형이 성장기에 따라 달라짐을 알았다. 포자와 정체 성장기에는 정체 성장기에만 특이적인Cat1(760kD) 이 관찰되었고, Cat2(300kD) 를 제외한 모든 활성 띠들이 나타났다. 중기 대수 성장기에는 Cat2 와 Cat 3-2, Cat3-2(140kD) 등 2개의 catalase 띠가 나타나며, 후기 대수 성장기에는 Cat3-1(170 kD), Cat3-2, Cat3-3(130kD). Cat4(70kD)등의 활성 띠가 나타났다. NTG 처리로 돌연변이화된 S. coelicolor 의 포자를 Bennet 평판 배지네서 배양한 후 과산화수소 거품 test 를 실시하여, 약 5000 여개의 콜로니 중 거품형성 속도나 양이 감소한 콜로니를 12개 얻었다. 야생형에 견주어 대부분 catalase 활성이 감소하였으며, 대수 성장기와 정체 성장기에서 모두 감소하였다. 거품형헝을 하지 않는 모든 돌연변이에서 Cat3-2 띠의 강도라 현저히 약해저 있음으로 보아 Cat3-2가 주된 catalase 인 것으로 추정된다. 대수 성장기에서 수확한 S. coelicolor 세포 추출액에서 Sepharose CL-4B, DEAE Sepharose CL-6B, Phenyl Sepharose CL-4B, Hydroxylapatite 크로마토그래피등 4단계의 크로마토그래피를 수행하여 Cat3-2 를 정제하였다. 비변성 폴리아크릴마드 겔 전기 영동을 수행한 결과 Cat3-2 는 67 kD 의 동일한 subunit 을 2개 가지고 있는 효소로 추정된다.

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Effect of Organic Zinc on the Skin Characteristics of Broilers and the Expression Level of Skin Proteins

  • Kim, Ju-Youn;Kim, Hyun-Jin;Salim, Hossan Md;Lee, Bong-Duk;Chae, Hyun-Seok;Song, Kyung-Bin
    • Preventive Nutrition and Food Science
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    • 제15권2호
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    • pp.143-146
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    • 2010
  • Organic zinc was included in the diet of broiler chickens to examine its effect on the skin characteristics and the expression level of skin proteins. Broiler chicks (Ross$\times$Ross) were fed a corn-wheat-soybean meal basal diet, either as control or containing an additional 80 ppm of zinc proteinate for 4 weeks, and then five broilers from each treatment were selected randomly, slaughtered, and their skin characteristics were examined. There were significant increases (p<0.05) in thigh skin epidermis and dermis thickness in the chicks fed organic zinc. Collagen content in the skin of broilers was also increased by the addition of organic zinc to the diet. 2D-gel electrophoresis patterns indicated that expression levels of the three proteins, glyoxylase 1, hypothetical protein, and dispersin B were affected by zinc feeding. These results suggest that adding organic zinc to the chicken's feed may contribute to decreased skin tearing.

Protein Expression of Mouse Uterus in Post-Implantation

  • Kim, Hong-Rye;Han, Rong-Xun;Kim, Myung-Youn;Diao, Yunfei;Park, Chang-Sik;Jin, Dong-Il
    • Reproductive and Developmental Biology
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    • 제33권4호
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    • pp.237-242
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    • 2009
  • Pregnancy is a unique event in which a fetus develops in the uterus despite being genetically and immunologically different from the mother, and the underlying mechanisms remain poorly understood. To analyze the differential gene expression profiles in nonpregnant and 7 days post coitus (dpc) pregnant uterus of mice, we performed a global proteomic study by 2-D gel electrophoresis (2-DE) and MALDI-TOF-MS. The uterine proteins were separated using 2-DE, Approximately 1,000 spots were detected on staining with Coomassie brilliant blue. An image analysis using Melanie III (Swiss Institute for Bioinformatics) was performed to detect variations in protein spots between pregnant and nonpregnant uterus. Twenty-one spots were identified as differentially expressed proteins, of which 10 were up-regulated proteins such as alpha-fetoprotein, chloride intracellular channel 1, transgelin, heat-shock protein beta-1, and carbonic anhydrase II, while 11 were down-regulated proteins such as X-box binding protein, glutathione S-transferase omega 1, olfactory receptor Olfr204, and metalloproteinase-disintegrin domain containing protein TECADAM. Most of the identified proteins appeared to be related with catabolism, cell growth, metabolism, regulation, cell protection, protein repair, or protection. Our results uncovered key proteins of mouse uterus involved in pregnancy.

Elctrophoretic Properties of Heat-Induced Bovine α-Lactalbumin

  • Lee, You-Ra;Hong, Youn-Ho
    • Preventive Nutrition and Food Science
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    • 제7권1호
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    • pp.48-51
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    • 2002
  • In order to study the reaction behavior of bovine holo- and apo-$\alpha$-lactalbumin ($\alpha$-La) during heat treatment at 65~10$0^{\circ}C$, the samples were analysed by first (ID)-and second-dimensional (2D) native-polyacrylamide gel electrophoresis (Native-PAGE) and sodium dodecylsulfate (SDS)-PAGE. When bolo-$\alpha$-La or apo- $\alpha$ -La were heated, they formed non-native, monomers, dimers and trimers. The apo-$\alpha$-La was more heat-sensitive than holo-$\alpha$-La. The monomers seemed to have the same composition as the native $\alpha$-La, but many of the disulfide bonds could be non-native.

육우의 혈액단백질 및 효소의 유전적 변이체 (Genetic Variants of the Blood Proteins and Enzymes in Beef Cattle)

  • 상병찬;류승희;상병돈
    • 농업과학연구
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    • 제22권1호
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    • pp.69-81
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    • 1995
  • 본 연구는 축산기술연구소 대관령지원에서 사육하고 있는 Hereford, Angus 및 Charolais 육우품종에서 혈액을 채취하여 이들의 혈액내에 존재하는 transferrin(Tf), post-transferrin-2(pTf-2), albumin(Alb), post-albumin(pAlb), ceruloplasrmin(Cp), amylase-I(Am-I) 및 hemoglobin(Hb)의 혈액단백질 및 효소좌위의 유전적다형을 분석하여 이들 집단의 유전적 변이체를 조사하고자 PAGE(polyacrylamide gel electrophoresis)와 STAGE(starch gel electrophoresis)방법으로 분석하였던바 그 결과는 다음과 같다. 1. Tf좌위는 A, $D_1$, $D_2$ 및 E와 pTf-2좌위는 F와 S의 공우성 대립유전자의 지배를 받는 것으로 생각되며, 유전자형의 빈도에 있어서는 Hereford 종에서는 Tf $D_1D_2$와 pTf-2 SS 형이 각각 25 및 90%이었고, Angus종에서는 Tf $AD_1$와 pTf-2 FF형이 각각 25와 100%이었으며, Sharolais종에서는 Tf $D_1D_1$와 pTf-2 FS형이 각각 50%로 높은 빈도를 보였다. 유전자빈도에 있어서는 Hereford종에서 Tf E와 pTf-2 S 빈도가 각각 0.400과 0.900이었고, Sharolais종에서는 Tf $D_1$과 pTf-2 S가 각각 0.678 및 0.607로 높은 빈도를 보였다. 2. Alb좌위는 A, 그리고 pAlb좌위는 F와 S의 대립유전자의 지배를 받는것으로 사료되며, 유전자형 빈도에 있어서는 Hereford, Angus와 Sharolais종에서 각각 pAlb SS, FF 및 SS가 각각 70, 90 및 57.15%로 높은 빈도를 나타냈으며, pAlb의 유전자 빈도에 있어서는 Hereford와 Sharolais종에서 pAlb S가 각각 0.825와 0.750이었고, Angus종에서는 pAlb F가 0.900으로 높은 빈도를 보였다. 3. Cp 좌위는 F 및 S와 Am-I 좌위는 B와 C의 대립유전자의 지배를 받는 것으로 생각되며, 유전자형 빈도에 있어서는 Herford종에서는 Cp FF와 Am-I BB형의 빈도가 각각 100 및 85%이었고, Angus종에서는 Cp FF와 Am-I CC형이 각각 45 및 85%이였으며, Sharolais종에서는 Cp FF와 Am-I BC형이 각각 50 및 64.29%로 높은 빈도를 보였다. 유전자 빈도에서 있어서는 Herford, Angus와 Sharolais 종에서 Cp F가 각각 0.800, .875 및 0.680이었고 Hereford종에서 Am-I A가 0.800이었으며, Angus와 Sharolais종에서 Am-I C가 각각 0.875 및 0.680이었다. 4. Hb좌위 는 Hereford종과 Angus종에서는 Hb A, Sharol ais종에서는 Hb A와 B의 대립유선자가 검출 되었으며, Sharolais종에서 유전자형 빈도는 Hb AA 및 AB가 각각 57.14 및 42.88%이었고, 유전자빈도에 있아서는 Hb A와 B가 각각 0.785 및 0.215이었다.

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