본 연구는 $\alpha$-glucosidase의 강력한 효소저해제인 1-deoxynojirimycin(DNJ)을 고효율로 생산하는 균주의 선발 및 동정, 배양최적화 및 균 배양액의 혈당강하효과 등에 관하여 조사하였다. 먼저 토양으로부터 $\alpha$-glucosidase에 대해 강력한 저해능을 나타내는 9균주를 대상으로 이 중에서 DNJ 생산성이 가장 우수한 한 개 균주를 최종 선발하였고, 이 균주를 16S rDNA 염기서열분석으로 균주동정을 하여 Bacillus subtilis S10이라 명명하였다. 본 균주의 배양액을 이온교환수지법(Amberlyst 15 $H^+$ form, Dowex $1{\times}2$-100 $OH^-$ form, Amberlite CG-50 $NH_3^+$ form)에 의해 DNJ를 정제하고, 정제된 DNJ를 LC-MS로 분석한 결과 표준 DNJ와 동일한 물질임을 확인하였다. DNJ 대량생산을 위한 S10균주의 배양 최적탄소원 및 최적질소원과 이들의 최적농도를 조사한 결과 각각 1% galactose, 1.6% polypeptone임이 밝혀졌으며, 확립된 최적화 조건에서의 DNJ 생산량은 0.75 g/L이었다. 고혈당 유도 마우스를 대상으로 각종 혈당강하제의 효과를 알아보기 위해 혈당치를 비교한 결과 무처리구의 혈당치 $510{\pm}10.9\;mg/dL$에 비해 acarbose 처리구는 $139.4{\pm}33.1\;mg/dL$, 누에분말 처리구는 $209.1{\pm}19.6\;mg/dL$, 그리고 S10 균주 배양액 처리구는 $208.6{\pm}39.8\;mg/dL$로써 무처리구에 비해 각각 72.7%, 59.0%, 그리고 59.1%의 혈당 억제율을 나타냈다. 이상의 연구결과 S10균주 배양액은 누에분말과 같은 수준의 고혈당 억제 및 완화효과가 있음이 확인되었으며 향후 S10균주의 대량생산을 통해 식후혈당조절을 위한 건 강기능식품 개발이 기대된다 하겠다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제21권2호
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pp.163-167
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2010
[ $\alpha$ ]Glucosidase (EC 3.2.1.20) is a glycosidase that hydrolyzes disaccharides, oligosaccharides, and polysaccharides resulting in the release of α-D-glucose. In this study, $\alpha$-glucosidase activity in the hemolymph and midgut of the mulberry silkworm Bombyx mori and Japanese oak silkmoth Antheraea yamamai was measured using maltose, sucrose, trehalose, and p-nitrophenyl $\alpha$-D-glucopyranoside as substrates. In general, hemolymph $\alpha$-glucosidase activity was higher in B. mori than in A. yamamai. In contrast, midgut $\alpha$-glucosidase activity was higher in A. yamamai than in B. mori for all of the substrates tested. $\alpha$-Glucosidase activity in the midgut of both B. mori and A. yamamai showed similar responses to changes in pH and temperature for all of the substrates tested. Native (7.5%) PAGE of hemolymph and midgut proteins from B. mori and A. yamamai followed by staining with 4-methylumbelliferyl $\alpha$-D-glucoside (MUG) indicated that the $\alpha$-glucosidases of these related lepidopterans are functionally similar but structurally different. In comparison to $\alpha$-glucosidase activity from A. yamamai, $\alpha$-glucosidase activity from B. mori was generally less sensitive to the $\alpha$-glucosidase inhibitors, 1-deoxynojirimycin (DNJ), acarbose, and voglibose when the activity was determined using maltose, sucrose, and trehalose.
Kim, Hyun-Su;Ko, Hyun-Jung;Cho, Yong-Seak;Lee, Jae-Yeon;Hwang, Kyo-Yeol;Kim, Jin-Won;Lee, Heui-Sam;Kim, Iksoo;Ryu, Kang-Sun
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제7권2호
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pp.161-164
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2003
Several polyhydroxylated alkaloids were isolated from the extracts of freeze-dried silkworm powder, and purified by ion exchange chromatographic analysis. Through the HPLC analysis, we could identify 1-deoxynojirimycin (DNJ) and a kind of calystegin $B_2$ (HS-58) as well as a noble compound (HS-74) from the purified polyhydroxylated alkaloids. In order to know the characteristics of these isolated alkaloids as enzyme inhibitors, glycosidase inhibition activities of these identified alkaloids including other two non-purified alkaloids (SWP 3-1 and SWP 3-2) were investigated.
This study was carried out to investigate solid-state fermentation method using cellulolytic lactic acid bacteria Lactobacillus plantarum TO-2100 in order to increase piperidine alkaloid contents in mulberry leaves. Piperidine alkaloid, one type of which include 1-deoxynojirimycin (1-DNJ), is known to inhibit ${\alpha}$-glycosidase activities. Using this strain, the optimal solid-state fermentation conditions on mulberry leaves powder were found as the following: initial moisture content, temperature and relative humidity were 20%, $30{\sim}35^{\circ}C$ and 60 ~ 70%, respectively, and the fermentation time was 72 hrs. The piperidine alkaloid contents in the fermented mulberry leaves were 2.86% on dry powder, which is 7-fold increase from that of non-fermented mulberry leaves. The 1-deoxynojirimycin contents after applying preparative thin layer chromatography were 2.02% on dry powder, which is 8 times higher than that of non-fermented mulberry leaves. ${\alpha}$-Glycosidase activities was inhibited by 65.7 ~ 84.7% with 3 ~ 5% treatments of hot-water extracts of the fermented mulberry leaves, compared to 16.2 ~ 40.2% with 3 ~ 5% treatments of hot-water extracts of non-fermented mulberry leaves. Therefore, the results suggest that solid-state fermentation method does indeed increase of piperidine alkaloid contents on mulberry leaves.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제7권2호
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pp.139-144
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2003
Over 350 million people worldwide are chronic carriers of hepatitis B virus (HBV). Chronic viral infections of the liver can progress to cirrhosis, which may ultimately lead to hepatic failure or the development of hepatocellular carcinoma. There are two antiviral drugs on the market approved for clinical management of chronic HBV infections; interferon-alpha and the nucleoside analog lamivudine. However, they showed adverse side-effects. In the rational drug design for such therapies we would like to utilize antiviral drugs that inhibit the HBV replication in the liver. Investigation of natural extracts of silkworm exhibiting antiviral potential was held in the functional HBV polymerase activity and the release of virion particle in the HepG2.2.15 cell lines. HBV-producing transgenic mouse fed with silkworm DNJ molecule was shown as an inhibitor of serum HBV particles. We could represent this DNJ molecule as an antiviral potential complementing conventional therapies after preclinical tests against WHBV-infected animal model, woodchuck.
본 연구에서는 발효식품으로부터 항당뇨 효능을 지닌 유산균을 분리하여 뽕잎 추출물을 발효하고, 제조된 유산균 발효 뽕잎 추출물의 항당뇨 효능을 평가하였다. 갓김치에서 분리된 Lactobacillus plantarum SG-053은 α-glucosidase 저해 활성이 96.8%로 가장 우수하고, 뽕잎을 발효하여 뽕잎에 존재하는 항당뇨 지표물질인 1-deoxynojirimycin (DNJ)의 함량을 2.2배 증가시키며 우수한 생육 활성을 나타내어 본 연구에서 뽕잎 추출액의 발효에 사용하였다. L. plantarum SG-053으로 발효한 뽕잎 추출물은 L6 근관세포에 대한 세포독성은 없었고, IRS-1, PI3K p85α, GLUT-4 유전자 발현을 각각 1.4, 2.2, 1.4배로 증가시켰으며, 세포의 2-deoxyglucose 흡수를 1 μM의 인슐린보다 높은 수준인 40.7% 증가시켜 인슐린 신호전달 경로를 활성화시킴으로써 세포의 인슐린 저항성을 개선하는 것으로 확인되었다. 경구 당 부하 검사를 통해 유산균 발효 뽕잎 추출물이 포도당 섭취에 의해 증가한 혈당을 빠르게 감소시키고, α-glucosidase의 저해를 통해 maltose의 분해에 의한 혈당 증가를 억제하였다. 유산균 발효 뽕잎 추출물은 SD rat의 허벅지 골격근 조직의 PI3K p85α와 GLUT-4 유전자 발현을 각각 6.4, 2.1배 증가시켜 L6 근관세포에서와 유사한 결과를 나타냈으며, in vivo 근육 조직에서도 인슐린 신호전달경로의 활성화에 영향을 준다는 것을 확인하였다. 본 연구 결과로 L. plantarum SG-053이 뽕잎을 효과적으로 발효하여 DNJ의 함량을 증진시킨다는 것을 확인하였으며, L. plantarum SG-053으로 발효한 뽕잎 추출물은 우수한 항당뇨 효능을 지니는 것을 세포 및 동물실험 수준에서 확인하였다.
BACKGROUND/OBJECTIVES: Mulberry leaf (ML) has been shown to have an inhibitory effect on ${\alpha}$-glucosidase, and suppresses postprandial hyperglycemia, which may be related to its deoxynojirimycin (DNJ) content. This study was conducted to investigate the hypoglycemic and dyslipidemic effects of rice coated with ML rich in DNJ in a type 2 diabetes mouse model. MATERIALS/METHODS: The mice were divided into four groups (n = 8 each): non-diabetic normal control (NC); diabetic control (DM-C), fed with 10% polished rice powder (DM-R); and fed with 10% polished rice powder coated with DNJ-rich ML (DM-DNJR). RESULTS: Supplementation with DNJR for six weeks decreased levels of fasting blood glucose, plasma insulin, triglyceride, total cholesterol, and blood glycosylated hemoglobin; conversely, levels of glucagon-like peptide-1 and high-density lipoprotein-cholesterol showed an increase in the same treatment. In addition, weights of mesenteric, epididymal, and total adipose tissues decreased with DNJR supplementation, when compared with diabetic control db/db mice, while maltase, lactase, and sucrase activity in the small intestine were inhibited. The anti-diabetic effects were marginally greater in the DM-DNJR group than in the DM-R group. CONCLUSIONS: These results suggest that rice coated with ML rich in DNJ can reduce hyperglycemia and hyperlipidemia in db/db mice, and may prove useful for individuals with diabetes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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