황련해독탕(HHT)은 기력을 회복하며 여러 만성질환을 예방하고 치료하기 위해 예로부터 사용되어온 약재로, 본 연구는 인삼에서 분리한 유산균 Leuconostoc mesenteroides (L. mesenteroides)을 이용해 황련해독탕 발효물(FHHT)을 제조하고 항산화, 항주름 및 미백 효과를 조사하였다. 황련해독탕 발효물은 황련해독탕을 70% 에탄올로 추출한 후에 L. mesenteroides를 접종하여 발효 제조하였다. 발효 전 황련해독탕과 황련해독탕 발효물에서 2가지 지표 성분 berberine과 palmatine을 high-performance liquid chromatography (HPLC)을 이용하여 retention times ($t_R$)과 UV spectra를 확인함으로써 정성 및 정량 분석하였다. 세포 생존율 실험 결과, 발효 전후 황련해독탕 모두 독성이 확인되지 않았고 DPPH 라디칼 소거능 실험은 발효물의 $SC_{50}$ 값이 $68.85{\mu}g/mL$로 발효 전보다 우수한 효능을 나타내었다. Procollagen type I의 생성량 측정 실험에서도 역시 황련해독탕 발효물은 발효 전보다 더 높은 발현량을 나타내었으며, 세포 독성을 나타내지 않는 농도에서 흑색종 세포인 B16F10을 이용한 멜라닌 생성 억제 활성 실험 결과, 황련해독탕 발효물은 강한 멜라닌 생성 억제 효과를 나타내었다($IC_{50}=9.82{\mu}g/mL$). 이상의 결과들로부터 황련해독탕 발효물이 항산화 효능, 항주름 효능뿐만 아니라 미백 효능을 갖는 화장품 원료로서 개발 가능성이 있음이 시사되었다.
Background: To perform the successful dendritic cell-based cancer immunotherapy one of the main issues to be solved is the source of antigen for DC pulsing. Limitations occur by using auto-tumor lysate due to the difficulties obtaining enough tumor tissue(s) quantitatively as well as qualitatively. In this study the possibility of allogeneic tumor cell lysate as a DC pulsing antigen has been tested in mouse melanoma pulmonary me tastasis model. Methods: B16F10 melanoma cells $(1{\timeS}10^5/mouse)$ were inoculated intra venously into the C57BL/6 mouse. Therapeutic DCs were cultured from the bone marrow myeloid lineage cells with GM-CSF and IL-4 (1,000 U/ml each) for 7 days and pulsed with lysate of either autologous B16F10 (B-DC), allogeneic K1735 (C3H/He origin; K-DC) or CloneM3 (DBA2 origin; C-DC) melanoma cells for 18 hrs. Pulsed-DCs $(1{\times}10^6/mouse)_{[CGP1]}$ were injected i.p. twice with one week interval starting from the day 1 after tumor cell inoculation. Results: Without observable toxicity, allogeneic tumor cell lysate pulsed-DC induced the significantly better anti-tumor response (tumor scale: $2.7{\pm}0.3,\;0.7{\pm}0.3\;and\;0.3{\pm}0.2$ for saline, B-DC and C-DC treated group, respectively). Along with increased tumor specific lymphocyte proliferations, induction of IFN-${\gamma}$ secretion against both auto- and allo-tumor cell lysates was observed from the DC treated mice. (w/B16F10-lysate: $44.97{\pm}10.31,\;1787.94{\pm}131.18,\;1257.15{\pm}48.27$, w/CloneM3 lysate: 0, $1591.13{\pm}1.83,\;1460.47{\pm}86.05pg/ml$ for saline, B-DC and C-DC treated group, respectively) Natural killer cell activity was also increased in the mice treated with tumor cell lysate pulsed-DC ($8.9{\pm}_{[CGP2]}0.1,\;11.6{\pm}0.8\;and\;12.6{\pm}0.7%$ specific NK activity for saline, B-DC and C-DC treated group, respectively). Conclusion: Conclusively, promising data were obtained that allogeneic-tumor cell lysate can be used as a tumor antigen for DC-based cancer immunotherapy.
Purpose ; In order to study the effect of Houttuyniae herbal acupuncture on growth of melanoma B 16 and immunity in mice, the Control group with normal saline acupunchure after subcutaneous inoculation of B16BL6 cells, the Sample I with Houttuyniae herbal acupuncture manufactured by distilled water extraction method after subcutaneous inoculation of B16BL6 cells and the Sample II with Houttuyniae herbal acupuncture manufactured by alcohol extraction method after subcutaneous inoculation of B16BL6 cells were divided. Methods ; To evauluate the effect of Houttuynias herbal acupuncture on growth of melanoma B16 in mice, the weight of mouse melanoma, body weight, spleen index( $\sqrt(Weight of spleen/Body weight){\times}100$), lymphocytes numbers in mouse peripheral blood and spleen tissue, the percentage of CD4+ T cells, CD8+ and the ratio of CD4+/CD8+ in mouse peripheral blood and spleen tissue are measured. Results ; In study of the weight of mouse melanoma, Houttuyniae herbal acupuncture groups(Sample I, Sample II) showed statistically significant inhibitory effect. And in study of effect of reduction of change in body weight of mouse, Sample I showed statistically significant inhibitory effect, too. In study of reduction of spleen index, lymphocytes numbers in mouse spleen tissue, and the percentage of CD4+ and the ratio of CD4+/CD8+ T cells in mouse peripheral blood, Houttuyniae herbal acupuncture groups(Sample I, Sample II ) showed with statistically significant inhibitory effect. Also, Sample I showed inhibitory effect of reduction of the percentage of CD8+ T cells in mouse peripheral blood and spleen tissue and Sample II showed inhibitory effect of reduction of the percentage of CD4+ and the ratio of CD4+/CD8+ T cells in mouse spleen tissue with statistical significance. Conclusions ; The inhibitory effect of reduction of lymphocytes numbers in mouse peripheral blood and IL-2 productivity, Houttuyniae herbal acupuncture groups(Sample I, Sample II) didn't show significant effect.
한국고유종이자 멸종위기종인 묵납자루, Acheilognathus signifer의 종보존을 위한 인공발생 및 사육이 진행되는 동안 눈과 피부 전반에 걸쳐 색소의 발현이 결핍된 oculocutaneous albinism 개체가 출현하였다. 정상과 알비노간의 형태적 차이 여부를 알아보기 위해 등 피부와 안구의 맥락막-망막 조직을 적출하여 조직학적 분석을 실시하였다. 그 결과 일반적인 형태는 서로 차이가 없었으나 멜라닌색소의 발현에서 현저한 차이를 보였다. 정상 묵납자루는 등 피부의 표피와 진피, 맥락막-망막색소상피층 및 홍채에 많은 수의 멜라닌세포와 흑색소포가 존재한 반면, 알비노의 등 피부에서는 색소가 거의 존재하지 않았고 맥락막-망막색소상피층과 홍채에서는 매우 제한된 분포를 보였다.
Background: Dendritic cell (DC)-based cancer immunotherapy is studied for several years. However, it is mainly derived from autologous PBMC or leukapheresis from patient, which has limitations about yield and ability of DC production according to individual status. In order to solve these problems, inquiries about allogeneic DCs are performed but there are no preclinical trial answers for effect or toxicity of allogeneic DC to use for clinical trial. In this study, we compared the anti-tumor effect of allogeneic and autologous DCs from mouse bone marrow stem cells in mouse metastatic melanoma model. Methods: B16F10 melanoma cells ($5{\times}10^4$/mouse) were injected intravenously into the C57BL/6 mouse. Therapeutic DCs were differentiated from autologous (C57BL/6: CDC) or allogeneic (B6C3F1: BDC) bone marrow stem cells with GM-CSF, SCF and IL-4 for 13days and pulsed with B16F10 tumor cell lysate (Blys) for 18hrs. DC intra-peritoneal injections began on the 8th day after the tumor cell injection by twice with one week interval. Results: Anti-tumor response was observed by DC treatment without any toxicity especially in allogeneic DC treated mice (tumor burden score: $2.667{\pm}0.184,\;2.500{\pm}0.463,\;2.000{\pm}0.286,\;1.500{\pm}0.286,\;1.667 {\pm}0.297$ for saline, CDC/unpulsed-DC: U-DC, CDC/Blys-DC, BDC/U-DC and BDC/Blys-DC, respectively). IFN-${\gamma}$ secretion was significantly increased in allogeneic DC group stimulated with B16F10 cell lysate ($2,643.3{\pm}5,89.7,\;8,561.5{\pm}2,204.9.\;6,901.2{\pm}141.1pg/1{\times}10^6$ cells for saline, BDC/U-DC and BDC/Blys-DC, respectively) with increased NK cell activity. Conclusion: Conclusively, promising data was obtained that allogeneic DC can be used for DC-based cancer immunotherapy.
Purpose: Malignant melanoma is recognized as the most serious skin cancer. We examined anatomical distribution and 5 - year survival rate of each stage of malignant melanoma on lower leg. Methods: We retrospectively analyzed the medical records of 91 patients(46 males and 45 females) with malignant melanoma on lower leg from 1985 to 2008. Age, sex, anatomical distribution and 5 - year survival rates of each stage of malignant melanoma on lower leg were investigated. Also, 5 - year survival rates of each stage and invasion depth of malignant melanoma on heel pad were investigated. Results: On lower leg, most frequently 32 cases(35.1%) occurred on heel pad, 27 cases(29.7%) occurred on dorsum of foot, 18 cases(19.8%) in toe and 14 cases(15.4%) on others in lower leg. We used the excision margin as 3 ~ 5 cm. After wide excision, in stage III, IV, the patients underwent the immunologic / chemo - therapy. The incidences of each stage were 22 cases(24.2%) in stage I, 47(51.6%) in II, 17(18.7%) in III and 5(5.5%) in IV. The 5 - year survival rates of each stage were 85%, 53.2%, 47.1% and 40%. On heel pad, the incidences of each stage were 5 cases(15.6%) in stage I, 19 cases(59.4%) in II, 7 cases(21.9%) in III and 1 case(3.1%) in IV. The 5 - year survival rates of each stage were 80%, 63.2%, 42.9% and 100%. On heel pad, incidence of local recurrence was 2 and 5 - year survival rate of this case was 100%. And systemic recurrence was 9 and 5 - year survival rate of this case was 55.6%. Conclusion: The 5 - year survival rate of malignant melanoma on heel pad was higher than previous study. To maintain the weight - bearing function of foot, we recommend the active reconstructive surgery for heel pad reconstruction after wide excision of heel pad malignant melanoma.
'헤이-G(Hei-G)'는 2007년 '카메(Kame)'에서 분리한 고정 계통(TKUI-3)을 모본으로 하고, '알리'에서 분리한 고정 계통(AL-1)을 부본으로 인공교배하여 육성된 품종이다. 과실은 둥근 형태로 크기가 균일하며, 검붉은색(흑색)으로 광택을 띤다. 2010년부터 2012년까지 봄 재배에서 특성 검정과 생산력 검정을 거쳐 'JTB026(전남2호)'로 계통명을 부여하였고, '헤이-G'로 명명하였다. '헤이-G'의 초형은 무한형으로 초세가 강하고 성숙과실과 과육은 검붉은색을 띤다. 과실 평균 과중은 43.4g이며, 상품수량은 $4,944kg{\cdot}10a^{-1}$이다. 과실에 함유된 라이코펜 함량은 $11.8mg{\cdot}100g^{-1}$으로 일반토마토(품종: 라피도, 3.1mg)에 비해 많았으며, 흰가루병에 비교적 강하여 친환경재배에 알맞은 품종이다.
울릉도 자생 삼나물(Aruncus dioicus)은 최근 monoterpenoids 생리활성 물질이 밝혀지면서 여러 가지 항산화와 관련된 생리활성이 확인되고 있다. 삼나물 ethyl acetate 분획물에 의한 미백효과를 검증하기 위하여 흑색세포종인 B16F10을 이용하여 실험을 진행하였다. 삼나물 ethyl acetate 분획물(ADE)의 세포독성을 측정하기 위하여 MTT assay를 실시한 결과, ADE $500{\mu}g{\cdot}mL^{-1}$ 이상의 농도에서 미비한 세포독성(10% 이상)을 확인하였으며, 이후 실험에서는 5, 10, $50{\mu}g{\cdot}mL^{-1}$ 농도가 세포 내에서 tyrosinase 활성과 멜라닌 양의 변화를 측정하였다. 그 결과 ADE 농도에 따라 tyrosinase 활성이 감소하고 총 멜라닌 함량이 감소하는 것을 확인하였다. 특히 $50{\mu}g{\cdot}mL^{-1}$에서 35.6% tyrosinase 활성억제, 58.8% 멜라닌 함량이 감소하는 것을 확인하였다. 또한 ADE에 의해 미백과 관련된 tyrosinase, tyrosinase related protein 1(TRP1), TRP2, microphthalmia associated transcription factor(MITF) 및 그 상위 단계인 cAMP와 protein kinase A(PKA)의 단백질 양이 감소하여 cAMP response binding protein(CREB)의 인산화는 감소하고 extracellular signal related kinase(ERK)의 인산화는 증가하는 것을 확인하였다. 본 연구에서는 울릉도 자생 삼나물의 미백효과에 관한 효능을 확인하고 기능성화장품의 소재로서의 활용 가능성이 있음을 확인하였다.
Jaspine B는 석회해면류에서 추출된 sphingosine유도체로 인간 암세포에서의 항암활성이 보고되었다. 그러므로 본 연구는 다양한 인간 암세포주에서 항암활성을 비교하고, 암세포주에서의 Jaspine B의 농도를 측정하여 항암 활성과의 연관성을 확인하고자 하였다. 항암활성은 MTT 방법을 이용하여 측정하였고, $EC_{50}$ 값으로 표현하였다. 암세포주내 Jaspine B의 농도는 LC-MS/MS를 이용하여 분석하였다. 항암활성은 세포주마다 다양하게 나타났는데, 유방암과 흑색종 세포주에서 항암활성이 높게 나타났으며($EC_{50}$ 각각 $2.3{\mu}M$과 $2.6{\mu}M$), 신장암세포주에서는 $EC_{50}$ 값이 $29.4{\mu}M$이었다. 암세포주에서의 $EC_{50}$ 값은 동일한 세포에서의 Jaspine B 농도와 높은 상관성을 나타내었으며(r=0.838), 암세포내 약물농도를 조절하는 것으로 잘 알려진 P-glycoprotein과 breast cancer resistance protein 등의 배출수송계와는 관련이 없음을 확인하였다. 이상의 결과는 세포내 약물농도를 높게 유지하는 것이 항암활성에 매우 중요하며, 세포내 약물농도가 암세포주에 따라 다른 약효를 보이는 원인으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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